Sample records for two-dimensional electrophoresis
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Proteômica na sepse: estudo piloto/ Proteomics in sepsis: a pilot study

Paiva, Rita Azevedo de; David, Cid Marcos; Domont, Gilberto Barbosa
2010-12-01

Resumo em português Na sepse ocorre desregulação da expressão gênica. Os marcadores genéticos revelam apenas o genótipo do indivíduo, não sendo afetados pelos processos biológicos decorrentes da ação do ambiente, estes expressos nas proteínas. Este estudo teve como objetivo alcançar maior compreensão sobre as bases moleculares da sepse. Para tal realizou a identificação e análise da expressão diferencial de proteínas no soro de paciente séptico em diferentes estágios de (mais) gravidade (sepse, sepse grave e choque séptico) através de técnicas proteômicas. Amostras de soro referentes a cada estágio da sepse foram colhidas e submetidas à eletroforese unidimensional em fitas com gradiente de pH imobilizado seguida de eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida 12,5%. Os géis obtidos foram corados, escaneados e analisados através do programa ImageMasterPlatinum. As proteínas expressas diferencialmente nos géis foram excisadas, digeridas com tripsina e identificadas através de espectrometria de massa. Foram identificadas 14 proteínas expressas diferencialmente entre os estágios da sepse, assim como uma proteína não expressa em todos os estágios, sugerindo a existência de um possível biomarcador. Foram elas: amilóide sérico A, apolipoproteína A-1 (2 isoformas), proteína dedo de zinco 222, albumina humana, PRO 2619, imunoglobulina de cadeia leve kappa região VLJ, imunoglobulina M monoclonal de aglutinação a frio e 7 inibidoras de proteases - alfa-1 antitripsina. Os resultados obtidos neste estudo piloto demonstram a participação das vias do complemento e coagulação, do metabolismo lipídico e da informação genética na sepse. A grande maioria de proteínas identificadas está envolvida no sistema imune com predomínio das proteínas inibidoras de proteases. Resumo em inglês Gene expression is disrupted by sepsis. Genetic markers can only reveal a patient's genotype, and they are not affected by environmental biological processes. These processes are expressed by proteins. This study was aimed to advance the insight into the molecular foundations of sepsis. It employed proteomic techniques to identify and analyze differential serum protein expressions taken from a patient throughout the stages of sepsis (sepsis, severe sepsis and septic shock (mais) ). Serum samples were collected at each stage of sepsis and submitted to one-dimensional electrophoresis, on gradient strips of immobilized pH, followed by two-dimensional 12.5% polyacrylamide gel electrophoresis. The gels obtained were stained, scanned and analyzed by the ImageMasterPlatinum program. Proteins that were differentially expressed in the gels were excised, digested with trypsin and identified through mass spectrometry. Fourteen differentially expressed proteins were identified throughout the stages of sepsis, as well as a protein that was not expressed in all stages, suggesting the potential existence of a biomarker. The differentially expressed proteins identified were: serum amyloid A, apolipoprotein A-1 (2 isoforms), zinc finger protein 222, human albumin, PRO 2619, immunoglobulin kappa light chain VLJ region, monoclonal immunoglobulin M cold agglutinin, 7 proteinase inhibitors - alpha-1 antitrypsin. The findings of this pilot study demonstrate the involvement of the complement and coagulation pathways, of the lipid metabolism and of genetic information in sepsis. The vast majority of proteins identified are involved in the immune system and the proteinase inhibitor proteins are predominant.

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Proteômica e sepse: novas perspectivas para o diagnóstico/ Proteomics and sepsis: new perspectives for diagnosis

Soares, Afonso J. C.; Santos, Marise F.; Chung, Janete; David, Cid Marcos N; Domont, Gilberto B.
2007-03-01

Resumo em português JUSTIFICATIVA E OBJETIVOS: O diagnóstico e o tratamento da sepse continuam a desafiar a todos; e desenvolver formas mais precisas de abordagem são absolutamente necessárias. O objetivo deste estudo foi empregar técnicas proteômicas, eletroforese bidimensional e espectrometria de massa, para verificar a expressão diferencial de proteínas, em soro de pacientes com sepse comparado com controles saudáveis. MÉTODO: Amostras de soro de 30 pacientes com sepse, causada p (mais) or vários tipos de microorganismos e de 30 controles saudáveis foram obtidas para análise. A seguir, foram submetidas a 2D-SDS-PAGE, comparação entre géis, seleção de spots para excisão e digestão com tripsina, sendo os peptídeos analisados por MALDI TOF-TOF. Os espectros obtidos foram processados (Mascot-matrixscience) para identificação de proteínas no NCBInr Data Bank. RESULTADOS: A análise das imagens mostrou vários spots com expressão diferencial nos géis dos pacientes com sepse em relação aos controles. A identificação de proteínas em alguns destes spots encontrou: precursor Orosomucoide 1, Apolipoproteína A-IV, precursor Apolipoproteína A-IV, precursor Haptoglobina, Haptoglobina, proteína Zinc finger, Amilóide sérico A-1, Transtiretina, Nebulin, Complemento C4, Alfa1-Antitripsina, produto protéico não nominado e outros. CONCLUSÕES: Soros de pacientes com diferentes tipos de sepse expressam padrão protéico característico por 2D-SDS-PAGE comparado com controles. A maior expressão foi de proteínas de fase aguda e lipoproteínas. É possível que no futuro, com a proteômica, criar painel diagnóstico de proteínas, encontrar novos biomarcadores e alvos para intervenção terapêutica na sepse. Esta é a primeira descrição, com a proteômica, das alterações na expressão protéica, no soro de pacientes com sepse. Resumo em inglês BACKGROUND AND OBJECTIVES: The diagnostic and treatment of sepsis continue to challenger all, and, more specific forms to approach are absolutely necessary. The objective of this study was to use proteomics techniques, two-dimensional electrophoresis and mass spectrometry, to verify the differential protein expression between serum of patients with sepsis and health controls. METHODS: Samples of serum the 30 patients with sepsis, caused for different types of microorganis (mais) ms and serum of 30 health controls were obtained for analysis. Next, were submitted to 2D-SDS-PAGE, gels compared, selection of spots for excision and digestion with trypsin, being the peptides analyzed for MALDI TOF-TOF. The obtained spectrums were processed (Mascot-matrix science) for protein identification in NCBInr Data Bank. RESULTS: Image analyses showed several spots with differential expressions in the gels of the patients with sepsis in relation to the controls. The protein identification of some of these spots founded: Orosomucoid 1 precursor, Apolipoprotein A-IV, Apolipoprotein A-IV precursor, Haptoglobin protein precursor, Haptoglobin, Zinc finger protein, Serum amyloid A-1, Transthyretin, Nebulin, Complement C4, Alpha1-Antitrypsin, Unnamed protein product and others. CONCLUSIONS: Serum of the patients with different types of sepsis express characteristic protein profiles by 2D-SDS-PAGE compared with controls. The most expressed were from acute phase proteins and lipoproteins. It is possible in the future, with proteomics, create diagnostic panel of proteins, finding news biomarkers and targets for therapeutic interventions in sepsis. This is a first description, with proteomics, of the alterations in protein expression, in serum of the patients with sepsis.

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Proteínas do plasma seminal de caprinos relacionadas com o índice pluviométrico e a qualidade do sêmen/ Proteins of goat seminal plasma related with precipitation index and semen quality

Souza, Andreia Fernandes de; Leitão, Maria da Conceição Gomes; Batista, André Mariano; Porto, Ana Lúcia Figueiredo; Lima Filho, José Luiz de; Guerra, Maria Madalena Pessoa
2009-07-01

Resumo em português O objetivo deste estudo foi identificar as proteínas do plasma seminal de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil que estão relacionadas ao índice pluviométrico e à qualidade do sêmen. O sêmen foi obtido pelo método de vagina artificial a partir de três reprodutores e foi avaliado quanto aos parâmetros macroscópicos e microscópicos. O perfil de proteínas do plasma seminal foi realizado por eletroforese bidimensional. Os parâm (mais) etros volume do sêmen, integridade do acrossoma e proteínas totais evidenciaram diferença significativa (P Resumo em inglês The aim of this study was to identify proteins in seminal plasma of goats raised in the Northeast of Brazil related with precipitation index and semen quality. Semen was obtained from three bucks and evaluated to the microscopic and macroscopic parameters. The profile of seminal plasma proteins was performed by analysis of two-dimensional electrophoresis. Volume, acrosome integrity and total proteins had significant difference (P(mais) 90.3% and 372g mL-1, respectively) and low (1.2mL, 80.3% and 494µg mL-1, respectively) precipitation index. It was detected during high and low precipitation index, 47 and 49 spots of proteins with molecular weight of 4 to 106kDa and 15 to 97kDa, and isoelectric point of 3.00 to 8.96, and 4.48 to 9.83, respectively. Only in the period of high precipitation index were observed groups of proteins with 13kDa and 45kDa. It can be concluded that semen of Alpine American goats raised in the Northeast of Brazil has best quality when obtained in the period of high precipitation index, which can be attributed to the presence of protein with 13kDa and 45kDa.

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Determinação do perfil protéico da membrana externa da Leptospira interrogans sorovariedade Hardjoprajitno/ Protein profile of the outer membrane of Leptospira interrogans serovar Hardjoprajitno

Lafetá, B.N.; Santos, S.; Silva, V.L.; Carvalho, M.A.R.; Diniz, C.G.; Silva, N.
2008-12-01

Resumo em português Estudou-se o perfil das proteínas da membrana externa (PME) da Leptospira interrogans sorovariedade Hardjoprajitno por meio da eletroforese bidimensional. Foram utilizadas técnicas de extração das PME com Triton x114 e precipitação com acetona. Os géis foram corados com nitrato de prata e as imagens analisadas para determinação da massa molecular das proteínas detectadas. Foram visualizadas 35 bandas protéicas, sendo que cinco delas se destacaram por estarem em (mais) maior quantidade: 22,54KDa (LipL22), 30/26KDa (LipL32), 34,41KDa (PME34), 42,75KDa (LipL41) e 58,59KDa (LipL63). Resumo em inglês The protein profile of the outer membrane of Leptospira interrogans serovar Hardjoprajitno was determined by two-dimensional gel electrophoresis. The outer membrane was extracted with Triton x 114 and the proteins were precipitated with acetone. The images were analyzed for the determination of the molecular weight of the detected proteins. Thirty-five spots for the proteins that are predominant in the outer membrane of this Leptospira were observed and five proteins were (mais) found in higher quantities: 22.54KDa (LipL22), 30/26KDa (LipL32), 34.41KDa (PME34) (2), 42.75KDa (LipL41), and 58.59KDa (LipL63).

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Caracterização de proteínas do plasma seminal e sua relação com parâmetros de qualidade do sêmen criopreservado em ovinos/ Characterization of seminal plasma proteins and its relationship with quality parameters of frozen semen in ram

Moura, Priscilla Pereira; Franco, Maurício Machaim; Silva, Thiago Antônio de Souza Nascimento; Rocha, Thales Lima; Leal, Diogo Ramos; Passos, Pedro Ivo Braga; Neves, Jairo Pereira
2010-05-01

Resumo em português Os objetivos deste trabalho foram analisar o perfil proteico do plasma seminal ovino e identificar proteínas relacionadas com a congelabilidade do sêmen que possam ser utilizadas como marcadores para essa característica. Foram utilizados os ejaculados de cinco reprodutores, nos quais foram realizadas avaliações espermáticas e dos quais os plasmas seminais obtidos por centrifugação foram submetidos à eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida. Foram ident (mais) ificados 92 spots, considerando todos os animais analisados. A avaliação dos dados obtidos evidenciou variações significativas nos resultados das análises do sêmen dos animais e uma variabilidade no perfil proteico no plasma seminal dos carneiros. As proteínas 03 (7,9kDa; pI 6,35), 23 (13,6kDa; pI 5,01) e 31 (21,4kDa; pI 4,75) se destacaram, por apresentarem maior expressão e relações com as características espermáticas. Sugere-se que mais estudos sejam realizados para verificar se as proteínas 03, 23 e 31 podem ser utilizadas como marcadores da capacidade criopreservadora do sêmen. Resumo em inglês The objective of this study was to analyze the protein profile of ram seminal plasma and to identify proteins associated with semen freezability, which could be used as marker for predicting this feature. Semen from five rams was used. The sperm analysis was held and the seminal plasma obtained by centrifugation was submitted to two-dimensional electrophoresis using acrylamide gel. Ninety two spots were identified considering the analyzed animals. The results showed a sig (mais) nificant variation among sperm analysis of the animals and variability in the protein profile of the seminal plasma of the rams. The proteins 03 (7.9kDa; pI 6.35), 23 (13.6kDa; pI 5.01) e 31 (21.4kDa; pI 4.75) stood out because they showed higher expression and because of its relationship with the sperm characteristics. It is suggested more studies to verify if proteins 03, 23 and 31 could be used as markers of semen freezability.

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