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Validação de escala optométrica regionalizada para pré-escolares: contribuição da enfermagem/ Validation of a regionalized optometric scale for preschool children: nursing contribution/ Validación de una escala optométrica regionalizada para preescolares: contribución de la enfermaría

Dantas, Rosane Arruda; Pagliuca, Lorita Marlena Freitag; Almeida, Paulo César de
2009-06-01

Resumo em português Desenvolveu-se escala de figuras regionalizadas (RAD). Objetivou-se validar a escala, avaliar a correlação entre os coeficientes da acuidade visual, verificar a associação entre os testes e verificar a concordância das medidas. Este é um estudo de validação de tecnologia, experimental, aleatório, triplo-cego, com 246 escolares. Enquanto a sensibilidade foi 88,6 RAD1 e 85,7 RAD2 para o olho direito (OD) e 78,6 e 92,9 para o esquerdo (OE), a especificidade do OD fo (mais) i 95,3 RAD 1 e 98,1 RAD2 e do OE 97,7 e 98,6, respectivamente. Quanto ao valor preditivo positivo, RAD1 foi 75,6 OD e 81,5 OE e RAD2 88,2 OD e 89,7 OE. Já o valor preditivo negativo em RAD1 foi de 98,0 OD e 97,3 OE e em RAD2 97,6 OD e 99,1 OE. Para correlação e associação no OD e OE, o valor considerado de p = 0,0001. O Alfa de Crombach foi 0,929. Houve significância entre o critério padrão e a escala. Resumo em espanhol Se desarrolló una escala de figuras regionalizadas (RAD). Los objetivos fueron: validar la escala; evaluar la correlación entre los coeficientes de la acuidad visual; verificar la asociación entre las pruebas; y, verificar la concordancia de las medidas. Se trata de un estudio de validación de tecnología, experimental, aleatorio, triple ciego, con 246 escolares. En lo que se refiere a la sensibilidad fue 88,6 RAD1 y 85,7 RAD2 para el ojo derecho (OD), 78,6 y 92,9 par (mais) a el izquierdo (OE), la especificidad del OD fue 95,3 RAD 1 y 98,1 RAD2 y del OE 97,7 y 98,6. En lo que se refiere al valor predictivo positivo, RAD1 fue 75,6 OD y 81,5 OE y RAD2 88,2 OD y 89,7 OE. Ya el valor predictivo negativo en RAD1 fue de 98,0 OD y 97,3 OE y en RAD 2 97,6 OD y 99,1 OE. Para correlación y asociación en el OD y OE, p = 0,0001. El Alfa de Cronbach fue de 0,929. Hubo significancia entre el criterio estándar y la escala. Resumo em inglês A regionalized figure scale (RAD) was developed. The objective was to validate the scale, evaluate the correlation between the visual acuity coefficients, verify the association between the tests, and verify the agreement between the measures. This is a triple-blind, experimental, random technology validation study performed on 246 students. Sensitivity was 88.6 RAD1 and 85.7 RAD2 for the right eye (RE), and 78.6 and 92.9 for the left eye (LE), whereas RE specificity was (mais) 95.3 RAD1 and 98.1 RAD2, and, 97.7 and 98.6 for the LE, respectively. As for the positive predictive value, RAD1 was 75.6 RE and 81.5 LE, and RAD2 88.2 RE and 89.7 LE. The negative predictive value in RAD1 was 98.0 RE and 97.3 LE, and in RAD2 97.6 RE and 99.1 LE. For the correlation and association in the RE and LE, p=0.0001. Cronbach's Alpha was 0.929. A statistically significant relation was found between the standard criterion and the scale.

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Efeito do treinamento contra-resistência isotônico com duas velocidades de movimento sobre os ganhos de força/ Effects of isotonic resistance training at two movement velocities on strength gains

Pereira, Marta Inez Rodrigues; Gomes, Paulo Sergio Chagas
2007-04-01

Resumo em português Considerando a necessidade de prescrever o treinamento adequadamente, o objetivo deste estudo foi comparar o efeito do treinamento contra-resistência, isotônico, a 0,44 e 1,75 rad·s¹ sobre os ganhos de força muscular. Quatorze voluntários saudáveis foram estratificados em grupos lento (GL: 0,44 rad·s¹; n = 8; 26 ± 7 anos; 66 ± 12 kg) e rápido (GR: 1,75 rad·s¹; n = 6; 28 ± 7 anos; 55 ± 9 kg) exercitando agachamento (mais) e supino reto (1 série, 8-10 RM, 3 x/semana, 12 semanas). Seis desses sujeitos fizeram parte de um grupo de comparação (GC: 25 ± 6 anos; 59 ± 13 kg) e não treinaram durante um período de controle de 12 semanas antecedendo o treinamento. O teste t dependente não mostrou diferenças nas variáveis medidas para GC. A ANOVA 2 x 2 com medidas repetidas mostrou ganhos significativos (P Resumo em inglês Considering the need to adequately prescribe training, the aim of this study was to compare the effect of isotonic resistance training at 0.44 and 1.75 rad·s-1 on gains in muscular strength. Fourteen healthy volunteers were stratified into slow (SG: 0.44 rad·s-1; n = 8; 26 ± 7 yr; 66 ± 12 kg) and fast (FG: 1.75 rad·s-1; n = 6; 28 ± 7 yr; 55 ± 9 kg) groups exercising squat and bench press (1 set, 8-10 RM, 3 x/wk, 12 weeks). (mais) Six of these subjects took part in a comparison group (CG: 25 ± 6 yr; 59 ± 13 kg), and did not train during a control period of 12 weeks preceding training. Paired t-test showed no differences in the measured variables for CG. Repeated measures 2 x 2 ANOVA showed significant (P

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Estudo sobre a eventual utilidade de raios gama na profilaxia da malária transmissível por transfusão de sangue/ A study on the fortuitons advantage of gamma irradiation in the prophylaxis of transmissible malaria by blood transfusion

Braz, Lúcia Maria Almeida; Amato Neto, Vicente; Carignani, Fábio Luís; Fernandes, Andréia Otaviani Di Pietro; Hamerschlak, Nelson; Zuanella, Laura Santoro; Silva, Maria de Fátima dos Santos; Souza, Iolanda Lima de; Okumura, Massayuki
1998-12-01

Resumo em português O estudo foi realizado com o objetivo de avaliar a eventual utilidade de raios gama na profilaxia da malária transmissível por transfusão de sangue, tendo sido, para isso, usados camundongos infectados pelo Plasmodium berghei. Na primeira fase, quando submetemos sangue deles retirado a 2.500 e 5.000rad, com associação ou não de metronidazol, não obtivemos sucesso, já que todos os animais antes sem a parasitose apresentaram parasitemia e morreram após inoculação (mais) do sangue irradiado. Porém, ocorreu êxito parcial na segunda fase, ao serem empregados 10.000 e 15.000rad, porquanto 20% e 40% dos roedores, respectivamente, embora tenham ficado infectados, sobreviveram, com posterior negativação quanto à presença do P. berghei. Resumo em inglês This study was carried out to evaluate the fortuitons advantage of using gamma irradiation in the prophylaxis of transmissible malaria by blood transfusion, with mice as the experimental model. In the first step, when the infected blood with Plasmodium berghei was submitted to 2,500rad and 5,000rad, with or without metronidazol, there was no success, because the animals presented parasitaemia and died after inoculation of irradiated blood. However, there was partial succe (mais) ss in the second step, when the infected blood received 10,000 and 15,000rad, and was inoculated in mice, which showed infection, and presented a survival rate of 20% and 40%, respectively, with later negativation of blood infected by P. berghei.

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Reologia de polietileno de alta densidade tenacificado com polietileno elastomérico/ Rheology of high density polyethylene toughened with elastomeric polyethylene

Guimarães, Maria José O. C.; Coutinho, Fernanda M. B.; Rocha, Marisa C. G.; Bretas, Rosario E. S.; Farah, Marcelo
2003-06-01

Resumo em português Neste trabalho foram estudadas as propriedades reológicas de polietileno de alta densidade (HDPE) tenacificado com dois tipos de elastômeros metalocênicos à base de poli(etileno-co-octeno) (EOC). Estes elastômeros são polímeros comerciais com diferenças quanto ao peso molecular, índice de fluidez e índice Dow de reologia (DRI). Misturas físicas de HDPE e EOC foram processadas em extrusora monorosca Wortex (L/D=32), à 230 °C e 50 rpm, utilizando percentagem (mais) mássica dos EOCs de 5% a 80%. As propriedades reológicas foram avaliadas em experimentos estacionários e dinâmicos a 190 °C e taxas de cisalhamento na faixa de 90 s-1 a 1500 s-1 e freqüências na faixa de 10-1 rad/s a 10² rad/s. As misturas HDPE/EOC exibiram pseudoplasticidade e comportamento reológico complexo. A complexidade do comportamento reológico foi acentuada com o aumento do peso molecular e da concentração de ramificações de cadeia longa (DRI) do EOC. Resumo em inglês In this work rheological properties of high density polyethylene toughened with two different grades of metallocene elastomers based on poly(ethylene-co-octene) were studied. These elastomers were commercial polymers differing in molecular weight, and Dow Rheology Index (DRI). Blends were processed in a Wortex single screw extruder (L/D=32), at 230 °C and 50 rpm, using mass fractions of EOC in the range from 5% to 80%. The rheological properties were evaluated in stea (mais) dy and dynamic experiments at 190 °C and shear rates in the range from 90 s-1 to 1500 s-1 with frequencies from 10-1 s-1 to 10-2 s-1. The blends exhibited pseudoplasticity and complex rheological behavior. The complex rheological behavior was intensified with increasing molecular weight and long chain branching proportion (DRI) in the EOC elastomers.

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Relação entre a velocidade, a agilidade e a potência muscular de futebolistas profissionais/ Association between speed, agility and muscular power of pro soccer players

Rebelo, António N.; Oliveira, José
2006-10-01

Resumo em português A velocidade, agilidade e a potência muscular são qualidades importantes para a performance física do futebolista. No presente estudo, avaliou-se o desempenho de futebolistas em testes de terreno e de laboratório para as referidas capacidades e determinou-se a força de associação entre elas. Foram avaliados 23 futebolistas profissionais participantes na Super Liga de Futebol Portuguesa, aos quais foram aplicados os seguintes testes: velocidade em 15m (V15), velocid (mais) ade em 35m (V35), agilidade (AGI) e potência máxima(MP) em dinamómetro isocinético (Biodex - System 3 , NY, USA). A força de associação entre as medidas dos testes V15, V35 e AGI revelou ser moderadamente elevada a elevada (r=0,60 a 0,86). A MP dos músculos extensores e flexores do joelho mostrou uma correlação moderada com a performance no V15 e no AGI, mas apenas na velocidade angular mais alta (6.28 rad.s-1). Os resultados do presente trabalho sugerem que a MP é fundamental para o desempenho nos testes V15 e AGI. A determinação da MP em dinamómetro isocinético deve ser obtida em velocidades angulares tão elevadas quanto o instrumento o possibilite. Finalmente, embora os testes não se substituam uns aos outros, os testes V15 e AGI estarão mais próximos nos atributos que cada um deles avalia. Resumo em inglês Speed, agility and muscle power are important physical abilities for soccer player performance. The aim of this study was to evaluate the above-mentioned abilities and to determine the power of association between them, using the results obtained by soccer players in field and laboratory tests.Twenty three professional soccer players participating in Portuguese First League were evaluated in the following tests: 15m sprint test (V15), 35m sprint test (V35), agility (AGI) (mais) and isokinetic strength test (Biodex - System 3, NY, USA) from which maximal power (MP) was estimated. The power of association between V15, V35 and AGI was moderate high to high (r= 0,60 to 0,86). MP of knee extensors and flexors muscles was found to correlate moderately with the performance in V15 and AGI, but only at higher angular velocities (6.28 rad.s-1). The results of the present study suggest that MP has an important contribution to V15 and AGI performance. MP evaluation in isokinetic dynamometers must be determined at high angular velocities. Finally, although the tests couldn’t be used interchangeably, V15 and AGI seem to have many attributes in common.

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Avaliação de Hb A2 e Hb F em doadores de sangue de região malarígena da Amazônia Oriental brasileira por HPLC/ Evaluation of Hb A2 and Hb F by HPLC in blood donors from the malaria endemic region of Eastern Amazon of Brazil

Souza, Wanessa C.; Torres, Felipe R.; Salvador, Ana R.; Távora, Juvanete A.; Machado, Ricardo L. D.; Bonini-Domingos, Cláudia R.
2003-01-01

Resumo em inglês In malaria endemic regions of Africa, resistance to infection by Plasmodium has been observed in under 6-month-old children, when there are higher fetal hemoglobin (Hb F) levels. Research performed in the São José do Rio Preto region, central-east Brazil, reported increased levels of Hb F in blood donors. The purpose of this work was to evaluate the A2 hemoglobin (Hb A2) and Hb F concentrations in blood donors deriving from the Brazilian malaria endemic region. Forty-fi (mais) ve blood donor samples from Macapá, from patients with varying genders, ages and ethnic origins, were collected by venous puncture after informed consent was obtained. The samples were analyzed by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) - System Variant (Bio-Rad). The HPLC demonstrated sensitivity and rapidity in the identification and measurement of the hemoglobins and gave precise results. Moreover, it provided measurement of hemoglobin variants, even when they were present in small amounts, providing a diagnosis of hemoglobinopathies. Hb F levels above the normal were observed in 33.3% of the analyzed samples. The presence of increased Hb F can suggest resistance to infection by Plasmodium falciparum, as there have been reports that infected red blood cells interfere in the development of the parasite.

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Efeito do ethephon na qualidade da uva 'Niagara Rosada' (Vitis labrusca L.), produzida na entressafra, na região de Jales-SP/ The effect of ethephon in the quality of grapes 'Niagara Rosada' (Vitis labrusca L.) produced in the region of Jales-SP

Pereira, Fernando Mendes; Fracaro, Antonio Augusto
2004-08-01

Resumo em português Na região de Jales (SP), a produção de uva 'Niagara Rosada' obtida de videiras podadas em períodos de ocorrência de baixas temperaturas é, em geral, insatisfatória, apresentando pequena produtividade e cachos com qualidade inadequada à comercialização. Essa qualidade da produção está intimamente relacionada à efetiva brotação. Assim, este trabalho teve o objetivo de avaliar a aplicação do ethephon em diferentes doses antes da poda, visando a melhorar a b (mais) rotação e a qualidade dos cachos, em seis experimentos, durante os anos de 2001 e 2002. Foram testadas as doses de 0; 3; 6 e 9 L.ha-1 de ethephon aplicado via foliar. Concluiu-se que o uso de ethephon, na dose de 9 L.ha-1, proporcionou cachos e bagas maiores e com maiores pesos, comprimento e largura, melhorando o aspecto dos mesmos. A aplicação de ethephon não afetou os teores de sólidos solúveis totais e a acidez total titulável, não alterando o sabor da uva 'Niagara Rosada'. Resumo em inglês In the region of Jales (SP) the 'Niagara Rosada' grape yield obtained of grapevines pruned in periods of occurrence of low temperatures is in general unsatisfactory, presenting small yield and clusters with inadequate quality to commercialization. This quality of the yield is related to effective sprouting. Thus, this work rad the objective to evaluate the application of ethephon in different levels before the pruning, aiming the improvement of sprouting and clusters qual (mais) ity, in six experiments during the years of 2001 and 2002. Levels of 0, 3, 6 and 9 L.ha-1 of ethephon were applied by leaf. It was concluded that the use of ethephon, in level of 9 L.ha-1, provided bigger clusters and berries with greater weight, length and width, improving their aspect. The application of ethephon did not affect the tenor of total soluble solid and the titulabre total acidity, not modifying the flavor of grape 'Niagara Rosada'.

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Efeito de baixas doses de radiação X em feridas suturadas e não suturadas - estudo experimental em ratos/ Effect of low doses of X-irradiation in sutured and nonsutured wounds - experimental study in rats

BÓSCOLO, Frab Norberto; ALMEIDA, Solange Maria de; VIZIOLI, Mário Roberto; LOURENÇO, Roberto Martins; MONTEIRO, Solange Aparecida Caldeira
2000-12-01

Resumo em português O presente trabalho avaliou o efeito de baixas doses de radiação X no processo de reparação tecidual em feridas suturadas e não suturadas em ratos. Para tanto, foi produzida nos animais uma ferida medindo 20 x 5 mm, sendo suturada ou não, dividindo-se os animais em 4 grupos: controle sem sutura, irradiado sem sutura, controle com sutura e irradiado com sutura. Os animais irradiados foram, no momento da irradiação, protegidos com um avental de chumbo de 2 mm de esp (mais) essura com uma abertura, a qual permitia que fosse exposta somente a ferida cirúrgica. Cada animal sofreu 18 segundos de irradiação, totalizando 7,4 rad. O processo de reparação tecidual foi avaliado pela coloração por hematoxilina-eosina, verificando-se a morfologia do tecido de granulação e a impregnação argêntica para observação da síntese de colágeno, através da microscopia de polarização. Os resultados mostraram que a radiação, apesar de ter causado atraso, não impediu a reparação tecidual, sendo que o grupo que sofreu irradiação e não foi suturado mostrou maior retardo, quando comparado aos outros grupos. Resumo em inglês The present work evaluated the effect of low doses of X-irradiation on the repairing process of sutured and nonsutured skin wounds in rats. For that, rats underwent a surgical proceedure, in which a 20 x 5-millimeter rectangular wound approximately 2-millimeter-deep was made in the dorsal region of each animal, and were divided in four groups: nonirradiated nonsutured; irradiated nonsutured ; nonirradiated sutured and irradiated sutured. The animals under irradiation were (mais) protected, during exposure, with a 2-millimeter-thick lead apron in such a way that only the incision was irradiated. Each animal was submitted to 18 seconds of exposure, undergoing a total of 7.4 rads. The evaluation of the effects of X-rays on the repairing process was carried out through microscopic observation by means of hematoxylin-eosin staining for morphological evaluation, and silver impregnation under polarized light for the observation of collagen synthesis. The results have shown that X-irradiation has caused delay in the repairing process, but it did not stop its development. The irradiated nonsutured group was considered to show the greater delay when compared with the other groups.

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Comportamento respiratório e qualidade pós-colheita de graviola (Annona muricata L.) 'morada' sob temperatura ambiente/ Respiratory behavior and postharvest quality of 'morada' soursop (Annona muricata L.) at room temperature

Lima, Maria Auxiliadora Coêlho de; Alves, Ricardo Elesbão; Filgueiras, Heloísa Almeida Cunha; Enéas-Filho, Joaquim
2003-04-01

Resumo em português Objetivou-se avaliar alterações físicas e físico-químicas, relacionando-as às taxas respiratória e de liberação de etileno, durante a maturação da graviola-'Morada'. Frutos colhidos na maturidade fisiológica foram armazenados (23,4 ± 1,1ºC e 81,8 ± 10,6% UR) e avaliados aos 0; 1; 2; 3; 4 e 6 dias, quanto a: atividade respiratória (RS), liberação de etileno (ET), perda de matéria fresca, cor da casca e da polpa, firmeza, pH, acidez total (mais) titulável (ATT), sólidos solúveis totais (SST) e açúcares solúveis totais (AST). Utilizou-se o delineamento experimental inteiramente casualizado, com quatro repetições. Aos dois dias, iniciou-se rápido aumento na RS, resultando no primeiro pico (197,60mg CO2·kg-1·h-1), que foi seguido por queda e uma fase lag. Ao término desta, iniciou-se o aumento climatérico (pico = 298,82mg CO2·kg-1·h-1). ET só foi detectada por ocasião do primeiro pico respiratório, atingindo o máximo aos quatro dias. A cor da casca tornou-se mais clara, enquanto na polpa se observou apenas redução da luminosidade. Houve coincidência entre o primeiro aumento na RS, o pico de ET e as mudanças mais significativas na firmeza, na ATT e nos teores de SST e AST. Durante o período, a firmeza diminuiu de 60 para 0,9N, e a ATT aumentou de 0,18 para 0,88% de ácido cítrico. Resumo em inglês It was aimed to evaluate physical and physico-chemical changes during soursop 'Morada' maturation at room temperature and related them to respiration rate and ethylene production. Fruits harvested at physiological maturity were stored (23,4 ± 1,1ºC and 81,8 ± 10,6% RH) and evaluated at 0, 1, 2, 3, 4, and 6 days, according to: respiration rate (RS), ethylene production (ET), fresh weight lost, skin and pulp color, firmness, pH, total titrable acidity (TT (mais) A), total soluble solids (TSS) and total soluble sugars (TS). The experimental design was a completely randomized one with four replications. There was a fast increase in RS at two days that resulted in the first peak (197,60mg CO2·kg-1·h-1) that was followed by a decay and a lag phase. When that phase rad finished, it began the climateric raise (climateric peak = 298,82mg CO2·kg-1·h-1). ET was detected only when the first respiratory peak occurred and reached the maximum at the fourth day. The skin color became bright green while it was observed a decrease just on lightness in the pulp. There was a coincidence among the first increase on RS, the peak of ET and the most significant changes on firmness, TAA, TSS content and TS content. During this period, firmness reduced from 60 to 0,9N and TTA increased from 0,18 to 0,88% of citric acid.

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Utilização de resíduo agroindustrial de abacaxi desidratado em dietas para caprinos em crescimento: digestibilidade e desempenho/ Use of dehydrated pineapple by-product in diets for growing goats: digestibility and performance

Correia, Marta Xavier de Carvalho; Costa, Roberto Germano; Silva, José Humberto Vilar da; Carvalho, Francisco Fernando Ramos de; Medeiros, Ariosvaldo Nunes de
2006-08-01

Resumo em português Avaliou-se o efeito da substituição do feno de coastcross (Cynodon dactylon) pelo resíduo agroindustrial de abacaxi desidratado sobre o desempenho, a digestibilidade aparente e o consumo de nutrientes digestíveis em caprinos em crescimento. Foram utilizadas 24 fêmeas mestiças Saanen x Crioula com peso vivo médio inicial de 19,2 kg, em um delineamento inteiramente casualizado, com quatro tratamentos, representados pelos níveis de 0, 33, 66 e 100% de inclusão de re (mais) síduo agroindustrial de abacaxi desidratado (RAD) em substituição ao feno de coastcross. Não houve efeito dos níveis de substituição sobre os coeficientes de digestibilidade aparente da MS, PB e FDN. A digestibilidade da MO e celulose (CEL) aumentaram linearmente, enquanto a da FDA apresentou efeito quadrático. Os consumos médios de nutrientes digestíveis, em g/kgPV0,75, para os níveis de substituição de 0, 33, 66 e 100% foram, respectivamente, de 62,35; 63,58; 59,53 e 54,47 (MS), 60,40; 61,51; 57,94 e 51,83 (MO), 7,91; 7,86; 7,27 e 6,44 (PB), 24,85; 22,94; 21,61 e 18,75 (FDN), 7,62; 5,30; 5,96 e 7,11 (FDA) e 37,62; 27,83; 32,91 e 31,98 (CEL), resultando em ganhos de peso de 204, 215, 198 e 196 g/dia. A utilização de resíduo agroindustrial de abacaxi desidratado em rações para caprinos melhora os coeficientes de digestibilidade de MO, CEL e FDA e proporciona ganhos de peso satisfatórios em fêmeas em crescimento. Resumo em inglês The objective of this study was to evaluate the effect of replacing coastcross (Cynodon dactylon) hay with a dehydrated pineapple by-product (DPB) on performance, apparent digestibility, and intake of digestible nutrients in growing goats. Twenty-four crossbred Saanen x Criola female goats averaging 19.2 kg of body weight (BW) at the beginning of the trial were used in a completely randomized design. Animals were assigned to one of the following four treatments: 0, 33, 66 (mais) , or 100% of DPB in the diet. Replacing coastcross hay with DPB did not significantly affect the apparent digestibility of dry matter (DM), crude protein (CP), and neutral detergent fiber (NDF). However, the apparent digestibility of both organic matter (OM) and cellulose (CEL) increased linearly while that of acid detergent fiber (ADF) showed a quadratic effect with the increasing levels of DPB in the diet. The average intake of digestible nutrients, expressed in g/kg BW0.75, for treatments with 0, 33, 66, or 100% of dietary DPB were in this order: 62.35, 63.58, 59.53 and 54.47 for DM; 60.40, 61.51, 57.94 and 51.83 for OM; 7.91, 7.86, 7.27 and 6.44 for CP; 24.85, 22.94, 21.61 and 18.75 for NDF; 7.62, 5.30, 5.96 and 7.11 for ADF; and 37.62, 27.83, 32.91 and 31.98 for CEL. Replacing coastcross hay by DPB in the diet improved the apparent digestibility of OM, CEL, and ADF and resulted in BW that was considered satisfactory for growing female goats.

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Extração de DNA de materiais de arquivo e fontes escassas para utilização em reação de polimerização em cadeia (PCR)/ Methods of DNA extraction from archived materials and rare sources for utilization in polymer chain reaction

Barea, Jaqueline A.; Pardini, Maria Inês M. C.; Gushiken, Tsieko
2004-12-01

Resumo em português Este trabalho visou a comparação de cinco métodos diferentes de extração de DNA de materiais de arquivo (tecidos incluídos em parafina, esfregaços de sangue periférico - corados e não corados com Leishman, lâminas com mielogramas, gotas de sangue em Guthrie Card) e de fontes escassas (células bucais, um e três bulbos capilares e 2 mL de urina), para que fossem avaliadas a facilidade de aplicação e a facilidade de amplificação deste DNA pela técnica da rea (mais) ção de polimerização em cadeia (PCR). Os métodos incluíram digestão por proteinase K, seguida ou não por purificação com fenol/clorofórmio; Chelex 100® (BioRad); Insta Gene® (BioRad) e fervura em água estéril. O DNA obtido foi testado para amplificação de três fragmentos gênicos: Brain-derived neutrophic factor (764 pb), Factor V Leiden (220 pb) e Abelson (106 pb). De acordo com o comprimento do fragmento gênico estudado, da fonte potencial de DNA e do método de extração utilizado, os resultados caracterizaram o melhor caminho para padronização de procedimentos técnicos a serem incluídos no manual de Procedimentos Operacionais Padrão do Laboratório de Biologia Molecular do Hemocentro - HC - Unesp - Botucatu. Resumo em inglês The present work aimed at comparing five different methods of DNA extraction of samples from archived materials (paraffin-embedded tissues, peripheral blood smears - stained or not with Leishman, aspired bone marrow smears and Guthrie card bloodspots) and from rare sources (oral cells, one and three capillary bulbs, 2 mL of urine), to evaluate the ease of application and the possibility of amplification of this DNA by the polymerization chain reaction (PCR) technique. The (mais) methods included proteinase K digestion - followed or not by phenol/chloroform purification, Chelex 100® (BioRad), InstaGene® (BioRad) and boiling in the sterile water. The DNA obtained was tested for amplification of three genic fragments: the brain-derived neutrophic factor gene (764 bp), the Factor V Leiden gene (220 bp) and the Abelson gene (106 bp). According to the gene fragment length studied, the DNA potential source and the extraction method used, the results characterized the best way to standardize technical procedures to be included in the Standard Operational Procedure Manual of the Molecular Biology Laboratory of the Blood Center in the Medicine School of Unesp, Botucatu, Brazil.

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Avaliação de dois métodos de extração de DNA de material parafinado para amplificação em PCR/ Evaluation of two methods of DNA extraction from paraffin-embedded material for PCR amplification

Simonato, Luciana Estevam; Garcia, José Fernando; Nunes, Cáris Maroni; Miyahara, Glauco Issamu
2007-04-01

Resumo em português INTRODUÇÃO: Diversos métodos para extração de DNA a partir de tecidos biológicos inclusos em parafina encontram-se descritos na literatura, sendo o sucesso desse procedimento de grande importância para a realização de métodos moleculares de diagnóstico empregando a reação em cadeia da polimerase (PCR). OBJETIVO: Este estudo avaliou dois métodos de extração de DNA de material parafinado, visando à amplificação do DNA genômico pela técnica da PCR. MATER (mais) IAL E MÉTODO: Foram utilizadas 35 amostras de casos de carcinoma epidermóide de assoalho bucal diagnosticados e tratados no Centro de Oncologia Bucal da Universidade Estadual Paulista (Unesp). Os métodos de extração de DNA avaliados incluíram: 1. digestão com proteinase K seguida por purificação com Chelex 100® (BioRad); e 2. sistema QIAamp DNA minikit® (Qiagen). O DNA obtido foi quantificado por espectrofotometria e amplificado pela técnica da PCR, utilizando-se oligonucleotídeos iniciadores para betaglobina. RESULTADOS: A concentração de DNA obtido do material extraído com o primeiro método apresentou média de 120,62 ng/µl com razão entre as leituras das absorbâncias 260/280 variando de 0,8 a 1,41. Para as amostras extraídas com o segundo procedimento, o rendimento médio foi de 67,38 ng/µl, no entanto a razão 260/280 variou entre 1,11 e 2,53. O material foi submetido à PCR e, das 35 amostras extraídas com cada método, respectivamente, 29 e 30 apresentaram sinal positivo. CONCLUSÃO: Os dois métodos utilizados para obtenção de DNA de material parafinado apresentaram desempenho semelhante, revelando que ambos têm potencial para auxiliar na prática da biologia molecular diagnóstica, assim como no estudo diagnóstico retrospectivo em material parafinizado. Resumo em inglês BACKGROUND: There are several methods for DNA extraction from formalin-fixed paraffin-embedded tissues reported in the literature. High success rate on this procedure is important for the use of molecular diagnostic methods based on the polymerase chain reaction (PCR). OBJECTIVE: Two methods of DNA extraction from paraffin-embedded samples were tested aiming at PCR amplification of genomic DNA. MATERIAL AND METHOD: Thirty-five samples were obtained from patients with squa (mais) mous cell carcinoma of mouth floor treated at the Oral Oncology Center in Universidade Estadual Paulista. The DNA extraction methods included: 1. proteinase K digestion followed by Chelex 100® (BioRad) purification and 2. QIAamp DNA minikit® system (Qiagen). Purified DNA was quantified by spectrophometry and a beta-globin gene fragment was amplified using PCR. RESULTS: The DNA concentration from samples applied to the first method presented an average of 120.62 ng/µl and absorbance ratio 260/280 varying between 0.8 and 1.41. From the samples extracted using the second procedure, the mean DNA concentration was 67.38 ng/µl, with absorbance ratio varying between 1.11 and 2.53. DNA samples were submitted to PCR and from 35 samples extracted with both methods, respectively, 29 and 30 were successfully amplified for the beta-globin gene. CONCLUSION: Both methods used to obtain genomic DNA from formalin-fixed paraffin-embedded tissues presented similar performance, revealing their potential to be included in diagnosis of molecular biology, as well as in retrospective studies using archived paraffin-embedded samples.

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