Sample records for protoplasts
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1

Isolamento e eficiência de plaqueamento de protoplastos de citros/ Isolation and platting efficiency of citrus protoplasts

COSTA, MARIA ANGÉLICA PEREIRA DE CARVALHO; MOURÃO FILHO, FRANCISCO DE ASSIS ALVES; MENDES, BEATRIZ MADALENA JANUZZI
2002-08-01

Resumo em português As recentes ferramentas biotecnológicas para o melhoramento in vitro de citros incluem a hibridação somática por fusão de protoplastos. A otimização dos protocolos de isolamento, plaqueamento e cultura de protoplastos, fundamental para maior eficiência na produção de híbridos somáticos, foi avaliada em 11 variedades cítricas. As soluções enzimáticas testadas foram: 1. celulase Onozuka RS, 1%; macerase R-10, 1%, pectoliase Y-23, 0,2%; 2. celulase Onozuka R- (mais) 10, 0,2 %; macerase R-10, 0,3%; driselase, 0,1%; 3. celulase Onozuka R-10, 1%; macerase R-10, 0,2%; driselase, 0,1%. O plaqueamento dos protoplastos foi realizado em meio de cultura EME 0,7 M, nas densidades de 2 x 10(4); 5 x 10(4); 10(5); 2 x 10(5) e 3 x 10(5) protoplastos.mL-1, no escuro, a 25 ± 1°C. A solução enzimática 1 possibilitou melhor rendimento no isolamento de protoplastos para a maioria das variedades, exceto para o limão-'Cravo', onde o melhor rendimento foi obtido na solução enzimática 3, e para as laranjas-doces 'Valência' e 'Succari', que apresentaram maiores rendimentos na solução enzimática 2. A eficiência final de plaqueamento, avaliada aos 90 dias de cultivo, foi superior nas densidades de 10(5) e 2 x 10(5) protoplastos.mL-1, para todas as variedades. O desenvolvimento de embriões somáticos foi observado em todas as variedades, exceto para tangor 'Murcote'. Resumo em inglês Recent biotechnological tools for citrus improvement include somatic hybridization by protoplast fusion. The optimization of protoplast isolation, platting and culture, essential for hybrid regeneration, was evaluated in 11 citrus varieties. The enzymatic solutions tested were: 1. cellulase Onozuka RS, 1%; macerozyme R-10, 1%, pectoliase Y-23, 0.2%; 2. celullase Onozuka R-10, 0.2 %; macerozyme R-10, 0.3%; driselase, 0.1%; 3. celulase Onozuka R-10, 1%; macerase R-10, 0.2%; (mais) driselase, 0.1%. Protoplasts were cultured in EME 0.7 M at densities of 2 x 10(4); 5 x 10(4); 10(5); 2 x 10(5) e 3 x 10(5) protoplasts.mL-1, in darkness, at 25 ± 1°C. The enzymatic solution 1 resulted in better protoplast isolation for most of the varieties studied, except for Rangpur lime, which presented higher isolation efficiency on enzymatic solution 3, and for 'Valencia' and 'Succari' sweet oranges, with better results were obtained on enzymatic solution 3. Final platting efficiency, evaluated 90 days after culture, was higher at the densities of 10(5) e 2 x 10(5) protoplasts.mL-1, for all varieties. Somatic embryogenesis was observed for all varieties, except for 'Murcott' tangor.

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Isolamento e regeneração de protoplastos de Magnaporthe grisea/ Isolation and regeneration of Magnaporthe grisea protoplasts

Marchi, Carlos Eduardo; Brommonschenkel, Sérgio Hermínio; Queiroz, Marisa Vieira de; Mizubuti, Eduardo Seiti Gomide
2006-09-01

Resumo em português Protoplastos são ferramentas biológicas importantes para pesquisas em fungos filamentosos, sendo empregados intensamente em transformação genética. O isolamento de protoplastos de Magnaporthe grisea foi facilitado com Novozym 234, contudo, este complexo enzimático encontra-se indisponível no mercado. Assim, objetivou-se comparar a eficiência de enzimas líticas disponíveis comercialmente na obtenção de protoplastos de M. grisea. Paralelamente, analisaram-se est (mais) abilizadores osmóticos, tempos de digestão e freqüência de regeneração. Maior produção de protoplastos foi obtida com o uso simultâneo de Lysing Enzymes e Cellulase Onozuka R-10. O uso de 10 ou 15 mg de cada complexo enzimático, em 3 mL de estabilizador osmótico, resultou em maior liberação de protoplastos. O melhor estabilizador osmótico foi MgSO4 1,2 M / NaH2PO4 0,01 M, pH 5,8, seguido por MgSO4 0,8 M / NaH2PO4 0,01 M, pH 5,8. O isolamento de protoplastos foi monitorado a cada 60 minutos, atingindo o máximo após incubação por 3 a 6 horas. No entanto, maior freqüência de regeneração (19,4%) foi registrada para protoplastos obtidos após 3 horas de hidrólise enzimática. Resumo em inglês Protoplasts are important biological tools in filamentous fungi research. Fungal protoplasts have been extensively used in experiments with genetic transformation. Protoplastization of Magnaporthe grisea was accomplished with Novozym 234, however, this enzymatic complex is no commercially available for purchase. Thus, the efficiency of several other commercial enzymes in M. grisea protoplasts preparation was investigated. At the same time, osmotic buffer, digestion time a (mais) nd regeneration rate were also analyzed. The highest protoplasts production was obtained with Lysing Enzymes plus Cellulase Onozuka R-10. The use of 10 or 15 mg of each enzymatic complex in 3 mL of osmotic buffer was most effective for the protoplasts yields. The best osmotic buffer was MgSO4 1.2 M / NaH2PO4 0.01 M, pH 5.8, followed by MgSO4 0.8 M / NaH2PO4 0.01 M, pH 5.8. The M. grisea protoplasts yield, evaluated at each 60 min, increased with 3 to 6 hours of incubation. However, the highest regeneration frequency (19.4%) was recorded for protoplasts obtained with 3 hours of enzymatic hydrolyse.

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Determinação da viabilidade de protoplastos irradiados de laranja 'pêra'/ Determination of viability of irradiated 'pera' orange protoplasts

Cristofani, Mariângela; Mendes, Beatriz Januzzi; Tulmann Neto, Augusto; Ando, Akihiko
1993-01-01

Resumo em português Estudou-se a viabilidade de protoplastos de laranja 'Pêra' (Citrus sinensis Osbeck), submetidos a diferentes doses de radiação gama, com a finalidade de determinar a dose letal (DL) 50 - dose que causa 50% de letalidade. Empregou-se a análise por fluorescência, utilizando-se o corante diacetato de fluoresceína (DAF): suas diluições testadas - 1:50; 1:100 e 1:150 - não mostraram diferenças significativas entre si, tendo sido possível o uso da maior diluição pa (mais) ra a determinação da viabilidade dos protoplastos. A viabilidade mostrou-se inversamente proporcional às doses de radiação gama e a DL 50 foi cerca de 41 Gy. Os protoplastos não irradiados apresentaram até 84% de viabilidade, quando esta foi estudada logo após o isolamento daqueles. Resumo em inglês The viability of 'Pera' orange (Citrus sinensis Osbeck) protoplasts, submitted to different dosages of Gamma radiation, was studied to determine the lethal dose (DL) 50. The analysis by fluorescence was employed using Fluorescein diacetate (FDA). The dilutions of FDA (1:50; 1:100 and 1:150) did not show any statistical difference: Then it was possible to use the 1:150 dilution in order to determine the protoplasts viability. The viability was inversaly proportional to Gam (mais) ma radiation and the DL 50 was about 41 Gy. The non-irradiated protoplasts had their viability up to 84% when tested as soon after their isolation.

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Efeito de herbicidas sobre a polimerização dos microtúbulos e indução de micronúcleos em protoplastos de Helianthus maximiliani/ Effect of herbicides on the polymerization of the microtubule and induction of micronuclei in Helianthus maximiliani protoplasts

BINSFELD, PEDRO C.; PETERS, JOSÉ A.; SCHNABL, HEIDE
2000-01-01

Resumo em português Com o objetivo de estudar a cinética da despolimerização dos microtúbulos e a dinâmica da indução de micronúcleos, usaram-se dois herbicidas com ação antimitótica, amiprofós-metil (APM) e oryzalin (ORY), em células de Helianthus maximiliani. A aplicação de ambos os herbicidas em células com ativo crescimento resultou num elevado número de células com micronúcleos, em virtude das modificações mitóticas causadas pela ausência de microtúbulos. Primeir (mais) amente, cromossomos isolados ou grupos de 2 ou mais cromossomos espalharam-se pelo citoplasma. Duas a três horas após a aplicação dos herbicidas, os microtúbulos, estavam despolimerizados e os cromossomos metafásicos condensaram-se, formando diretamente os micronúcleos sem ter havido a divisão do centrômero e a separação das cromátides. A concentração mais eficiente de ORY foi 20 µM, ao passo que para APM foi 60 µM, para um período de incubação de 36 e 48 h respectivamente. O prolongamento do período de tratamento elevou a freqüência de micronúcleos deformados, bem como aumentou a morte celular. A adição de citocalasina-B (CB) (20 µM), após 24 h da aplicação dos herbicidas, aumentou significativamente a micronucleação e estabilização dos micronúcleos nas células. O controle dos microtúbulos de células em suspensão torna-se uma ferramenta eficiente para a indução de micronúcleos, bem como representa um método elegante para a transferência genômica parcial. Resumo em inglês In order to verify the kinetics of microtubule depolymerization and dynamics of micronuclei induction, two anti-mitotic herbicides, Amiprophos-methyl (APM) and Oryzalin (ORY), were added to dividing cells of Helianthus maximiliani. The addition of both herbicides to actively dividing cells resulted in a high number of cells with micronuclei through modification of mitosis. Single chromosomes and groups of 2 or more chromosomes were scattered over the cytoplasm. After 2-3 (mais) h of herbicide application, microtubules were depolymerized and the metaphase chromosomes changed directly into micronuclei, without centromere division and chromatid separation. The most efficient concentrations were 20 µM ORY and 60 µM APM when incubated for 36 and 48 h, respectively. When the treatment duration was increased, the frequency of cells with deformed micronuclei as well as cell death increased. The presence of citochalasina-B (CB) (20 µM) after 24 h of herbicide application increased the frequency of micronucleation and stabilization of the micronuclei in the cells significantly. The control of microtubules using anti-mitotic toxins provides an efficient tool for micronuclei induction as well as representing an elegant method for partial genome transfer.

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5

OBTENÇÃO DE PLANTAS DE LIMÃO CRAVO (Citrus limonia Osbeck) E TANGERINA CLEÓPATRA (Citrus reshni Hort.) A PARTIR DO CULTIVO DE PROTOPLASTOS DE SUSPENSÃO CELULAR/ PLANT REGENERATION OF 'RANGPUR' LIME (Citrus limonia Osbeck) AND 'CLEÓPATRA' MANDARIN (Citrus reshni Hort.) THROUGH PROTOPLASTS OF CELL SUSPENSION

Latado, Rodrigo Rocha; D'utra Vaz, Fernando Berlink; Tulmann Neto, Augusto
1999-01-01

Resumo em português Este trabalho descreve uma metodologia para a regeneração de plantas de tangerina 'Cleópatra' e limão 'Cravo', a partir do cultivo de protoplastos de suspensão celular. Para tal, calos nucelares foram induzidos em meio contendo BAP e cultivados em meio sem reguladores de crescimento. Protoplastos foram isolados de suspensões celulares e cultivados em gotas de agarose, com densidade de 2 X 105 protoplastos.ml-1. O meio MT, contendo ácido giberélico e água de coco, (mais) foi eficiente na germinação de embriões somáticos. Os métodos de aclimatação de plantas testados apresentaram baixa eficiência. Como resultado final, 17 plantas adaptadas de tangerina e 8 de limão foram obtidas. Resumo em inglês The present research describes the regeneration of 'Cleópatra' mandarin and 'Rangpur' lime plants from cell suspension protoplasts. Nucelar calli were induced on a medium containing BAP and maintained on growth regulator free medium. Protoplasts were isolated from embryogenic suspension and plated at a concentration of 2 X 105 protoplasts.ml-1, on agarose droplets. The MT medium with gibberellic acid and coconut water was efficient to stimulate somatic embryo conversion. (mais) Rooted plants acclimation had low efficiency. Seventeen mandarin plants and eight lime plants were obtained.

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Obtenção de protoplastos do fungo filamentoso Aspergillus ochraceus/ Production of protoplasts from the filamentous fungus Aspergillus ochraceus

Almeida, Ana Paula Morais Martins; Dias, Eustáquio Souza; Pereira, Ricardo Tadeu Galvão; Toledo, Rômulo César Clemente; Pfenning, Ludwig Heinrich
2008-08-01

Resumo em português A obtenção de protoplastos é uma ferramenta importante para a transformação genética de fungos. Neste trabalho foi estudada a influência de fatores como idade micelial, tipo e concentração de enzimas e estabilizadores osmóticos na produção de protoplastos de Aspergillus ochraceus. Os melhores resultados de produção de protoplastos foram obtidos utilizando-se NH4Cl 0,8mol L-1 como estabilizador osmótico, micélio com 24h de crescimento e a combinação de Ly (mais) sing Enzymes e Meicelase ambas, a 20mg mL-1. Entretanto, bons resultados foram também obtidos com a utilização apenas de Lysing Enzymes. Resumo em inglês Production of protoplasts is an important tool for genetic transformation of fungi. A protocol for protoplasts production in Aspergillus ochraceus was developed, evaluating culture aging of mycelium, different commercial enzymes and osmotic stabilizers. The best results were obtained with NH4Cl 0.8mol L-1 as osmotic stabilizer, mycelial age of 24 hours and Lysing Enzymes (20mg mL-1) plus Meicelase (20mg mL-1) as lytic enzymes. Good results were also obtained with Lysing Enzymes alone.

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Produção de protoplastos e lise da parede celular de leveduras utilizando β-1,3 glucanase/ Protoplasts production and yeast cell wall lysis using β-1,3 glucanase

Fleuri, Luciana Francisco; Sato, Hélia Harumi
2010-06-01

Resumo em português O presente trabalho visou a aplicação da β-1,3 glucanase lítica, obtida do microrganismo Cellulosimicrobium cellulans 191, na produção de protoplastos e na lise da parede celular de leveduras. A preparação bruta da enzima foi capaz de lisar as leveduras Kluyveromyces lodderi, Saccharomyces cerevisiae (Fleischmann e Itaiquara), S. cerevisiae KL-88, S. diastaticus NCYC 713, S. cerevisiae NCYC 1001, Candida glabrata NCYC 388, Kluyveromyces marxianus NCYC 587 e Ha (mais) nsenula mrakii NCYC 500. A β-1,3 glucanase purificada foi capaz de lisar as leveduras Saccharomyces cerevisiae KL-88, Saccharomyces capensis, Debaromyces vanriji, Pachysolen tannophillus, Kluyveromyces drosophilarum, Candida glabrata, Hansenula mrakii e Pichia membranaefaciens e formar protoplastos de Saccharomyces cerevisiae KL-88. Resumo em inglês The aim of this work was the application of lytic β-1,3 glucanase obtained from Cellulosimicrobium cellulans strain 191 in the production of protoplasts and lysis of yeast cell walls. The crude extract demonstrated lysis activity against the yeasts Kluyveromyces lodderi, Saccharomyces cerevisiae (Fleischmann and Itaiquara), S. cerevisiae KL-88, S. diastaticus NCYC 713, S. cerevisiae NCYC 1001, Candida glabrata NCYC 388, Kluyveromyces marxianus NCYC 587, and Hansenula (mais) mrakii NCYC 500. The purified β-1,3 glucanase demonstrated lysis activity against the yeasts Saccharomyces cerevisiae KL-88, Saccharomyces capensis, Debaromyces vanriji, Pachysolen tannophillus, Kluyveromyces drosophilarum, Candida glabrata, Hansenula mrakii, and Pichia membranaefaciens, and it was able to produce Saccharomyces cerevisiae KL-88 protoplasts.

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Determinação de metodologia para oisolamento de protoplastos de tangerina Cleópatra (Citrus reshni Hort.)/ Methodology choice for protoplast isolation in Cleopatra mandarin (Citrus reshni Hort.)

Oliveira, R.P. de; Mendes, B.M.J.; Tulmann Neto, A.
1995-04-01

Resumo em português A hibridação somática via fusão de protoplastos vem sendo utilizada no melhoramento de porta-enxertos de citros em diversos países. Nos Estados Unidos, vários estudos demonstram a eficiência de procedimentos no isolamento e cultivo de protoplastos dessa frutífera. O presente trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar o efeito do meio de cultivo de calos embriogênicos do porta-enxerto tangerina Cleópatra (Citrus reshni Hort.) sobre o isolamento de protoplas (mais) tos, bem como sugerir alterações de procedimento. Os resultados mostram a possibilidade do isolamento de 1.4 x 10(6) a 4.7 x 10(6) protoplastos por grama de calos da espécie estudada. Verificou-se que, o subcultivo dos calos de tangerina Cleópatra em meio de cultura, sem reguladores 1 hora, sob condições de escuro a 120 rpm, proporcionou maior eficiência de isolamento de protoplastos (4.7 x 10(6) protoplastos/g de calo). Resumo em inglês Somatic hybridization has been used for citrus rootstock breeding in many countries. In USA, many reports had proved the efficiency of procedures for the isolation and culture of citrus protoplasts. This research was conducted to evaluate the efficiency of procedures of protoplast isolation using embryogenic callus of the Cleópatra mandarin rootstock. Alterations were proposed to increase protoplast isolation and culture method. Results show the possibility of a protopla (mais) st yield of 1.4 to 4.7 x 10(6) pps/g.f.w. for Cleópatra tangerine rootstock callus. Protoplast yield can be raised to 4.7 x 10(6) pps/g.f.w. if the embryogenic callus are grown in a medium supplemented only with 4% sucrose and pre-treated with 1% w/v macerozyme for 1 hour, at 120 rpm, in dark, is applied before protoplast isolation.

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Integração de pAN7-1 no genoma de Magnaporthe grisea mediada por enzima de restrição/ Integration of pan7-1 into the Magnaporthe grisea genome mediated by restriction enzyme

Marchi, Carlos E.; Brommonschenkel, Sérgio H.; Queiroz, Marisa V. de; Mizubuti, Eduardo S. G.
2006-06-01

Resumo em português Visando explorar a mutagênese insercional em Magnaporthe grisea, foram avaliadas a transformação dos protoplastos obtidos após adequação do protocolo e a eficiência da integração de pAN7-1 no genoma do ascomiceto na presença da enzima de restrição Hind III. Os protoplastos de M. grisea I-22 foram prontamente transformados para a resistência à higromicina. Quando o vetor linearizado com Hind III foi usado para transformar o fungo na presença de Hind III, a e (mais) ficiência de transformação foi 1,1 a 8,1 vezes superior ao tratamento sem a adição da enzima. No geral, a melhor concentração de Hind III foi 5 unidades/reação de transformação. Tal concentração promoveu a produção média de 332 transformantes/µg de pAN7-1/10(7) protoplastos. A presença do gene de seleção hph no genoma de 18 indivíduos resistentes à higromicina foi confirmada por PCR. Resumo em inglês To investigate insertional mutagenesis in Magnaporthe grisea, we tested the transformation of protoplasts produced after protocol optimization, and analyzed the integration efficiency of pAN7-1 into the M. grisea genome mediated by the restriction endonuclease Hind III. The I-22 protoplasts were readily transformed for hygromycin resistance. When pAN7-1 was linearized with Hind III and used to transform fungal protoplasts in the presence of the corresponding enzyme, the t (mais) ransformation efficiency was increased 1.1 to 8.1-fold. The optimal Hind III concentration for enhanced transformation corresponded to 5 unit/transformation mix. This concentration led to average frequency of 332 transformants/µg de pAN7-1/10(7) protoplasts. The presence of selection gene hph in the 18 transformant genome was confirmed by PCR.

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Produção, purificação, clonagem e aplicação de enzimas líticas/ Production, purification, cloning and application of lytic enzymes

Fleuri, Luciana Francisco; Sato, Hélia Harumi
2005-10-01

Resumo em inglês Lytic enzymes such as beta-1,3 glucanases, proteases and chitinases are able to hydrolyse, respectively, beta-1,3 glucans, mannoproteins and chitin, as well as the cell walls of many yeast species. Lytic enzymes are useful in a great variety of applications including the preparation of protoplasts; the extraction of proteins, enzymes, pigments and functional carbohydrates; pre-treatment for the mechanical rupture of cells; degradation of residual yeast cell mass for the p (mais) reparation of animal feed; analysis of the yeast cell wall structure and composition; study of the yeast cell wall synthesis and the control of pathogenic fungi. This review presents the most important aspects with respect to lytic enzymes, especially their production, purification, cloning and application.

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Aspectos histoquímicos e morfológicos de grãos de café de diferentes qualidades/ Histological and morphological aspects of different grain coffee qualities

Goulart, Patrícia de Fátima Pereira; Alves, José Donizeti; Castro, Evaristo Mauro de; Fries, Daniela Deitos; Magalhães, Marcelo Murad; Melo, Hyrandir Cabral de
2007-06-01

Resumo em português Este trabalho teve por objetivo relacionar aspectos histoquímicos e morfológicos de grãos secos de café com a qualidade destes classificadas como bebida mole, dura e rio. Paralelamente a esses estudos, foram realizadas em cada lote de grãos a lixiviação de potássio, a condutividade elétrica e a atividade da polifenol oxidase. Uma maior lixiviação de potássio, com o conseqüente aumento na condutividade elétrica, mostrou ser um forte indicador de danos na memb (mais) rana e parede celular. Este dano foi confirmado por fotomicrografias em estudos histoquímicos e morfológicos de grãos de café. Estes estudos mostraram que no café bebida mole havia corpos lipídicos globulares bem definidos no interior dos protoplastos. Com a perda da qualidade da bebida para dura e rio, verificou-se que os lipídeos não mais se apresentaram em corpos lipídicos bem definidos, estavam localizados nas regiões periféricas do protoplasto e algumas vezes extravasados no tecido devido à degradação da parede celular. Resumo em inglês This research studied the histological and morphological aspects of the dry grain coffee classified as 'mole, 'dura' and 'rio' beverage. Concomitantly to these studies there were realized in each group of grains, potassium lixiviation, electric conductivity and polyphenol oxidase activity. A higher potassium lixiviation with the consequent increase in electric conductivity showed to be a strong indicator of membrane and cell wall damage. This damage was confirmed by histo (mais) logical and morphological studies of coffee grains. These studies showed that coffee beverage 'mole' had well defined lipidic bodies in the interior of protoplasts. During the beverage quality loss to 'dura' and 'rio', it was observed that lipids did not appear in well defined lipidic bodies like 'mole' coffee beverage, were localized in periphery of the protoplasts and sometimes extravased into the tissue due the degradation in cell wall.

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Obtenção de híbridos somáticos de limão 'Cravo' e tangerina 'Cleópatra'/ Somatic hybridization between 'Rangpur' lime and 'Cleópatra' mandarin

Latado, Rodrigo Rocha; Derbyshire, Maria Teresa Vitral de Carvalho; Tsai, Siu Mui; Tulmann Neto, Augusto
2002-12-01

Resumo em português Este trabalho teve como objetivo a obtenção de híbridos somáticos entre o limão 'Cravo' (Citrus limonia Osbeck) e a tangerina 'Cleópatra' (Citrus reshni Hort.), para serem usados como porta-enxertos de citros. O limão 'Cravo' é atualmente o principal porta-enxerto comercial utilizado no Brasil, em virtude de suas boas qualidades agronômicas. Entretanto, é suscetível ao "declínio" dos citros, doença responsável pela eliminação anual de milhões de plantas c (mais) ítricas no Brasil. A tangerina 'Cleópatra' é uma espécie bastante utilizada como porta-enxerto em outros países e tem sido descrita na literatura como tolerante ao "declínio". Protoplastos de suspensões celulares embriogênicas e protoplastos derivados de tecidos foliares foram utilizados para fusão com solução de PEG (50%) e posterior cultivo em agarose. A porcentagem de obtenção de células híbridas interespecíficas logo após a fusão, variou entre 5,1% e 6,8%. Foram obtidas mais de 500 plantas a partir de produtos de fusão cultivados em gotas de agarose. No total de 180 plantas avaliadas, 11 híbridos somáticos foram discriminados e confirmados, utilizando-se marcadores moleculares RAPD e isoenzimáticos (sistemas PO, IDH e PGI). Seis plantas foram aclimatizadas, plantadas no solo e estão sendo multiplicadas por estaquia para avaliação futura como porta-enxertos de citros. Resumo em inglês The aim of this work was to obtain somatic hybrids between 'Rangpur' lime (Citrus limonia Osbeck) and 'Cleópatra' mandarin (Citrus reshni Hort.), to be used as a citrus rootstock. 'Rangpur' lime is the most important Brazilian citrus rootstock due to its higher horticultural performance. Nevertheless, this species is susceptible to blight disease, which is responsible for the death of millions of productive trees per year in Brazil. 'Cleópatra' mandarin has become an in (mais) creasingly important rootstock in other countries and has been reported as being tolerant to citrus blight disease. Leaf protoplasts and protoplasts from embryogenic cell suspension cultures were fused using PEG solution (50%) and further cultivation in agarose. The frequency of heterokaryon formation was 5.1% to 6.8%. More than 500 plants were regenerated from these fusion experiments and 180 were tested. Among them, 11 plants were confirmed to be a somatic hybrid by means of molecular markers (RAPD) and isoenzymes markers (PO, IDH and PGI systems). Six plants were acclimatized, planted in the soil and have been multiplied by cuttings in order to evaluate their potential as citrus rootstocks.

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FUSÃO DE PROTOPLASTOS DE Saccharomyces cerevisiae AVALIADA POR FLOCULAÇÃO E PRODUÇÃO DE H2S

MARTINS, C.V.B.; HORII, J.; PIZZIRANI-KLEINER, A.A.
1998-01-01

Resumo em português Com o objetivo de obter linhagens de leveduras com características de importância para a indústria vinícola, empregou-se a técnica da fusão de protoplastos. A atenção foi dirigida a duas características: floculação e não produção de H2S. Uma vez que cada característica é de baixa frequência (1% cada) em leveduras vinícolas, torna-se pouco provável a ocorrência natural de uma linhagem com ambas as características. O cruzamento foi realizado via fusão (mais) de protoplastos pois as linhagens apresentaram incompatibilidade sexual. Inicialmente foram obtidos os mutantes auxotróficos contrastantes e posteriormente suas marcas foram avaliadas quanto à reversão e, em seguida foram determinadas suas curvas de crescimento. Obteve-se a protoplastização por tratamento com Novozym 234 e a fusão foi mediada por PEG 40% e CaCl2 1,2 M. A taxa de fusão de protoplastos foi de 2,7x10-4, sendo que das colônias resultantes, 54,6% continuaram o crescimento após transferência para MM, "minimal media". Após várias transferências em meio YEPD foram selecionadas as linhagens floculantes e H2S-. Resumo em inglês In order to obtain yeast strains with important characteristics for the wine industry, protoplast fusions were performed. Attention was driven to two important traits: flocculation and of H2S production. Because both are traits occuring at low frequency in wine yeast (1% each), their natural occurence is unlike. Crossing was made through protoplast fusion because strains were sexualy incompatible. Initially, auxotrophic contrasting mutants were obtained, their marks were (mais) tested for reversion and finally, their growth rates were determined. Protoplasts were obtained after treatment with Novozym 234 PEG and CaCl2. The rate of fusion was 2,7x10-4, and 54,6% of the resulting colonies were able to grow on minimal media. After several transfers to YEPD media, the flocculant and H2S- productive strains were selected.

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Aplicação de técnicas de biotecnologia à cultura e melhoramento do maracujazeiro/ Application of biotechnological processes to passion fruit culture

Lima, Daniela Macedo de; Golombieski, Evelise Rejane; Ayub, Ricardo Antonio
2000-04-01

Resumo em português A tecnologia da cultura de protoplastos, células e tecidos de plantas in vitro constitui-se em uma das áreas de maior êxito na biotecnologia. No gênero Passiflora, poucas espécies têm sido utilizadas com fins biotecnológicos nos estudos de cultura de tecido. Do pouco já realizado, obteve-se sucesso na regeneração de brotos, por via indireta, a partir de calos, ou por via direta, a partir dos explantes cotiledonares, hipocotiledonares ou foliares. A regeneração (mais) in vitro é facilmente induzida em entrenós e segmentos de gavinha, com a adição de citocinina ao meio de cultivo. Recentes avanços na regeneração de protoplastos de outras frutíferas permitiram a aplicação da hibridização somática no maracujá. O uso da engenharia genética, aproveitando-se a habilidade de regeneração das plantas de P. edulis f. flavicarpa, torna-se relevante na tentativa de reduzir a devastação imposta por certas doenças e pragas, e também na adição de outras características de importância agronômica. Resumo em inglês The technology of cells, protoplast and tissue culture of plants is one of the most successful biotechnological areas. In the genus Passiflora, a few species have been used with biotechnological ends on the studies concerning tissue cultures. Regeneration of shoots can be indirect, from callus, or direct, by cotiledonary, hipocotiledonary and leaf explants. It is easy to induce in vitro regeneration of internodes and axillary tendrils if cytokinin is added to the culture (mais) medium. Early advances in the regeneration of other fruit tree protoplasts have allowed the use of the somatic hybridization process in the passion fruit. Since P. edulis f. flavicarpa has a natural regeneration ability, the application of genetic engineering techniques becomes necessary in order to reduce the infestation by some diseases or insects, and to add relevant agricultural properties to this species.

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