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Determinação eletroanalítica de corante reativo presente como contaminante em proteínas purificadas por cromatografia de afinidade/ Electroanalytical determination of a reactive dye currently used in affinity chromatography for protein purificaton

Osugi, Marly E.; Guaratini, Claudia C. I.; Stradiotto, Nelson R.; Zanoni, Maria Valnice Boldrin
2004-06-01

Resumo em inglês Procion Green HE-4BD is a reactive dye currently used in affinity purification, and commonly present as a contaminant in the final biological preparation. An assay method is described to determine trace amounts of the dye in the presence of human serum albumin(HSA) and leakage from agarose as affinity sorbent by cathodic stripping voltammetry. The proposed method is based on the reductive peak at -0.55V in B-R buffer pH 3 (E=0V and t= 240s), obtained when samples of HSA 2 (mais) % (m/v) containing dye concentrations in sodium hydroxide pH 12 are submitted to a heating time of 330 min at 80 ºC. Linear calibration curves can be obtained for RG19 dye concentrations from 5x10-9 mol L-1 to 8 x10-8 mol L-1. The detection limit (3sigma) is 1x10-9 mol L-1.

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Uso do Doppler transcraniano para monitorização do vasoespasmo cerebral secundário à hemorragia subaracnóide/ Use of transcranial Doppler in the monitoration of cerebral vasospasm secondary to subarachnoid hemorrhage

Radanovic, M.; Scaff, M.
2001-03-01

Resumo em português O vasoespasmo cerebral é responsável por aumento de morbidade e mortalidade em pacientes acometidos por hemorragia subaracnóide (HSA). Sua detecção de forma precoce e não-invasiva pelo método de Doppler transcraniano (DTC) pode contribuir para um melhor prognóstico destes doentes. OBJETIVO: Discutir o uso do método de DTC para diagnóstico do vasoespasmo cerebral secundário à HSA espontânea. MÉTODOS: Foram analisados os registros de velocidade de fluxo em art (mais) érias intracranianas por DTC em 31 pacientes com diagnóstico tomográfico de HSA, realizados seqüencialmente em conjunto com exame neurológico. Todos os pacientes (à exceção de um) eram portadores de aneurismas intracranianos. RESULTADOS: Vasoespasmo clínico foi constatado em 11 pacientes (36,6% do total), com correspondente vasoespasmo ultra-sonográfico presente em nove casos (82%). Em três casos (33,3%) as alterações de velocidade de fluxo precederam os sinais clínicos. Entre os 20 pacientes assintomáticos, 15 (75%) apresentaram medidas de velocidade normais, havendo evidência de vasoespasmo sonográfico sem repercussão clínica em cinco (25%). O índice de falso negativo na correlação entre exame clínico e DTC (sinais clínicos de vasoespasmo presentes, com velocidades de fluxo normais) foi de 18%. No entanto, houve correspondência entre os achados clínicos e ultra-sonográficos em 26 dos 31 pacientes (83,8%). Os valores de velocidades médias nas várias artérias e sua interpretação para cada subgrupo são discutidos com maiores detalhes. CONCLUSÃO: O método de DTC é um auxiliar valioso na detecção pré-sintomática do vasoespasmo secundário à HSA, permitindo uma intervenção terapêutica mais precoce. Os dados obtidos neste trabalho coadunam-se com os diversos estudos publicados na literatura. Resumo em inglês Cerebral vasospasm accounts for an increased morbidity and mortality in patients with spontaneous subarachnoid hemorhage (SAH). Its early and non invasive detection by transcranial Doppler (TCD) may contribute to a better prognosis in such cases. PURPOSE: To discuss the use of transcranial Doppler (TCD) in the detection of cerebral vasospasm secondary cerebral to spontaneous subarachnoid hemorrhage (SAH). METHODS: We analyzed the flow velocities registered by TCD in intra (mais) cranial arteries in 31 patients with SAH, performed sequentially, associated with neurological examinations. All patients (except one) had intracranial aneurysms. RESULTS: Clinical vasospasm was found in 11 patients (36,6% from the total), with correspondent sonographic vasospasm present in 9 cases (82%). In 3 cases (33.3%) the flow velocity alterations preceded the clinical symptoms. Between the 20 asymptomatic patients, 15 (75%) had normal flow velocity, with evidence of sonographic vasospasm without clinical repercussion in 5 (25%). The index of false negatives in the correlation between clinical examination and TCD (symptomatic vasospasm with normal flow velocity records) was 18%. However, there was correspondence between clinical and ultrasonographic findings in 26 of the 31 patients (83.8%). The average flow velocity values in the various arteries and its interpretation for each subgroup are discussed with further details. CONCLUSION: TCD is a valuable auxiliary method in the detection of cerebral vasospasm (even pre-symptomatic) secondary to SAH, allowing a more precocious therapeutic intervention. Our results are similar to those described in the literature.

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Hemorragia subaracnoídea com tomografia de crânio sem sinais de sangramento/ Subarachnoidal hemorrhage with cranial tomography without bleeding signals

Francisco, Silvio; Reis-Filho, João Baptista dos; Neves, Afonso Carlos
1997-09-01

Resumo em português Foram observados 23 casos de pacientes com suspeita clínica de hemorragia subaracnoídea (HSA), com tomografia de crânio (CT) sem sinais de sangramento, com diagnóstico definitivo realizado por exame de líquido cefalorraquiano(LCR). Desses, 20 casos foram submetidos a angiografia cerebral. Estabeleceu-se a classificação clínica de Hunt & Hess. Os principais achados neste estudo foram:1) um terço dos pacientes apresentou intervalo de tempo entre o ictus e a realiza (mais) ção da CT e do LCR entre 24 e 48 horas, período de maior sensiblidade da CT; 2) dos pacientes estudados com angiografia cerebral, 55% tiveram o diagnóstico de aneurisma com predomínio no território de carótida e cerebral anterior; 3) o grau clínico dominante foi Hunt & Hess I e II. Todos os achados encontrados demonstraram a necessidade da realização de LCR em suspeita de HSA sem sinais de sangramento na CT. Resumo em inglês We observed 23 pacients with clinical hypothesis of subarachnoidal hemorrhage (SAH) having cranial tomography (CT) without bleeding signals. The final diagnosis of SAH was made upon the cerebrospinal fluid (CSF) results. Twenty cases were submitted to brain angiography. They were focused under the clinical classification of Hunt & Hess. The main results were: 1) 1/3 of patients had interval time between 24 and 48 hours after ictus and before CT and CSF making; this was th (mais) e most sensitive CT time; 2) 55% of patients with brain angiography had aneurysm predominantly in the carotid and anterior cerebral artery territory; 3) the dominant clinical degree was Hunt & Hess I e II. Conclusion: the results demonstrate the need of CSF test in case of SAH clinical diagnosis with CT showing no bleeding signals.

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Tratamento cirúrgico dos aneurismas intracranianos: comparação entre cirurgias precoce e tardia/ Timing and results in intracranial aneurysm surgery

Colli, Benedicto O.; Martelli, Nelson; Assirati Júnior, João A.; Machado, Hélio R.; Sassoli, Valéria P.
1993-03-01

Resumo em português Neste estudo são analisadas as evoluções clínicas de 225 pacientes que apresentaram hemorragia subaracnóidea (HSA) por ruptura de aneurismas, atendidos no período de 1985 a 1990. A idade dos pacientes variou de 7 a 84 anos, com predomínio na faixa de 30 a 50 anos (60%). Quanto ao sexo, houve predomínio do feminino (62,2%). Quanto à localização dos aneurismas rotos, os pacientes distribuiram-se em: 75 na artéria carótida interna, 66 na comunicante anterior, 61 (mais) na cerebral média, 14 na circulação posterior, 1 na cerebral anterior distal; e 8 em localização não identificada. Quarenta e cinco pacientes (20%) apresentaram mais de um aneurisma. Quarenta e quatro pacientes foram submetidos a tratamento cirúrgico nas primeiras 72 horas após a HSA, 40 no período de 4 a 7 dias, 16 no período de 8 a 10 dias e 57 após o 10º dia. As evoluções clínicas dos pacientes estudados são analisadas, baseadas na época da cirurgia em relação à HSA. Resumo em inglês The clinical course of patients with subarachnoid hemorrhage (SAH) due to rupture of cerebral aneurysm admitted during the last five years is analysed: 157 patients were treated by direct surgical approach of the aneurysm, 58 localized in the anterior communicating artery (ACoA), 48 in the internal ctarotid artery (ICA), 43 in the middle cerebral artery (MCA), and 8 in the posterior circulation. Fourty-four patients were operated on during the first 72 hours (early surger (mais) y), 40 during the 4th and 7th days, 16 during the 8th and the 10th, and 57 after the 10th (late surgery), According to main localizations, the outcome of patients with aneurysms in the ACoA was good in 79.1%, in the ICA in 69.7%, and in the MCA in 69.7%. Patients treated in Hunt & Hess grade I and II had both good results in 77.5%, grade HI patients had good results in 71.3%, and grade IV in 56.2%. According to timing of surgery good results were observed in 61.4% for patients submitted to early surgery, in 80% for patients treated during the 4th and 7th days, in 81.2% for patients treated during the 8th and the 10th days, and in 70.2% for that submitted to late surgery. The overall mortality was 14.6%. For grade I patients mortality was 6.4%, for grade, II was 12.2%, for grade III was 15.2%, for grade" IV was 25%, and all patients operated on in grade V died. Mortality for patients operated on during the first 72 hours was 29.5%, during the 4th and the 7th days was 15.0%, during the 8th and the 10th days was 6.2%, and after the 10th day was 8.7%. The mortality of non operated patients was 88.2%. The overall outcome for patients with aneurysm rupture was 52% and the overall mortality was 36.8%. Based on the results regarding the final clinical outcome early surgery for treatment of intracranial aneurysms was effective as late surgery, although

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Desenvolvimento e validação de método analítico para determinação simultânea de catecolaminas em órgãos reprodutores de ratos por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção eletroquímica/ A new method for simultaneous determination of catecholamines in reproductive organs from rats by high performance liquid chromatography with electrochemical detection

Silva, D.A.F.; Menezes, M.L.; Kempinas, W.G.
2007-01-01

Resumo em português O objetivo deste trabalho foi propor um método rápido e sensível para a determinação simultânea de catecolaminas (noradrenalina e adrenalina) em amostras de órgãos reprodutores de ratos machos por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com Detecção Eletroquímica. O método envolveu a injeção direta do extrato ácido da amostra de tecido em uma coluna cromatográfica com superfície interna de fase (HSA-C18), empregando a fase móvel foi composta por solu� (mais) �ão de ácido metanosulfônico a 0.013mol L-1 (pH = 3.0): acetonitrila (96:4v/v), 0,033g ácido heptanosulfônico e 0,01g EDTA. A detecção dos analitos foi obtida, através de um detector eletroquímico L-ECD-6-A-Shimadzu com potencial em 85mV. A extração das catecolaminas foi utilizado ácido perclórico a 0,4 mol L-1. A extração do analito resultou em valores de recuperação entre 56% e 114%, e coeficiente de variação entre 3,8% a 23%. O limite de quantificação do método ficou entre 0,008 e 0,030 ng mg-1 para a noradrenalina, e 0,009 e 0,051 ng mg-1 para a adrenalina. Em conclusão, o método analítico foi validado e aplicado com desempenho às amostras reais de tecidos biológicos de ratos, permitindo a determinação de baixas concentrações das catecolaminas estudadas. O método apresentou várias vantagens: rapidez, alta precisão, boa seletividade e, ainda, não requer o pré-tratamento da amostra. Resumo em inglês The aim of this research was to propose a new sensitive and fast method to the simultaneous determination of catecholamines (noradrenaline and adrenaline) in samples of reproductive organs from male rats by High Performance Liquid Chromatography with Electrochemical Detection. The method involved direct injection of acid extract on to a serum albumin dimethylocadecyl-silane (HSAC18) and the utilization of 0.013mol L-1 methanosulfonic acid (pH = 3.0): acetonitrile (96:4v/v (mais) ), 0.033g heptanosulfonic acid and 0.01g EDTA as mobile phase. The detection was obtained using an electrochemical detector L-ECD-6A-Shimadzu with a potential of the 85mV. percloric acid 0.4 mol L-1 was used in the procedure of catecholamine extraction. The extraction of the analyte resulted in recovery values between 56% and 114%, and coefficient of variation between 3.8% and 23%. The quantification limit of the method was between 0.008 and 0.030ng mg-1 for noradrenaline, and 0.009 and 0.051ng mg-1 for adrenaline. In conclusion, the analytical method was validated and applied to the real samples of rats, allowing the determination of low concentrations of the catecholamines studied. The method has various advantages: fast, high precision and good selectivity and do not require sample treatment.

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Hipertrofia septal assimétrica: técnica de correção e análise da evolução pós-operatória/ Dynamic subaortic stenosis: surgical treatment and postoperative evaluation

Jatene, Fábio B; Jatene, Marcelo B; Auler Júnior, José Otávio C; Silva, Marluce de Oliveira e; Pileggi, Fúlvio; Barbero-Marcial, Miguel; Verginelli, Geraldo; Jatene, Adib D
1991-12-01

Resumo em português A hipertrofia septal assimétrica (HSA), ou estenose subaórtica dinâmica é doença que apresenta características peculiares relacionadas tanto ao diagnóstico quanto à técnica cirúrgica empregada para o seu tratamento. De setembro de 83 a setembro de 89, 16 pacientes consecutivos (10 homens) com idades de sete meses a 66 anos (30,87 ± 22,42) foram submetidos a tratamento cirúrgico. Este consistiu, fundamentalmente, da não abordagem do septo interventricular e si (mais) m da ressecçáo muscular realizada na região da via de saída do ventrículo esquerdo, parede anterior entre os seios aórticos coronarianos direito e esquerdo. Esta miectomia, profunda e extensa foi realizada isoladamente em dez pacientes e nos outros seis associada a outros procedimentos: ligadura de canal arterial e ressecção de anel subaórtico fibroso em dois; descalcificação de valva aórtica (VAo) em um; ressecção de banda muscular em ventrículo direito em um: ressecção de vegetação de VAo em um; fechamento de CIV com plastia de VAo em um. Em todos os casos foram feitas medidas intra-operatórias das pressões do VE e aorta após desconexão da circulação extracorpórea. Não houve nenhum óbito imediato neste grupo de pacientes. Houve um (6,2%) óbito tardio, um anos após, não relacionado à doença. Com relação a distúrbios na condução atrioventricular, houve um (6,2%) bloqueio A-V total, com implante de marcapasso definitivo. Houve dois (12,5%) bloqueios de ramo esquerdo, e três (18,7%) bloqueios divisionais ântero-superiores, sem alterações nos demais pacientes. Em um peíodo de 19 a 90 meses (56,00 ± 23,72), 14 (87,5%) pacientes encontram-se assintomáticos. Resumo em inglês The dynamic subaortic stenosis, more commonly named hypertrofic subaortic stenosis (HSS) presents some aspects specially related with its diagnosis and surgical treatment. From September/83 to September/89, sixteen patients (10 men) with age between 7 month and 66 years (30.87 ± 2.42) were submitted to surgical treatment to correct the HSS. The surgical technique employed the muscular resection in left ventricular outflow tract, in the anterior wall, between left and rig (mais) ht coronary aortic sinus. This resection was characterized by an extensive and deeply miectomy and was performed with no other procedures in 10 patients and in association with other procedures in 6 patients (correction of patent arterious ductus with fibrotic subaortic stenosis in 2; surgical conservative procedure in aortic valve stenosis in one; right ventricle muscular anomalous band resection of vegetative lesion in aortic leaflet in one; interventricular septum communication closure and aortic valve conservative procedure in one. After cardiopulmonary by-pass, intraoperative evaluation in aortic and left ventricle pressure were made in all patients. No immediate deaths were present in this group of patients. There was one (6.2%) death with one year of follow-up, not related with the disease. After surgery related to AV disturbances, one (6.2%) patient presented AV block with need of pacemaker implantation; two (12.5%) presented left bundle block; three (18.7%) presented left bundle branch block, with no alteration in the other patients. In the late follow-up, between 19 and 90 months (56.00 ± 23.72), 14 (87.5%) patients are with no symptoms.

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Detecção e exérese de lesões mamárias não palpáveis orientadas por cirurgia radioguiada com injeção de ar para controle radiológico/ Detection and excision of non-palpable breast lesions by radioguided surgery and air injection for radiological control

Machado, Rafael Henrique Szymanski; Oliveira, Afrânio Coelho de; Rocha, Augusto César Peixoto; Souza, Sérgio Augusto Lopes de; Martins, Flávia Paiva Proença; Gutfilen, Bianca; Fonseca, Lea Mirian Barbosa da
2005-11-01

Resumo em português OBJETIVO: avaliar a eficiência da localização e exérese por cirurgia radioguiada de lesões ocultas mamárias utilizando radiofármaco injetado diretamente no interior das lesões ou até dois centímetros destas com posterior injeção de ar como controle radiológico. MÉTODOS: vinte e nove pacientes com 32 lesões mamárias ocultas, detectadas por mamografia ou ultra-sonografia, classificadas como Bi-Rads® 3, 4 e 5 foram incluídas neste estudo observacional com r (mais) esultados expressos em percentagens. O radiofármaco utilizado foi o macroagregado de albumina marcado com tecnécio-99m (99mTc-MAA) injetado por orientação mamográfica ou guiado por ultra-sonografia. A injeção do radiofármaco foi seguida pela imediata administração de ar, através da agulha da estereotaxia, visando o controle radiológico da injeção do radiofármaco. A biopsia excisional foi feita com o auxílio do aparelho portátil gamma-probe (detector de radiação gama) e a remoção completa das lesões foi verificada pela radiografia das peças cirúrgicas ou por exame por congelação intra-operatório. RESULTADOS: câncer de mama foi encontrado em 10% (1/10) das lesões BI-RADS® 3, em 31,5% (6/19) das BI-RADS® 4 e em 66,6% (2/3) das BI-RADS® 5. As 29 pacientes corresponderam a 32 espécimes, cirúrgicos. O radiofármaco foi corretamente posicionado em 96,8% (31/32) dos espécimes permitindo remoção de 96,8% das lesões mamárias não palpáveis estudadas. A completa remoção da lesão foi demonstrada pela radiografia das peças em 23 casos (71,8%), pelo estudo intra-operatório por congelação em 21,8% (7/32) e por ambos os métodos em 6,2% (2/32). CONCLUSÃO: a cirurgia radioguiada é importante instrumento na remoção de lesões mamárias não palpáveis, tratando-se de método simples, rápido e exeqüível que pode ser implementado na rotina clínica dessas pacientes. Resumo em inglês PURPOSE: to asses the efficiency of the radioguided localization and removal of occult breast lesions using radiopharmaceuticals injected directly into the lesions or close to them with posterior air injection as a radiological control. METHODS: twenty-nine consecutive patients with thirty-two occult breast lesions detected mammographically or by ultrasound, and categorized 3, 4 and 5 BI-RADS®, were included in this observational study with results expressed in percentag (mais) es. The radiopharmaceutical used was human serum albumin labeled with 99mTc-HSA injected inside or close to the lesion using mammographic or ultrasonographic guidance. The injection of the radiopharmaceutical was followed immediately by air injection through the needle used for stereotaxis as a radiological control of the radiopharmaceutical placement. The excision biopsy was carried out with the aid of a hand-held gamma-detecting probe and the entire removal of the lesion was verified by X-ray of the surgical specimens or by intraoperative frozen section examination. RESULTS: breast cancer was found in 10.0% (1/10) of the 3 BI-RADS® lesions, in 31.5% (6/19) of the 4 BI-RADS® and in 66.6% (2/3) of the 5 BI-RADS®. The radiotracer was correctly positioned in 96.8% of the specimens (31/32) allowing the removal of also 96.8% of the studied non-palpable breast lesions. To show the entire removal, X-ray was used in 23 cases (71.8%), intraoperative frozen section study in 21.8% (7/32) and both methods in 6.2% (2/32). CONCLUSIONS: radioguided surgery showed to be an important tool in the removal of non-palpable breast lesions, as a simple, fast and feasible method that can be implemented in the clinical routine of these patients.

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Pé diabético: avaliação da evolução e custo hospitalar de pacientes internados no conjunto hospitalar de Sorocaba

Milman, Mauro H.S.A.; Leme, Cristina B.M.; Borelli, Danilo T.; Kater, Fábio R.; Baccili, Elizabeth C.D.C.; Rocha, Rita C.M.; Senger, Maria-Helena
2001-10-01

Resumo em português O pé diabético é uma das principais complicações do diabetes mellitus (DM), sendo causa freqüente de internações hospitalares. Os custos destas internações e o ônus social constituem um grave problema de saúde. Com o objetivo de avaliar diabéticos portadores de lesões podais internados, estudamos 23 pacientes (14M, 9F; 39-80 anos de idade), no período de abril a novembro de 1999. Todos tinham DM tipo 2 e 48% deles foram internados com glicemia (mais) lesões estavam assim distribuídas (segundo classificação de Wagner): grau 1: 26%; grau 2: 17%; grau 3: 13%; grau 4: 35%; grau 5: 9%. Evoluíram para amputação 65% dos pacientes, sendo 30% de coxa. O tempo mediano de internação foi de 14 dias. O custo mediano das internações foi de R$1.004,59 e em 24% delas foi superior a R$2.000,00. Somado ao custo médio de próteses (R$1.900,00), totaliza-se um ônus próximo a R$3.000,00. Na amostra, 9 pacientes estavam na faixa etária economicamente ativa. Os pacientes portadores de lesões nos pés são responsáveis por internações prolongadas e de custo elevado, o que não é compatível com o sistema público de saúde do nosso país. Assim, a prevenção é um dos pontos fundamentais para melhorar o prognóstico desta patologia. Resumo em inglês Diabetic foot is one of the most important complications of diabetes mellitus (DM) and it is an ordinary cause of hospitalization. The costs of these hospitalizations and the social charge are serious health problems. To evaluate diabetic hospitalized patients with foot lesions, we studied 23 patients (14M, 9F; 39-80 years old), from April to November 1999. All had type 2 DM and 48% showed glucose levels (mais) ized as follow (according to Wagner): grade 1: 26%; grade 2: 17%; grade 3: 13%; grade 4: 35%; grade 5: 9%. Sixty-five percent of the patients evolved to amputations (30% at thigh level). Median time of the hospitalization was 14 days. Median cost was R$1,004 and in 24% of the hospitalizations it was higher than R$2,000. If we aggregate the mean expenditure with prosthesis (R$1,900), the charges are around R$3,000. Nine patients were at economically active age. Patients with foot lesions are responsible for long time hospitalizations with high costs, which is inadequate to the public health care system in our country. Consequently, prevention is absolutely significant to improve the prognosis of this pathology.

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