Sample records for homogenates
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Validação de metodologias analíticas para determinação quantitativa de ±-tocoferol e 4-nerolidilcatecol/ Validation of ±-tocopherol and 4-nerolidylcathecol quantitative assessment methodologies

Ropke, Cristina Dislich; Ostrosky, Elissa Arantes; Kaneko, Telma Mary; Camilo, César Moisés; Sawada, Tânia Cristina Higashi; Barros, Silvia Berlanga de Moraes
2003-06-01

Resumo em português O objetivo do nosso trabalho foi desenvolver um método para avaliação da concentração do ±-tocoferol, considerado o antioxidante lipofílico de maior importância, e do 4-nerolidilcatecol (4-NC), uma substância natural com comprovada ação antioxidante in vitro e in vivo, em matriz biológica (homogeneizado de pele). Utilizamos a cromatografia de alta eficiência acoplada a um detector eletroquímico, sendo que o método apresentou linearidade para as concentraç� (mais) �es de 0,025 µg/mL a 0,1 µg/mL para o ±-T (tempo de retenção 3, 4 min) e de 0,15 µg/mL a 2,5 µg/mL para o 4-NC (tempo de retenção 2,06 min), dissolvidos em etanol e etanol:água (1:1). A taxa de recuperação do ±-T adicionado nas concentrações de 0,5; 0,1 e 0,025 µg/mL aos homogeneizados de pele foi de 94,03; 111,2 e 80,7%, respectivamente. A taxa de recuperação de 4-NC adicionado nas concentrações de 2,5; 0,625 e 0,156 µg/mL foi de 103,7; 91,7 e 91,7%. Este método analítico foi e está sendo empregado, com sucesso devido à sua precisão e rapidez, em diversas análises do laboratório. Resumo em inglês Topical administration of antioxidants, such as ±-tocopherol (±-T), provides an efficient manner of enriching the endogenous cutaneous protection system, and it constitutes a successful strategy for diminishing the ultraviolet radiation-mediated oxidative damage. Besides ±-tocopherol the use of other natural occurring compounds with antioxidant activity has been proposed for the same purpose. The aim of this study was to develop a validated analytical method for the de (mais) termination of a-tocopherol and 4-nerolidylcathecol (4-NC) concentrations in skin homogenates in a pharmaceutical formulations. We employed liquid chromatography with electrochemical detection. Chromatography was performed on a Supelcosil LC-8, 3 mm, 75x4.6 mm column (Supelco, Bellefonte, PA, USA) with a mobile phase of methanol:water (9:1) for 4-NC and (95:5) for a-T, both containing 20 mM LiClO4 and 2 mM KCl. The flow rate was set at 1.0 ml/min. We established validation parameters including sensitivity, precision, accuracy, stability and found a linear relationship between the concentrations ranges of 0.025 µg/mL to 0.1 µg/mL of ±-T and 0.15 mg/mL to 2.5 mg/mL of 4-NC. The recovery of ±-T from skin homogenates was 94.03, 111.2 and 80.7% for the concentrations of 0.5, 0.1 and 0.025 µg/mL respectively. The recovery for the following concentrations of 4-NC: 2.5, 0.625 and 0.156 µg/mL was 103.7, 91.7 and 91.7%. This analytical procedure has been successfully employed in cutaneous permeation studies, antioxidant activity studies and determinations of 4-NC in Pothomorphe umbellata root extracts.

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Febre maculosa: isolamento de Rickettsia em amostra de biópsia de pele/ Spotted fever: Rickettsia isolation in skin biopsy sample

Melles, Heloisa Helana B.; Colombo, Silvia; Silva, Marcos Vinícius da
1992-02-01

Resumo em português Presença de Rickettsia na pele de doente de Febre Maculosa foi evidenciada por inoculação intraperitoneal em cobaio. O diagnóstico sorológico por imunoflüorescência indireta revelou diferença de título de anticorpos específicos para Rickettsia rickettsii, de 4 vezes entre a 1º e a 3º amostra. Imunoglobulina M (IgM) específica foi detectada nas amostras de sangue, evidência de infecção em atividade ou recente. Foi também detectada a presença de anticorpos específicos para R. rickettsii no soro dos cobaios inoculados. Resumo em inglês A 2 years old child living in an area of the State of São Paulo, known in the past as endemic for rickettsiosis developed clinical evidences of spotted fever after a tick bite. Rickettsiae were isolated from guinea pigs inoculated with a skin homogenate. In sera tested by indirect immunofluorescence with Rickettsia rickettsii standard antigen, IgG specific antibody titers raised from 1:512 in the first sample to 1:2048 in the third one; IgM specific antibody titer was 1: (mais) 128 in the three samples. Also positive were sera obtained from the inoculated guinea pigs. In the last 20 years no other case of rickettsial spotted fever has been confirmed by isolation of the agent in Brasil. To our knowlwdge, there are no previous reports of isolation of Rickettsiae through inoculation of skin biopsy homogenates.

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Considerações críticas e metodológicas na determinação de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio em células musculares durante contrações/ Critical and methodological analyses on the determination of reactive species in skeletal muscle cells during contractions

Silveira, Leonardo R.
2004-12-01

Resumo em português Uma excessiva produção de espécies reativas pode ser prejudicial, superando a capacidade antioxidante e conduzindo a um desequilíbrio redox. A maioria das evidências da formação de espécies reativas em células musculares são "indiretas", ao passo que as evidências "diretas" ainda são escassas. As razões para este fato são múltiplas. Esta revisão sugere a utilização de sondas fluorescentes como DCFH (reativa ao H2O2), DAF-2 (reativa ao NO) e fluoróforo n (mais) itróxido (reativa ao O2·-) para determinação dessas espécies. Em adição, o presente estudo sugere que: 1) as medidas "indiretas" de ataque oxidativo em amostras sangüíneas não necessariamente refletem o ataque oxidativo ocorrido nas células musculares; 2) amostras de músculos isolados e homogenatos podem apresentar uma grande quantidade de tecido vascular contendo células endoteliais, hemácias e leucócitos, os quais podem gerar EROs e NO, dificultando a interpretação dos resultados; 3) as sondas fluorescentes DCFH-DA/DCFH, DAF-2-DA/DAF-2 e nitróxido são sensíveis na detecção do H2O2, NO e O2·- respectivamente, em tecido muscular durante contrações; 4) como método alternativo no estudo da produção de EROs e NO em músculo esquelético, culturas de células musculares e fibra muscular isolada são indicados como modelos experimentais. Resumo em inglês An excessive level of these species may be harmful as it may overcome the antioxidant capacity. Most evidences for ROS and NO formation in muscle cell are indirect whereas direct evidences are scarce. The present review suggests as an alternative method either fluorescent DCFH, DAF-2 or fluorescamine toward H2O2, NO and O2·- measurements, respectively in muscle cell. In adition, it was concluded that: 1) the "indirect" measurements of ROS and NO in blood sample do not re (mais) flect oxidative attack occured in muscle cells during contractions; 2) isolated muscles and homogenates may contain a large amount of endothelial cells, red blood cells and leukocytes which may generate ROS and NO; 3) the fluorescent DCFH-DA/DCFH, DAF-2-DA/DAF-2 and fluorescamine are sensitive in detection of H2O2, NO and O2·- respectively, in muscle cell during contractions; 4) muscle cell culture and isolated muscle fiber are indicated as experimental models to study ROS and NO formation in muscular tissue.

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Infarto do miocárdio experimental e aumento do estresse oxidativo em diafragma de ratos/ Experimental myocardial infarction and increased oxidative stress in the rat diaphragm

Silva, Fabiano Leichsering; Mazzotti, Nicolle Gollo; Picoral, Marcus; Nascimento, Daniella Meirelles; Martins, Maria Isabel Morgan; Klein, Adriane Belló
2005-12-01

Resumo em português OBJETIVO: Este é um estudo experimental que visa a avaliar o efeito da insuficiência cardíaca no estresse oxidativo em diafragma de ratos. MÉTODOS: O modelo de infarto do miocárdio por ligadura da artéria coronária esquerda foi utilizado para desenvolvimento de insuficiência cardíaca. No 42º dia após a ligadura coronária, os animais foram mortos e tiveram o diafragma retirado e homogeneizado. O estresse oxidativo foi avaliado em homogeneizados de diafragma atr (mais) avés de medidas de lipoperoxidação e de ensaios de atividade enzimática antioxidante: catalase, glutationa peroxidase (enzimas que reduzem o peróxido de hidrogênio à água) e superóxido dismutase (enzima antioxidante que reduz o superóxido a peróxido de hidrogênio). RESULTADOS: Os resultados encontrados foram os seguintes: o modelo de ligadura de artéria coronária esquerda foi efetivo em gerar insuficiência cardíaca, com área média de infarto de 39% da área do ventrículo esquerdo; a lipoperoxidação estava 217% aumentada no diafragma dos animais infartados em relação aos controles; a atividade antioxidante da catalase estava reduzida em 77% e a da glutationa peroxidase em 20%, em comparação com o grupo controle; o infarto não alterou a atividade enzimática da superóxido dismutase. CONCLUSÃO: Os resultados sugerem a presença de estresse oxidativo no músculo diafragmático em animais submetidos à ligadura da artéria coronária esquerda. Resumo em inglês OBJECTIVE: To use an experimental model to evaluate the effect of heart failure on oxidative stress in the rat diaphragm. METHODS: The model of myocardial infarction was developed through left coronary artery ligation. On day 42 after coronary artery ligation, the animals were killed, after which the diaphragms were collected and homogenized. Oxidative stress was evaluated in diaphragm homogenates through measurement of lipid peroxidation and assays of the activity of ant (mais) ioxidant enzymes, including catalase and glutathione peroxidase (enzymes that reduce hydrogen peroxide to water), as well as superoxide dismutase (an antioxidant enzyme that reduces superoxide anions to hydrogen peroxide). RESULTS: The coronary artery ligation model was found to be effective in causing heart failure. In the animals submitted to coronary artery ligation, the mean infarcted area of the left ventricle was 39%. Lipid peroxidation was 217% greater in the diaphragms of ligated animals than in those of controls. The activity of catalase and glutathione peroxidase was 77% and 20% lower, respectively, in study rats than in control rats. Infarction did not modify superoxide dismutase activity. CONCLUSION: The results suggest that left coronary artery ligation results in oxidative stress in the diaphragm.

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