Sample records for glucuronidase
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Expressão eficiente do gene reporter beta-glucuronidase nos tecidos vasculares de batata (Solanum tuberosum L.) utilizando de um promotor específico (BRA3) de Agrobacterium rhizogenes/ Efficient expression of beta-glucuronidase reporter gene in vascular tissue of potato (Solanum tuberosum L.) utilizing a specific promoter (BRA3) from Agrobacterium rhizogenes)

Torres, Antonio Carlos; Ferreira, Adriana T.; Widholzer, Carlos F. N.; Romano, Eduardo; Peters, José A.
2003-06-01

Resumo em português Promotores tecido-específico controlam a transcrição de genes em diferentes tecidos vegetais bem como em diferentes estádios de desenvolvimento da planta, levando à indução de distintos níveis de atividade transiente e/ou estável do gene. Tais promotores podem ser empregados para a expressão seletiva de genes de interesse. O promotor rol A de Agrobacterium rhizogenes, por exemplo, é floema-específico, sugerindo que possa ser empregado em estratégias de defesa (mais) de plantas que são infectadas por vírus com replicação restrita ao floema. A expressão do gene marcador da ß-glucuronidase (gus) dirigido pelo promotor rol A (pBRA3) foi observada em plantas transgênicas de batata (cvs. Macaca e Baronesa). Entrenós e secções de folhas foram submetidos ao cocultivo com A. tumefaciens. A atividade do gene gus avaliada em brotações resistentes à canamicina não se restringiu ao floema (alto nível de expressão do gene), mas também se manifestou no xilema dos caules. As expressões transiente e estável são, no entanto, tecido-específicas, localizadas sobretudo no sistema vascular de entrenós e ausente em raízes e folhas. As plantas gus positivas foram micropropagadas, plantadas em casa de vegetação e avaliadas por PCR, utilizando-se 'primers' específicos para o gene npt II. Nenhuma alteração fenotípica foi observada em plantas transgênicas, em relação às não transformadas. Resumo em inglês Tissue-especific promoters allow the modulation of gene transcription in different tissue types as well as in different stages of plant development, leading different levels of transient and stable activity of the gene product. These promoters have been employed for selective gene expression. The Agrobacterium rhizogenes rol A gene promoter (BRA3) controls phloem-specific expression indicating that this promoter might have an important role in plant defense strategies aga (mais) inst virus which replicated only in the phloem. The expression of ß-glucuronidase (gus) activity drived by BRA3 promoter was observed in transgenic potato plants (cvs Macaca and Baronesa). Entrenodes and leaf explants were infected and cocultivated with A. tumefaciens. The regeneration of putative transformants was in medium with 50 mg.L-1 of kanamycin. High frequency of transformants based upon kanamycin resistance and gus expression was obtained. All gus positive plants showed blue staining in vascular bundle (phloem and xylem). PCR analysis showed the amplification of npt II. No conspicuous phenotipic alteration was observed when comparing transgenic vs non-transgenic plants.

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Avaliação de ensaios analíticos para detecção de coliformes fecais em queijo Minas/ Evaluation of analytical methods for detecting of fecal coliforms in Minas cheese

Pereira, M.L.; Gastelois, M.C.A.; Bastos, E.M.A.F.; Caiaffa, W.T.; Faleiro, E.S.C.
1999-10-01

Resumo em português Foram submetidas à pesquisa de coliformes fecais, utilizando-se a técnica do número mais provável (NMP/g), 168 amostras de variedades de queijo Minas (20 frescal, 48 canastra e 100 padronizado) coletadas em Belo Horizonte. Para a comparação de diferentes ensaios em temperatura elevada, utilizou-se o caldo EC isoladamente, e caldos EC e triptofano em paralelo. Visando à pesquisa de indol foi realizado ensaio para confirmação de produção de beta-D-glucuronidase e (mais) indol em caldo fluorocult lauril sulfato. Os resultados demonstraram não haver diferença estatística significativa entre as três metodologias utilizadas para a pesquisa de coliformes fecais, considerando os índices de aceitação definidos pelos padrões legais de inspeção de queijo Minas. A facilidade de execução do ensaio da beta-D-glucuronidase em caldo fluorocult lauril sulfato, associada à confiabilidade dos resultados e demanda de tempo (redução de 96 para até 48h), permitem sugeri-lo como método de escolha para enumeração de coliformes em queijo Minas. Resumo em inglês There were submitted to fecal coliforms enumeration, according to the most probable number (MPN/g) method, 168 samples of "Minas" cheese varieties (20 white, 48 "canastra" and 199 standardized), collected in Belo Horizonte, Brazil. In order to comparing different assays under high temperature, there was used EC broth isolated, and EC broth and tryptophane broth in parallel. With the aim of indol search, it was carried out an assay for beta-D-glucuronidase in indol product (mais) ion in fluorocult lauryl sulphate broth. The results did not show significant statistical difference among the three approaches used for fecal coliforms research, considering the acceptance indexes established by legal standards for "Minas" cheese inspection. The feasibility for beta-D-glucuronidase assay in fluorocult lauryl sulphate broth, coupled with results’ confidence and time required (reduction from 96 to up to 48h), suggest it as a preference method for fecal coliforms enumeration in "Minas" cheese.

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Transformação genética da batata cultivar Achat via Agrobacterium tumefaciens/ Genetic transformation of potato cultivar Achat by Agrobacterium tumefaciens

Torres, Antonio Carlos; Ferreira, Adriana Teixeira; Romano, Eduardo; Cattony, Mônica Kangussú; Nascimento, Adriana Souza
2000-03-01

Resumo em português Explantes de segmentos nodais de batata (Solanum tuberosum L.) cultivar Achat provenientes da cultura in vitro foram transformados, via Agrobacterium tumefaciens, estirpe LBA4404, contendo o vetor binário pBI121 com os genes npt II e o gus-intron. A regeneração de potenciais transformantes foi feita em meio seletivo contendo 50 mg.L-1 de canamicina. Foram obtidas plantas expressando resistência à canamicina e atividade da b-glucuronidase. Pela análise molecular nas (mais) plantas gus+, via PCR, constatou-se a amplificação dos genes npt II. A hibridização por Southern blotting demonstrou a inserção de pelo menos uma cópia do gene introduzido. Resumo em inglês Nodal segment explants of potato (Solanum tuberosum L.) cv Achat were excised from in vitro growing plants, and transformed with Agrobacterium tumefaciens LBA4404 carrying the binary vector pBI121 with npt II and gus-intron genes. The regeneration of putative transformants was done in medium supplemented with 50 mg.L-1 of kanamycin. Putative transformants expressing kanamycin resistance and b-glucuronidase activity were identified. PCR analysis of these plants showed ampl (mais) ification of the npt II in gus+ plants. Southern blotting hybridization revealed the insertion of at least one copy of the npt II gene.

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Aplicação de genes marcadores em estudos de ecologia microbiana com ênfase no sistema GUS/ Applications of markers genes on ecologic microbial studies with enphasis on GUS system

Mercante, Fábio Martins; Rumjanek, Norma Gouvêa; Franco, Avílio Antonio
2000-06-01

Resumo em português Muitos aspectos ecológicos envolvidos nas interações entre espécies leguminosas e estirpes de rizóbio têm sido facilmente entendidos com o emprego de técnicas que utilizam genes marcadores. A introdução de um gene marcador específico tem se mostrado altamente viável para análises dessas interações. Os genes marcadores são capazes de codificar para produtos que podem ser facilmente identificados ou medidos, especialmente, enzimas que podem atuar em diferente (mais) s substratos, fornecendo produtos coloridos ou fluorescentes facilmente detectáveis. De uma maneira geral, os genes marcadores têm sido utilizados em diferentes aspectos da ecologia microbiana, como nos estudos de competição entre estirpes de rizóbio, expressão de genes simbióticos, colonização da rizosfera e raízes, entre outros. Em todos esses estudos, os genes repórteres precisam ser introduzidos no genoma alvo através de um plasmídeo ou por inserção cromossomal. Nesta revisão, são enfatizados, principalmente, os diversos usos e aplicações de genes marcadores nos estudos de ecologia microbiana, com ênfase no sistema GUS (b-glucuronidase). Resumo em inglês Many of the ecological aspects involved with the interactions between legume species and rhizobia strains have been made easily to understood with the use of reporter gene techniques. The introduction of a specific reporter gene in an organism has shown to be highly efficient to analyze such interactions. These reporter genes generally code for products that can be easily identified or measured, mainly enzymes that can act on a variety of substrates, supplying colored or (mais) fluorescent detectable products. In general, the marker genes have been used in different aspects of microbial ecology, as in the competition studies among rhizobia strains, symbiotic gene expression, rhizosphere and root colonization, among others. In all studies, the marker genes need to be introduced into the genome by a plasmid or through a chromosomal insert. The present review focus, mainly, on the diverse use and applications of marker genes on ecological microbial studies with emphasis on the GUS gene system (b-glucuronidase).

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Determinação do 1-hidroxipireno em amostras de urina por cromatografia líquida de alta eficiência - estudo dos parâmetros de validação/ Determination of 1-hydroxypyrene in human urine by high-performance liquid chromatography - study of validation parameters

Faria, Patrícia Miranda de; Della Rosa, Henrique Vicente
2004-06-01

Resumo em português Os hidrocarbonetos aromáticos policíclicos (HAPs) correspondem a um grupo de substâncias químicas formadas durante a decomposição térmica de materiais orgânicos e, então, liberadas no meio ambiente. Vários trabalhos têm relatado efeitos adversos produzidos pelos HAPs, sendo muito destes efeitos relacionados ao desenvolvimento de câncer. Segundo a International Agency for Research on Cancer (IARC), seis HAPs são provavelmente carcinogênicos para o homem. Cons (mais) iderando as propriedades toxicológicas e com o intuito de prevenir uma exposição ocupacional a estes compostos, a monitorização biológica por meio da determinação do 1-hidroxipireno urinário é, recomendada. Para tanto, foi necessário validar metodologia para a quantificação do analito proposto. Este trabalho teve como objetivo otimizar as condições de um sistema de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e detecção de fluorescência para a análise do 1-hidroxipireno urinário e, ainda, validar os parâmetros analíticos para a determinação deste analito em amostras de urina. O método inclui hidrólise enzimática (²-glicuronidase/arilsulfatase) com posterior extração em fase sólida - SPE (C18). A separação cromatográfica foi consumada com uma coluna LC-PAH (15 cm x 4,6 mmID x 5 µm), fluxo em fase gradiente (metanol 40 e 100%) e finalmente detecção seletiva (excitação - 242 nm e emissão - 388 nm). O método demonstrou ser linear (r² = 0,999) na faixa de concentração estudada (0,2 a 40,0 ng/mL). Os limites de detecção e quantificação foram 0,5 ng/mL e 1,0 ng/mL, respectivamente. Os resultados de precisão e exatidão foram adequados para a análise (CV Resumo em inglês Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) constitute a group of chemical substances formed during thermal degradation of organic materials released in the environment. At present, several hundreds of papers reporting adverse effects produced by PAHs are mainly related to cancer development. According to International Agency for Research on Cancer (IARC), six PAHs are probably human carcinogenic. Considering the toxicological properties and with the aim to prevent occupation (mais) al exposures to these substances, a biological monitoring of urinary 1-hydroxypyrene is recommended. The first step to achieve this goal is to validate a methodology for urinary 1-OHP quantification. This work optimized the conditions of a high performance liquid chromatography system (HPLC) with fluorescence detection and validated the analytical parameters for urine 1-OHP determinations. The method includes an enzymatic hydrolysis (b-glucuronidase/arylsulfatase) followed by a solid phase extraction - SPE (C18). In addition a chromatographic separation was accomplished using a Supelcosil TM LC-PAH (15 cm x 4.6 mmID x 5 µm) with a gradient phase (methanol 40 and 100%) and finally a selective detection (excitation - 242 nm and emission - 388 nm). The method showed linearity (r² = 0.999) with the studied range of concentration (0.2 to 40.0 ng/mL). Detection and quantification limit were 0.5 ng/mL and 1.0 ng/mL, respectively. Relative standard deviation of the method was good (CV

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