Sample records for dna
from WorldWideScience.org

Sample records 1 - 20 shown. Select sample records:



4

DNA repair genetic polymorphisms and breast cancer in the Portuguese population Polimorfismos genéticos em genes de reparação de DNA e cancro da mama na população portuguesa

Costa, Sandra Maria Araújo da

Tese de Doutoramento Ciências da Saúde – Ciências Biológicas e Biomédicas Breast cancer is the leading cause of death among women in developing countries.Approximately 10% of all cases of breast cancer are inherited, exhibiting a familial pattern ofincidence, which have been attributable to mutatio...

DRIVER (Portuguese)

5

Detecção de DNA de Leishmania braziliensis em pacientes de leishmaniose tegumentar americana/ Detection of Leishmania braziliensis DNA in American tegumentary leishmaniasis patients/ Detección de DNA de Leishmania braziliensis en pacientes de leishmaniose tegumentaria americana

Martins, Leila; Alexandrino, Aline; Guimarães, Georgia
2010-06-01

Resumo em português Foi realizado diagnóstico para leishmaniose tegumentar americana a partir de sangue de pacientes residentes em dois municípios endêmicos do estado de Pernambuco. O DNA de 119 amostras de sangue foi extraído e submetido a reação em cadeia da polimerase. Utilizaram-se primers do minicírculo do DNA do cinetoplasto (kDNA) de Leishmania braziliensis, circulante em Pernambuco, cuja seqüência-alvo gera um fragmento de 750 pares de bases. No total 58 (48,7%) indivíduos (mais) apresentaram amplificação positiva e 61 (51,3%) negativa. Das amostras positivas para a PCR, 37 (≅ 64%) pertenciam a indivíduos tratados e sem lesão. Conclui-se que a técnica de PCR é eficaz para identificar o DNA de leishmânia em material de biópsias e em sangue venoso. Resumo em espanhol Fue realizado diagnóstico para leishmaniosis tegumentaria americana a partir de sangre de pacientes residentes en dos municipios endémicos del estado de Pernambuco (Noreste de Brasil). El DNA de 119 muestras de sangre fue extraído y sometido a la reacción en cadena de la polimerasa. Se utilizaron primers del minicírculo del DNA del cinetoplasto (kDNA) de Leishmania braziliensis, circulante en Pernambuco, cuya secuencia blanco genera un fragmento de 750 pares de bases (mais) . En total 58 (48,7%) individuos presentaron amplificación positiva y 61 (51,3%) negativa. De las muestras positivas para la PCR, 37 (≅64%) pertenecían a individuos tratados y sin lesión. Se concluyó que la técnica de la PCR es eficaz para identificar el DNA de Leishmania en material de biopsias y en sangre venosa. Resumo em inglês Diagnostic tests for American tegumentary leishmaniasis were performed on blood samples of patients living in two endemic municipalities in the state of Pernambuco, Northeastern Brazil. DNA was extracted from 119 samples and used as template for polymerase chain reaction (PCR) analysis. The tests used primers specific for the kinetoplast mini-circle DNA (kDNA) of Leishmania braziliensis, a species circulating in Pernambuco, which amplify a 750 base pair target sequence. I (mais) n total, 58 subjects (48.7%) showed positive PCR amplification and 61 (51.3%) were negative. Of the PCR-positive samples, 37 (≅64%) were from treated, lesion-free subjects. In conclusion, the PCR technique is efficacious at identifying Leishmania DNA in biopsy and venous blood samples.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

6

Detecção de DNA de Leishmania braziliensis em pacientes de leishmaniose tegumentar americana/ Detection of Leishmania braziliensis DNA in American tegumentary leishmaniasis patients/ Detección de DNA de Leishmania braziliensis en pacientes de leishmaniose tegumentaria americana

Martins, Leila; Alexandrino, Aline; Guimarães, Georgia
2010-06-01

Resumo em português Foi realizado diagnóstico para leishmaniose tegumentar americana a partir de sangue de pacientes residentes em dois municípios endêmicos do estado de Pernambuco. O DNA de 119 amostras de sangue foi extraído e submetido a reação em cadeia da polimerase. Utilizaram-se primers do minicírculo do DNA do cinetoplasto (kDNA) de Leishmania braziliensis, circulante em Pernambuco, cuja seqüência-alvo gera um fragmento de 750 pares de bases. No total 58 (48,7%) indivíduos (mais) apresentaram amplificação positiva e 61 (51,3%) negativa. Das amostras positivas para a PCR, 37 (≅ 64%) pertenciam a indivíduos tratados e sem lesão. Conclui-se que a técnica de PCR é eficaz para identificar o DNA de leishmânia em material de biópsias e em sangue venoso. Resumo em espanhol Fue realizado diagnóstico para leishmaniosis tegumentaria americana a partir de sangre de pacientes residentes en dos municipios endémicos del estado de Pernambuco (Noreste de Brasil). El DNA de 119 muestras de sangre fue extraído y sometido a la reacción en cadena de la polimerasa. Se utilizaron primers del minicírculo del DNA del cinetoplasto (kDNA) de Leishmania braziliensis, circulante en Pernambuco, cuya secuencia blanco genera un fragmento de 750 pares de bases (mais) . En total 58 (48,7%) individuos presentaron amplificación positiva y 61 (51,3%) negativa. De las muestras positivas para la PCR, 37 (≅64%) pertenecían a individuos tratados y sin lesión. Se concluyó que la técnica de la PCR es eficaz para identificar el DNA de Leishmania en material de biopsias y en sangre venosa. Resumo em inglês Diagnostic tests for American tegumentary leishmaniasis were performed on blood samples of patients living in two endemic municipalities in the state of Pernambuco, Northeastern Brazil. DNA was extracted from 119 samples and used as template for polymerase chain reaction (PCR) analysis. The tests used primers specific for the kinetoplast mini-circle DNA (kDNA) of Leishmania braziliensis, a species circulating in Pernambuco, which amplify a 750 base pair target sequence. I (mais) n total, 58 subjects (48.7%) showed positive PCR amplification and 61 (51.3%) were negative. Of the PCR-positive samples, 37 (≅64%) were from treated, lesion-free subjects. In conclusion, the PCR technique is efficacious at identifying Leishmania DNA in biopsy and venous blood samples.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

7

Danos ao DNA promovidos por ácido 5-aminolevulínico: possível associação com o desenvolvimento de carcinoma hepatocelular em portadores de porfiria aguda intermitente/ DNA damage induced by 5-aminolevulinic acid: a possible association with the development of hepatocellular carcinoma in acute intermittent porphyria patients

Onuki, Janice; Teixeira, Priscila C.; Medeiros, Marisa H.G.; Di Mascio, Paolo
2002-07-01

Resumo em inglês 5-Aminolevulinic acid (ALA) is a heme precursor accumulated in acute intermittent porphyria (AIP), which might be associated with hepatocellular carcinoma (HCC) in symptomatic patients. Under metal catalyzed oxidation, ALA and its cyclic dimerization product, 3,6-dihydropyrazine-2,5-dipropanoic acid, produce reactive oxygen species that damage plasmid and calf thymus DNA bases, increase the steady state level of 8-oxo-7,8-dihydro-2´-deoxyguanosine in liver DNA and promot (mais) e mitochondrial DNA damage. The final product of ALA, 4,5-dioxovaleric acid (DOVA), is able to alkylate guanine moieties, producing adducts. ALA and DOVA are mutagenic in bacteria. This review shows an up-to-date literature data that reinforce the hypothesis that the DNA damage induced by ALA may be associated with the development of HCC in AIP patients.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

8

Teste de DNA para verificação de parentesco em cães: avaliação do método não automatizado com o auxílio do primer CMR S/ DNA test for parentage verification in dogs: evaluation of the non-automatized method with assistance of the primer CMR S

Oliveira, P.F.; Oliveira, D.A.A.; Teixeira, C.S.; Velloso, A.P.S.; Coelho, E.G.A.; Rodrigues, S.G.; Alves, C.
2002-10-01

Resumo em inglês To evaluate the precision of the DNA tests using the non-automatized technique for individual identification and parentage tests, 105 Rottweiler dogs were studied using the primer CMR S. The sample was composed of 39 animals belonging to 11 complete families and their progenies, and 66 non related individuals until the second generation, derived from kennels located in the states of Minas Gerais and São Paulo. The CMR S primer was used for the Polimerase Chain Reaction ( (mais) PCR). The results showed the inefficiency of the technique, even when analyzed through the automated gel analysis system. Also showed the impossibility of its commercial use due to the fact of does not permit the storage of data for subsequent use.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

9

Lesões em DNA induzidas pela autoxidação de S(IV) na presença de íons metálicos de transição/ DNA damage induced by the autoxidation of S(IV) in the presence of transition metal ions

Moreno, Ruben G. M.; Alipázaga, María V.; Medeiros, Marisa H. G.; Coichev, Nina
2006-10-01

Resumo em inglês The oxidation of sulfite catalyzed by transition metal ions produces reactive oxysulfur species that can damage plasmid and isolated DNA in vitro. Among the four DNA bases, guanine is the most sensitive to one-electron oxidation promoted by the species formed in the autoxidation of sulfite (HSO5-, HO•, SO3•-, SO4•- and SO5•-) due to its low reduction potential and ability to bind transition metal ions capable to catalyze oxidative processes. Some oxidative DNA lesions (mais) are promutagenic and oxidative DNA damage is proposed to play a crucial role in certain human pathologies, including cancer.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

10

Extração de DNA a partir de sangue humano coagulado para aplicação nas técnicas de genotipagem de antígenos leucocitários humanos e de receptores semelhantes à imunoglobulina/ DNA extraction from coagulated human blood for application in genotyping techniques for human leukocyte antigen and immunoglobulin-like receptors

Cardozo, Daniela Maira; Guelsin, Gláucia Andréia; Clementino, Samaia Laface; Melo, Fabiano Cavalcante de; Braga, Marco Antônio; Souza, Cleonice de; Moliterno, Ricardo Alberto; Visentainer, Jeane Eliete Laguila
2009-12-01

Resumo em português O objetivo deste estudo foi padronizar uma metodologia de extração de DNA de alta qualidade a partir de amostras de sangue coagulado. Quarenta e oito amostras de sangue humano coagulado foram utilizadas para a extração de DNA pelo kit comercial EZ-DNA® (Biological Industries, Beit Haemek, Israel), pelo kit de coluna Neoscience® (One Lambda Inc., San Diego, CA) e pelo método modificado de salting out. Apenas o método de salting out foi capaz de extrair altas concen (mais) trações de DNA (média, 180ng/µL), as quais foram medidas pelo detector de fluorescência Qubit® (Invitrogen, USA). Este método permitiu a amplificação dos genes HLA (human leukocyte antigens) pela tecnologia PCR-SSO (polymerase chain reaction - specific sequence of oligonucleotides) Luminex, a qual exige DNA de boa qualidade, e de genes KIR (killer cell immunoglobulin-like receptors) pela técnica made in house PCR-SSP (polymerase chain reaction-sequence specific of primers), a qual demanda uma concentração específica de DNA (10ng/µL). Concluímos que a técnica de salting out modificada foi muito eficiente, simples e rápida para a extração de DNA de amostras de sangue humano coagulado, com o objetivo de realizar a genotipagem de genes HLA e KIR. Resumo em inglês The objective of this study was to standardize a method for extracting high-quality DNA from samples of coagulated blood. Forty-eight samples of human coagulated blood were used for DNA extraction by means of the EZ-DNA® commercial kit (Biological Industries, Beit Haemek, Israel), the Neoscience® column kit (One Lambda Inc., San Diego, CA, USA) and a modified salting-out method. Only the salting-out method was able to extract high concentrations of DNA (mean, 180 ng/¼l (mais) ), which were measured using the Qubit® fluorescence detector (Invitrogen, USA). This method enabled amplification of HLA (human leukocyte antigen) genes using the Luminex PCR-SSO (polymerase chain reaction - sequence-specific oligonucleotide) technology, which demands good quality DNA, and amplification of KIR (killer-cell immunoglobulin-like receptor) genes using an in-house PCR-SSP (polymerase chain reaction - sequence-specific primer) technique, which demands a specific concentration of DNA (10 ng/¼l). We concluded that the modified salting-out technique was very efficient, simple and fast for DNA extraction from human coagulated blood samples, with the aim of genotyping the HLA and KIR genes.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

11

Detecção do DNA do papilomavírus humano após excisão da zona de transformação com alça diatérmica para tratamento de neoplasia intra-epitelial cervical/ Human papillomavirus DNA detection after large loop excision of the transformation zone for the treatment of cervical intraepithelial neoplasia

Figueirêdo, Priscila Garcia; Derchain, Sophie Françoise Mauricette; Sarian, Luis Otávio Zanatta; Gontijo, Renata Clementino; Andrade, Liliana Aparecida De Ângelo; Campos, Elizabete Aparecida; Martinez, Edson Zangiacomi
2003-02-01

Resumo em português OBJETIVO: avaliar a presença do DNA do papilomavírus humano (HPV) de alto risco oncológico antes e quatro meses após excisão da zona de transformação com alça diatérmica em mulheres com neoplasia intra-epitelial cervical (NIC). MÉTODOS: neste estudo clínico prospectivo foram incluídas 78 mulheres submetidas à excisão da zona de transformação tratadas no período de fevereiro a dezembro de 2001. Todas foram submetidas a colposcopia, citologia oncológica e (mais) captura híbrida II (CH II) antes da cirurgia e após 4±1,25 meses. Para análise estatística utilizou-se o cálculo do odds ratio (OR) com intervalo de confiança de 95% (IC 95%). RESULTADOS: antes da excisão, 67 (86%) mulheres apresentavam CH II positiva para DNA-HPV de alto risco oncológico e destas, apenas 22 (33%) mantiveram a CH II positiva quatro meses após. A detecção do DNA-HPV após o tratamento não se relacionou com a carga viral prévia, presença de doença nas margens da peça cirúrgica ou idade da mulher. Após quatro meses, a detecção do DNA-HPV associou-se significativamente com a presença de alterações citológicas (OR = 4,8; IC 95% = 1,7-13,7), porém não se relacionou com doença residual ou recidiva histológica (OR = 6,0; IC 95% = 0,8-52,3). CONCLUSÃO: após o tratamento da NIC, a detecção do DNA-HPV diminuiu significativamente porém não se observou relação com a presença de doença residual ou recidiva histológica. Resumo em inglês PURPOSE: to evaluate the detection of high oncogenic risk human papillomavirus DNA (HPV-DNA) immediately before and 4±1.25 months after large loop excision of the transformation zone (LLETZ) in the treatment of cervical intraepithelial neoplasia (CIN). METHODS: in this clinical prospective study, 78 patients submitted to LLETZ from February to December 2001 were enrolled. All patients were submitted to colposcopic evaluation and had Pap smear and hybrid capture II (mais) (HC II) specimens collected immediately before LLETZ and four months after the procedure. Statistical analysis was made through odds ratio (OR) calculations with 95% confidence interval (95% CI). RESULTS: before excision, 67 (86%) women had positive HC II for high oncogenic risk HPV-DNA, while four months afterwards only 22 (33%) maintained positive HC II results. Positive results of HPV-DNA after treatment were not associated with previous viral load, compromised margins in the surgical specimen or age. Four months after the procedure, detection of HPV-DNA was significantly associated with cytological abnormalities (OR = 4.8; CI 95%: 1.7-13.7) but not with histological residual disease or relapse (OR = 6.0; CI 95%: 0.8-52.3). CONCLUSION: HPV-DNA detection was significantly reduced after treatment of CIN, but was not associated with the presence of histologic residual disease or relapse.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

12

Extração de DNA de materiais de arquivo e fontes escassas para utilização em reação de polimerização em cadeia (PCR)/ Methods of DNA extraction from archived materials and rare sources for utilization in polymer chain reaction

Barea, Jaqueline A.; Pardini, Maria Inês M. C.; Gushiken, Tsieko
2004-12-01

Resumo em português Este trabalho visou a comparação de cinco métodos diferentes de extração de DNA de materiais de arquivo (tecidos incluídos em parafina, esfregaços de sangue periférico - corados e não corados com Leishman, lâminas com mielogramas, gotas de sangue em Guthrie Card) e de fontes escassas (células bucais, um e três bulbos capilares e 2 mL de urina), para que fossem avaliadas a facilidade de aplicação e a facilidade de amplificação deste DNA pela técnica da rea (mais) ção de polimerização em cadeia (PCR). Os métodos incluíram digestão por proteinase K, seguida ou não por purificação com fenol/clorofórmio; Chelex 100® (BioRad); Insta Gene® (BioRad) e fervura em água estéril. O DNA obtido foi testado para amplificação de três fragmentos gênicos: Brain-derived neutrophic factor (764 pb), Factor V Leiden (220 pb) e Abelson (106 pb). De acordo com o comprimento do fragmento gênico estudado, da fonte potencial de DNA e do método de extração utilizado, os resultados caracterizaram o melhor caminho para padronização de procedimentos técnicos a serem incluídos no manual de Procedimentos Operacionais Padrão do Laboratório de Biologia Molecular do Hemocentro - HC - Unesp - Botucatu. Resumo em inglês The present work aimed at comparing five different methods of DNA extraction of samples from archived materials (paraffin-embedded tissues, peripheral blood smears - stained or not with Leishman, aspired bone marrow smears and Guthrie card bloodspots) and from rare sources (oral cells, one and three capillary bulbs, 2 mL of urine), to evaluate the ease of application and the possibility of amplification of this DNA by the polymerization chain reaction (PCR) technique. The (mais) methods included proteinase K digestion - followed or not by phenol/chloroform purification, Chelex 100® (BioRad), InstaGene® (BioRad) and boiling in the sterile water. The DNA obtained was tested for amplification of three genic fragments: the brain-derived neutrophic factor gene (764 bp), the Factor V Leiden gene (220 bp) and the Abelson gene (106 bp). According to the gene fragment length studied, the DNA potential source and the extraction method used, the results characterized the best way to standardize technical procedures to be included in the Standard Operational Procedure Manual of the Molecular Biology Laboratory of the Blood Center in the Medicine School of Unesp, Botucatu, Brazil.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

14

Extração de DNA genômico de tecidos foliares maduros de espécies nativas do cerrado/ Extraction of genomic DNA from leaf tissues of mature native species of the cerrado

Silva, Márcia Nara da
2010-12-01

Resumo em português Grandes quantidades de contaminantes na amostra de DNA dificultam a obtenção de DNA genômico de qualidade durante a extração. A presença de polissacarídeos, fenóis e outros compostos secundários representa o principal problema com o procedimento de isolamento do DNA e sua aplicação subsequente, por inibir a atividade das enzimas Taq DNA polimera-se e enzimas de restrição. Neste estudo, descreveu-se um procedimento modificado baseado no hexadecyltrimethylammon (mais) ium (CTAB), rendendo DNA genômico satisfatório para técnicas de manipulação subsequente, como reações de PCR e digestão com enzima de restrição. Nesse protocolo foram utilizadas diferentes concentrações de β-mercaptoetanol no tampão de extração (0,0; 0,2; 10; 15; 25; e 50 uL de β-mercaptoetanol/mL do tampão de extração: 100 mM de Tris-HCl, pH 8; 20 mM de EDTA; 1,4 mM de NaCl; 2% de CTAB; 1% de PVP), cujo procedimento foi aplicado no caso de folhas maduras e testado em Annona crassiflora (arati-cum), Eugenia dysenterica (cagaita), Anacardium humilis (caju-do-campo), Hancornia speciosa (mangaba) e Caryocar brasiliense (pequi). O protocolo foi eficiente no isolamento de DNA livre de polissacarídeos e polifenóis, com rendimento do DNA com alto peso molecu-lar, utilizando-se concentrações a partir de 1% de β-mercaptoetanol no tampão de extração. O DNA isolado por esse método mostrou alta pureza, de acordo com as análises de digestão por restrição e amplificação por PCR. Resumo em inglês Great amounts of contaminants in DNA samples hamper the extraction of high-quality genomic DNA. The main problem is the presence of polysaccharides, phenols and other secondary metabolites that impair the DNA isolation procedure and subsequent application, by inhibiting the Taq DNA polymerase and restriction enzyme activity. This study describes a modified procedure based on hexadecyltrimethylammonium (CTAB) from which genomic DNA, ap-propriate for subsequent manipulation (mais) such as PCR reactions and restriction enzyme diges-tion, is derived. This protocol uses different β-mercaptoethanol concentrations in the extrac-tion buffer ( 0.0; 0.2; 10 ; 15; 25 and 50 uL β-mercaptoethanol/ml from the extraction buffer: 100mM Tris-HCl, pH 8 ; 20 mM EDTA, 1.4 M NaCl ; 2% CTAB; 1% PVP ). The procedure was tested on mature leaves of Annona crassiflora (araticum), Eugenia dysenterica (cagaita), Anacardium humilis (caju-do-campo), Hancornia speciosa (mangaba) e Caryocar brasiliensis (pequi ).The protocol was efficient in the isolation of polysaccharide and polyphenol-free DNA of high molecular weight using β-mercaptoethanol concentrations of over 1 % in the extraction buffer. The purity of thereby isolated DNA isolated was high according to the di-gestion analyses by PCR restriction and amplification.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

15

Detecção do DNA de Chlamydia trachomatis em espondiloartropatias e artrite reumatóide/ Detection of Chlamydia trachomatis DNA in spondyloarthropathies and rheumatoid arthritis

Navarrete Fernandez, Rafael; Ximenes, Antônio Carlos; Costa Alves, Maria de Fátima
2005-10-01

Resumo em português Chlamydia trachomatis é a bactéria responsável pela doença sexualmente transmissível mais prevalente no mundo. A maioria das infecções em homens e mulheres é assintomática e, quando não diagnosticada e tratada, pode causar artrite e complicações relacionadas ao aparelho reprodutor feminino. OBJETIVO: pesquisar o DNA de C. trachomatis no líquido sinovial e urina de pacientes com espondiloartropatias e artrite reumatóide (AR), avaliar a presença de anticorpos (mais) séricos IgG e IgM anti-C. trachomatis nesses dois grupos de doenças e identificar o antígeno HLA-B27 em pacientes com espondiloartropatias. MÉTODOS: a população do estudo consistiu em 15 pacientes com espondiloartropatias: nove com espondiloartropatia indiferenciada (EI) e seis com artrite reativa (ARe) (grupo I) e 15 pacientes com AR (grupo II). O DNA clamidial foi pesquisado em amostras de líquido sinovial e urina de todos os pacientes, empregando-se a PCR (Amplicor Roche, Suíça). Os anticorpos IgG e IgM anticlamidiais foram quantificados por imunofluorescência indireta (IFI), enquanto o HLA-B27 foi tipado em 15 pacientes do grupo I por citometria de fluxo. RESULTADOS: o DNA da C. trachomatis foi evidenciado apenas em uma amostra de líquido sinovial do grupo I (6,7%), sendo o paciente portador de ARe. Em dois pacientes com AR, o DNA clamidial foi identificado na urina (13,3%). Os anticorpos IgG anticlamidiais estavam presentes em oito pacientes da população estudada, três do grupo I (20%) e cinco do grupo II (33,3%). O maior título desse anticorpo (1/256) associou-se com a presença do DNA clamidial na urina de um paciente do grupo II. O anticorpo IgM não foi detectado em nenhuma amostra dos dois grupos. O antígeno HLA-B27 foi positivo em quatro indivíduos do grupo II (26,7%) e sua presença relacionou-se com sacroileíte. CONCLUSÕES: os resultados deste estudo indicam que em pacientes com diagnóstico de espondiloartropatias e artrite reumatóide, com quadro articular em atividade, a C. trachomatis não pode ser excluída como agente desencadeador. Resumo em inglês Chlamydia trachomatis is the bacteria responsible for the most prevalent sexually transmitted disease worldwide. Most of the infections in men and women is asymptomatic and when undiagnosed and untreated may reach the joints causing not only arthritis, but also other acknowledged complications related to the female reproductive system. OBJECTIVE: To investigate C. trachomatis DNA in the urine and synovial fluid from patients with spondyloarthropathies (SpA) and rheumatoid (mais) arthritis (RA) and evaluate serum anti-C. trachomatis IgG and IgM antibodies. METHODS: The population consisted of 15 patients with spondyloarthropathies, being 9 with undifferentiated spondyloarthropathy (US) and 6 with reactive arthritis (ReA) (group I), and 15 patients with rheumatoid arthritis (RA) (group II). The chlamydial DNA was assessed in synovial fluid and urine samples of all patients by Amplicor (Roche, Swiss) PCR. The anti-chlamydial IgG and IgM antibodies were quantified through indirect imunofluorescence (IIF), while 15 patients of group I were typed for HLA-B27 by the use of flow citometry. Sociodemographical data and all information on sexual behaviour and presence of symptoms were collected through a (questionnaire in the form of) an interview. RESULTS: C. trachomatis DNA was found in only one synovial fluid sample from patient with ReA (6,7%). In two patients with RA, chlamydial DNA was identified in the urine sample (13,3%). The anti-chlamydial IgG antibodies were present in eight patients of the population studied; being three patients from group I (20%), and five from group II (33,3%). The greatest titer of this antibody 1/256 was associated with the presence of chlamydial DNA in a patient from group II. The IgM antibody was not detected in any of the samples from both groups. Four individuals from group II (26,7%) were HLA-B27 positive and its presence was related to sacroiliitis. CONCLUSIONS: The results in this study show that in patients with spondyloarthropathies and rheumatoid arthritis, presenting a picture of articular activity, one might not exclude C. trachomatis as the triggering agent

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

16

Ploidia de DNA em astrocitomas: estudo em 66 pacientes brasileiros/ DNA ploidy in glioma: study in 66 Brazilian patients

KRUTMAN-ZVEIBIL, DEBORAH; BRANDT, REINALDO ANDRÉ; GUIDUGLI NETO, JOÃO
1999-12-01

Resumo em português A determinação do conteúdo de DNA nuclear (fração de fase S e ploidia de DNA) foi realizada por meio de análise de imagem em 66 astrocitomas, a partir de material fixado em formalina e seccionado em cortes de 5 micrômetros corados pela técnica de Feulgen. Nossos resultados mostraram forte relação entre a idade do paciente, grau histológico e sobrevida , com a ploidia de DNA e o percentual de células em fase de síntese. A análise da atividade proliferativa de (mais) astrocitomas intracranianos é a nosso ver muito útil no entendimento do comportamento biológico , do prognóstico e para o planejamento terapêutico dessas lesões. Resumo em inglês The determination of the nuclear DNA content (S-phase fraction (SPF) and ploidy) was carried out by image analysis (IA). The morphometric and densitometric features of Feulgen-stained nuclei were determined from stored formalin-fixed and paraffin-embedded specimens of 66 patients with intracranial astrocytomas. Our results suggest a strong relationship between patient age, histological grade,survival and DNA ploidy and SPF. The analysis of the proliferative activity of in (mais) tracranial astrocytomas is very helpfull in understanding biological stractification and prognostication to assess tumor behaviour and planning of treatment strategies.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

17

Deteccção do DNA de Mycobacterium leprae em secreção nasal/ Detection of Mycobacterium leprae DNA in nasal swab/ Detección del ADN de Mycobacterium leprae en secreción nasal

Pontes, Ana Rosa Botelho; Almeida, Maria das Graças Carvalho; Xavier, Marília Brasil; Quaresma, Juarez Antonio Simões; Yassui, Edna Aoba
2008-11-01

Resumo em português Estudos têm demonstrado alta sensibilidade da técnica da reação em cadeia de polimerase (PCR) na identificação do DNA do Mycobacterium leprae. Este estudo objetivou avaliar a sensibilidade da PCR na detecção do DNA do M. leprae em "swab" nasal de pacientes hansenianos e comparar os resultados com a baciloscopia e formas multibacilares (MBs) e paucibacilares (PBs). Foram coletadas amostras de secreção nasal de 24 pacientes hansenianos, conservadas em solução de (mais) lise um e dois. Os resultados da PCR foram altamente significativos (p Resumo em espanhol Los estudios han demostrado una alta sensibilidad de la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) para identificar el ADN de Mycobacterium leprae. El objetivo del estudio fue evaluar la sensibilidad de la PCR en la detección de ADN de M. leprae en hisopo nasal de los pacientes hansenianos y comparar los resultados con la baciloscopía y las formas multibacilares (MBs) y paucibacilares (PBS). Se obtuvieron muestras de secreción nasal de 24 pacientes hansenia (mais) nos, conservados en solución de lisis uno y dos. Los resultados de la PCR fueron muy significativas (p Resumo em inglês Studies have demonstrated high sensibility of the polimerase chain reaction (PCR) technique in the identification of the Mycobacterium leprae DNA . This study aimed to evalue the PCR sensibility at the detection of the M. leprae DNA in nasal swab of leprosy patients and to compare the results with the bacilloscopy and multibacillary (MBs) and paucibacilares (PBs) forms. Nasal secretion samples of 24 leprosy patients were collected, and were preserved in one and two lise's (mais) solution. The PCR results were highly significant (p

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

18

EXTRAÇÃO DE DNA GENÔMICO DE Passiflora spp. PARA ANÁLISES PCR-RAPD/ GENOMIC DNA EXTRACTION FROM Passiflora spp. FOR PCR-RAPD ANALYSES

MOLINARI, HUGO BRUNO; CROCHEMORE, MARIA LÚCIA
2001-08-01

Resumo em português A identificação e caracterização da diversidade genética de plantas por meio de técnicas moleculares envolvem a avaliação de vários indivíduos, necessitando-se, portanto, de métodos rápidos e precisos de extração do DNA. O co-isolamento de polissacarídeos, fenóis e compostos secundários é o principal problema encontrado no isolamento e purificação de DNA vegetal. Folhas das diversas espécies de Passiflora possuem níveis variados desses compostos que (mais) podem comprometer este procedimento. O presente estudo foi realizado com o objetivo de avaliar a qualidade e quantidade de DNA de folhas de variedades de Passiflora spp., utilizando-se de três métodos de extração. Os três métodos forneceram DNA em qualidade e quantidade suficientes para a realização da técnica PCR-RAPD. Resumo em inglês The identification and characterization of the genetic diversity of plants by molecular techniques involve the evaluation of several individuals, therefore requiring fast and precise extraction methods of DNA. Co-isolation of polysaccharides, phenols and secondary products is the main problem during isolation and purification of plant DNA. The leaves of several species of Passiflora have different levels of those compounds that can compromise this procedure. The objective (mais) of this study was to evaluate the quality and amount of DNA extracted from Passiflora spp. varieties using three extraction methods. The three methods supplied DNA in quality and quantity sufficient amount for PCR-RAPD analyses.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

19

Caracterização do dna ribossômico do isolado de Scleroderma UFSMSc1 de Eucalyptus grandis W. Hill ex-maiden/ Ribosomal dna characterization of Scleroderma UFSMSc1 of Eucalyptus grandis W. Hill ex-maiden

Lupatini, Manoeli; Mello, Andrea Hentz de; Antoniolli, Zaida Inês
2008-12-01

Resumo em português O ácido desoxiribunocléico ribossomal (rDNA) é utilizado como uma ferramenta importante para caracterizar o polimorfismo entre os fungos. Existem muitas cópias de rDNA as quais são arranjadas por espaços não codificados. Essas cópias são altamente conservadas entre espécies de fungos. O objetivo deste trabalho foi estudar a região do Espaço Interno Transcrito (ITS) e analisar as diferenças no polimorfismo da seqüência dessa região no fungo Scleroderma UFSM (mais) Sc1 com seqüências dos isolados de Scleroderma e Pisolithus do banco de dados GenBank. O DNA do isolado de Scleroderma UFSMSc1 foi extraído por meio da solução de extração à base de CTAB. A partir do DNA, foram feitas reações de PCR com os oligonucleotídeos iniciadores universais ITS1 e ITS4, cujo produto amplificado foi purificado e seqüenciado. A região do ITS do fungo mostrou uma banda simples de aproximadamente 650 pares de base. Na análise da seqüência dessa região em comparação com algumas depositadas no GenBank, observou-se a formação de agrupamento com espécies de Scleroderma. Os resultados mostraram que essa técnica favorece a identificação de espécies de Scleroderma, visto que tais fungos são difíceis de ser identificados apenas por seus caracteres morfológicos. Resumo em inglês The ribossomal deoxyribonucleic acid (rDNA) represents an important tool in the characterization of fungi polymorphism. There are many copies of rDNA arranged in non encoded spaces. These copies are highly preserved in fungus species. The purpose of this study was to investigate the Internal Transcribed Spacer (ITS) region and to analyze the differences in the sequence polymorphism of the ITS region in the fungus Scleroderma UFSMSc1 with sequences of Scleroderma and Pisol (mais) ithus isolates from the GenBank database. The DNA of the Scleroderma UFSMSc1 isolate was extracted with CTAB solution. PCR reactions were carried out with the universal primers ITS1 and ITS4. The amplified products were purified and sequenced. A simple band with a fragment of approximately 650 base pairs was observed in the ITS region of the fungus. The formation of grouping with Scleroderma species was observed in the sequence analysis of this region in comparison with entries of the GenBank database. The results confirmed this technique for Scleroderma species identification, since these fungi are not easily identified by morphological characters.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

20

Avaliação dos danos do DNA na mucosa esofágica e sangue periférico de portadores da doença do refluxo gastroesofágico/ Evaluation of DNA damage in the esophageal mucosa and peripheral blood of patients with gastroesophageal reflux disease

Bertolozzo, Edilene Lúcia; Freire-Maia, Dertia Villalba; Lerco, Mauro Masson; Plácido, Marcelo Sady; Henry, Maria Aparecida Coelho de Arruda
2010-12-01

Resumo em português RACIONAL: A doença do refluxo gastroesofágico é a afecção digestiva de maior prevalência. Os portadores podem apresentar na evolução algumas complicações, sendo o esôfago de Barrett a de maior importância, tendo em vista seu potencial de malignidade. Todavia os processos inflamatórios do trato gastrointestinal podem apresentar degeneração maligna. OBJETIVOS: Avaliar os possíveis danos do DNA em portadores de esofagite de refluxo gastroesofágico de vários (mais) graus e verificar a aplicação do ensaio Cometa na detecção dos mesmos. MÉTODOS: Foram estudados 25 pacientes distribuídos em quatro grupos: controle (n=5), esofagite leve (n=8), esofagite severa (n=5) e câncer (n=7). O ensaio Cometa foi realizado no sangue periférico (linfócitos) e biópsia do terço distal do esôfago. RESULTADOS: O ensaio Cometa detectou danos no DNA nos pacientes com esofagite leve e severa (sangue periférico e biópsia), sendo que na esofagite severa a intensidade dos danos foi maior (p Resumo em inglês BACKGROUND: The gastroesophageal reflux disease is the most prevalent digestive disorder. Patients with it may present some complications during its development, and Barrett's esophagus is the most important in view of its potential malignancy. However, the inflammatory processes of the gastrointestinal tract may show malignant degeneration. AIM: To assess possible DNA damage in patients with gastroesophageal reflux esophagitis of various degrees and to evaluate the appli (mais) cation of the Comet assay in its detection. METHODS: Twenty-five patients were studied. They were divided into four groups: control (n=5), mild esophagitis (n=8), severe esophagitis (n=5) and cancer (n=7). The Comet assay was performed on peripheral blood cells (lymphocytes) and biopsy of the distal esophagus. RESULTS: The Comet assay detected DNA damage in patients with mild and severe esophagitis (peripheral blood and biopsy), and damage intensity was greater in severe esophagitis (p

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

21

Sequenciamento de DNA de nova geração e suas aplicações na genômica de plantas/ Next generation DNA sequencing and its applications in plant genomics

Carvalho, Mayra Costa da Cruz Gallo de; Silva, Danielle Cristina Gregorio da
2010-03-01

Resumo em português As plataformas de sequenciamento de nova geração são uma alternativa poderosa para estudos de genômica estrutural e funcional. Na genômica de plantas, os trabalhos com as novas plataformas têm sido destinados ao sequenciamento de transcritos, ressequenciamento ou sequenciamento de novo de genomas plastidiais. Neste trabalho, são detalhadas as tecnologias das plataformas mais utilizadas atualmente, bem como é revisada a aplicação dessas tecnologias na genômica estrutural e funcional de plantas. Resumo em inglês The next-generation DNA sequencing technologies are a powerful alternative to studies in structural and functional genomics. In plant genomics studies, the work with these new platforms has been used for the sequencing of transcripts, re-sequencing, and the de novo sequencing of plastid genomes. This research details the technological principles of the next-generation DNA sequencing platforms most used and reviews its application in structural and functional plant genomics.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

22

Protocolo da extração de DNA de material parafinado para análise de microssatélites em leiomioma/ DNA extraction from paraffin material protocol in order to analyse microssatellites in uterine leiomyoma

Nascimento, Ericson Martins; Spinelli, Marilda Osti; Rodrigues, Consuelo Junqueira; Bozzini, Nilo
2003-09-01

Resumo em português É apresentada a padronização de protocolo de extração de DNA de material parafinado para análise da instabilidade de microssatélites de genes relacionados ao leiomioma uterino, utilizando-se 30mg a 40mg de tecido retirado de blocos de parafina. Os blocos são desparafinizados por banhos de xilol a 65ºC, reidratados com soluções de concentrações decrescentes de ETOH e água deionizada. A extração de DNA é obtida através das etapas de lise celular, com solu� (mais) �ão Promega, digestão de proteínas por proteinase K, precipitação com proteínas com solução Promega e precipitação do DNA com ETOH 70% gelado e ressuspendido com solução Promega. Este protocolo resulta em um DNA viável para uso na reação em cadeia da polimerase (PCR). Resumo em inglês The standardization of the protocol of the DNA extraction from paraffin material in order to analyze the instability of microsatellites in genes related to the uterine leiomyoma, using 30 to 40mg of tissue removed from paraffin blocks is presented. Desparaffin throught xilol baths to 65ºC, rehydrated with solutions of decreasing concentrations of ETOH and deionisation water. The extraction of DNA was obtained through the stages of cellular lysis, with Promega solution, d (mais) igestion of proteins by Proteinase K, precipitation proteins with Promega solution and precipitation of DNA with ETOH 70% colded and ressuspended with Promega solution. This protocol results in a viable DNA to be use in the Polimerase Chain Reaction (PCR).

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

23

Avaliação do dano oxidativo ao DNA de células normais e neoplásicas da mucosa cólica de doentes com câncer colorretal/ Evaluation of DNA oxidative damage in normal and neoplastic cells of colonic mucosa in patients with colorectal cancer

Ribeiro, Marcelo Lima; Priolli, Denise Gonçalves; Miranda, Daniel Duarte da Conceição; Paiva, Demétrius Arçari; Pedrazzoli Júnior, José; Martinez, Carlos Augusto Real
2007-12-01

Resumo em português O estresse oxidativo ao DNA de células da mucosa cólica decorrente de radicais livres de oxigênio presentes na luz intestinal, induz mutações de genes relacionados ao controle do ciclo celular, representando um dos fenômenos iniciais da carcinogênese colorretal. A quantificação do dano oxidativo ao DNA em portadores de câncer colorretal foi pouco estudada até o momento. OBJETIVO: O objetivo do presente estudo foi mensurar os níveis de dano oxidativo ao DNA de (mais) células isoladas da mucosa cólica de doentes com câncer colorretal comparando o tecido normal e o neoplásico e correlacionando-os a variáveis anatomopatológicas. MÉTODO: Estudou-se 32 enfermos (19 mulheres) com média de idade de 60,6 ± 15,5 anos, portadores de adenocarcinoma colorretal operados consecutivamente, entre 2005 e 2006. A avaliação do dano oxidativo ao DNA foi realizada pela da versão alcalina do ensaio cometa (eletroforese e gel de célula única), a partir de fragmentos de tecido cólico normal e neoplásico obtidos imediatamente após a extirpação do espécime cirúrgico. Avaliou-se a extensão das rupturas das hélices do DNA com método de intensificação de imagem, em 200 células escolhidas aleatoriamente (100 de cada amostra de tecido) com o programa Komet 5.5. A mensuração da cauda obtida de cada célula (Tail Moment) representava, quantitativamente, a extensão do dano oxidativo ao DNA. A análise estatística das variáveis consideradas foi realizada pelos testes t de Student, qui-quadrado e Kruskal-Wallis, adotando-se nível de significância de 5% (p Resumo em inglês Oxidative stress on mucosal cells of the colon, resulting from the action of free radicals present in the intestinal lumen, represents one of the initial phenomena in colorectal carcinogenesis, because it may induce gene mutations relating to cell cycle control. Quantification of the oxidative damage to the DNA in colorectal cancer patients has been little studied so far. OBJECTIVE: To measure the levels of oxidative damage to the DNA in cells isolated from the colon muco (mais) sa in colorectal patients, and to compare normal and neoplastic tissues and make correlations with anatomopathological variables. METHOD: Thirty colorectal adenocarcinoma patients (eighteen women) of mean age 60.6 ± 15.5 years who consecutively underwent operations performed by the same surgical team between 2005 and 2006 were studied. The oxidative damage to the DNA was evaluated by means of the alkaline version of the comet assay (single-cell gel electrophoresis), from fragments of normal and neoplastic colon tissue that were obtained immediately after removal of the surgical specimen. The extent of breakages of the DNA helices was assessed using an image intensification method, on 200 randomly chosen cells (100 from each tissue sample), by means of the Komet 5.5 program. The Tail Moment (T.M) measured in each cell quantitatively represented the extent of the oxidative damage to the DNA. The statistical analysis on the variables considered was performed by means of the Student t, chi-squared and Kruskal-Wallis tests, with a significance level of 5% (p

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

24

Fototerapia causa danos ao DNA de leucócitos mononucleares periféricos em recém-nascidos a termo/ Phototherapy causes DNA damage in peripheral mononuclear leukocytes in term infants

Aycicek, Ali; Kocyigit, Abdurrahim; Erel, Ozcan; Senturk, Hakan
2008-04-01

Resumo em português OBJETIVO: Determinar se a fita de DNA de leucócitos mononucleares endógenos é alvo de fototerapia. MÉTODOS: O estudo incluiu 65 recém-nascidos a termo com idades entre 3 e 10 dias que haviam sido expostos a fototerapia intensiva (n = 23) ou convencional (n = 23) por pelo menos 48 horas devido à icterícia neonatal, além de um grupo controle (n = 19). Dano ao DNA foi avaliado por eletroforese alcalina em gel de célula única (ensaio cometa). A capacidade antioxidan (mais) te total plasmática e os níveis de estado oxidativo total também foram medidos, e a correlação entre danos ao DNA e estresse oxidativo foi investigada. RESULTADOS: Os valores médios de escores de danos ao DNA nos grupos de fototerapia intensiva e convencional foram significativamente maiores do que os do grupo controle (p 0,05). Não houve correlações significativas entre escores de danos ao DNA e bilirrubina, estado oxidante total e níveis de estresse oxidativo entre os grupos de fototerapia (p > 0,05). CONCLUSÕES: Tanto a fototerapia intensiva quanto a convencional causam danos ao DNA dos leucócitos mononucleares endógenos em recém-nascidos a termo com icterícia. Resumo em inglês OBJECTIVE: Our aim was to determine whether endogenous mononuclear leukocyte DNA strand is a target of phototherapy. METHODS: The study included 65 term infants aged between 3-10 days that had been exposed to intensive (n = 23) or conventional (n = 23) phototherapy for at least 48 hours due to neonatal jaundice, and a control group (n = 19). DNA damage was assayed by single-cell alkaline gel electrophoresis (comet assay). Plasma total antioxidant capacity and total oxidan (mais) t status levels were also measured, and correlation between DNA damage and oxidative stress was investigated. RESULTS: Mean values of DNA damage scores in both the intensive and conventional phototherapy groups were significantly higher than those in the control group (p 0.05). There were no significant correlations between DNA damage scores and bilirubin, total oxidant status and oxidative stress levels in either phototherapy group (p > 0.05). CONCLUSIONS: Both conventional phototherapy and intensive phototherapy cause endogenous mononuclear leukocyte DNA damage in jaundiced term infants.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

25

Efeitos da origem e da linhagem do DNA mitocondrial sobre características produtivas e reprodutivas de bovinos leiteiros da raça Gir/ Effects of origin and lineage of mitochondrial DNA on productive and reproductive traits of Gir dairy cattle

Ribeiro, S.H.A.; Pereira, J.C.C.; Verneque, R.S.; Silva, M.A.; Bergmann, J.A.G.; Ledic, I.L.; Morais, O.R.
2009-02-01

Resumo em português Avaliou-se a influência do DNA mitocondrial sobre características de produção e reprodução em rebanho Gir. Foram analisados, segundo a origem mitocondrial (indicus ou taurus) e linhagem citoplasmática (fêmeas fundadoras), 3385 registros de produção total de leite (PT), produção de leite até os 305 dias de lactação (P305) e de período de lactação (PL); 2394 registros de intervalo de parto (IP) e de produção de leite por dia de intervalo de partos (PIP) (mais) e 618 registros de idade ao primeiro parto (IPP). A origem mitocondrial foi incluída no modelo como efeito fixo para a idade ao primeiro parto, por ter, em análise prévia, demonstrado ser significativa somente para essa característica. A estimação dos componentes de variância e parâmetros genéticos bem como a predição dos valores genéticos foram realizadas a partir de dois modelos animais; com e sem a inclusão da variável aleatória, linhagem citoplasmática, com o programa MTDFREML, pelo método da máxima verossimilhança restrita com algoritmo livre de derivadas. A linhagem citoplasmática explicou 1,6%; 1,5%; 1,2%, 0%, 0% e 0%, da variância fenotípica das características PT, P305, PL, IP, PIP e IPP, não obstante não se mostrou significativa no teste de razão de máxima verossimilhança. As correlações de postos entre os valores genéticos obtidos a partir dos modelos com e sem a inclusão da linhagem citoplasmática foram próximas à unidade para todas as características. O modelo que não incluiu a linhagem citoplasmática viesou apenas as tendências genéticas das características PT, P305 e PL. A origem mitocondrial, indicus ou taurus, somente foi significativa (P Resumo em inglês This study was carried out to evaluate the mitochondrial DNA effect on production and reproduction traits of Gir breed. A total of 3,385 records of milk production (MP), 305-day milk production (305-MP), and lactation length (LL); and 2,394 records of calving interval (CI), milk production per day of calving interval (MPPDCI), and age at first calving (AFC) were analyzed according to mitochondrial DNA origin (indicus or taurus) and cytoplasmatic lineages (foundation cows) (mais) . The mitochondrial DNA origin was considered as fixed effect for age at first calving analysis. Genetic parameter estimates and predicted breeding values were obtained by restricted maximum likelihood derivative free algorithm using two different animal models (including or not cytoplasmatic lineage effect). Maximum likelihood ratio test showed a non significant effect of cytoplasmatic lineages on all analyzed traits. Cytoplasmatic lineages accounted not significantly for 1.6%, 1.5%, 1.2%, 0%, and 0% of the total phenotypic variance of MP, 305-MP, LL, MPPDCI and AFC. Ranks correlation among breeding values from both models were close to one for all analyzed traits. No mitochondrial lineage model biased upward only estimates of genetic trends of MP, 305-MP, and LL traits. Mitochondrial origin (taurus or indicus) significantly accounted (P

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

26

As deficiências auditivas relacionadas às alterações do DNA mitocondrial./ Hearing loss related to mitochondrial DNA changes

Carvalho, Maria F. P. de; Ribeiro, Fernando A. Quintanilha
2002-03-01

Resumo em português A deficiência auditiva é sintoma comum que pode apresentar várias etiologias, entre elas as causadas por alterações genéticas. As mutações genéticas podem ocorrer em genes nucleares e mitocondriais. A mitocôndria, uma organela intracelular, tem o seu próprio genoma (DNA), que é uma molécula circular e é transmitido exclusivamente pela mãe. As mutações do DNA mitocondrial são transmitidas pela linhagem materna, mas podem ocorrer mutações espontâneas. O (mais) fenótipo, ou expressão clínica, da mutação mitocondrial vai depender da quantidade de DNA mitocondrial mutante existente na célula, situação conhecida como heteroplasmia. A mitocôndria tem a função de disponibilizar energia para as células sob a forma de ATP (trifosfato de adenosina). Os órgãos que requerem grande quantidade de energia são mais comumente acometidos em casos de mutações do DNA mitocondrial, como células nervosas, musculares, endócrinas, ópticas e auditivas. Como a cóclea é grande consumidora de energia, uma mutação no DNA mitocondrial de células ciliadas causa deficiência auditiva do tipo neurossensorial, bilateral, simétrica e progressiva. As deficiências auditivas causadas por mutações no DNA mitocondrial correspondem a 0,5% a 1% de todas as deficiências auditivas de origem genética. Foi realizada uma extensa revisão bibliográfica, a fim de estudar as deficiências auditivas causadas por alterações no DNA mitocondrial. A deficiência auditiva pode se apresentar na forma isolada (forma não sindrômica), como nos casos de hiper-sensibilidade aos antibióticos aminoglicosídeos e presbiacusia, ou associada a outras doenças (forma sindrômica), como na síndrome de Kearns-Sayre e diabete e surdez de herança materna. Resumo em inglês Hearing loss is a common symptom that may be manifested by many etiologies and it is frequently associated to genetic problems. Genetic mutations may occur in nuclear or mitochondrial genes. Mitochondria are intracellular organelles that have their own genome (DNA); mitochondrial DNA is from exclusive maternal inheritance. Although mitochondrial DNA mutations derive from maternal inheritance, spontaneous mutations may also occur. The phenotype is the clinical expression o (mais) f a mitochondrial mutation and depends on the amount of mutant mitochondrial DNA contained in the cell. This phenomenon is known as heteroplasmy. The mitochondria provide energy to the cells by releasing ATP; thus, the greater the amount of energy required by the cell, the more likely it is to be affected by mitochondrial DNA mutations. Examples of high metabolism cells are nervous system cells, muscle cells, endocrine cells, optical and auditory cells. The cochlea has great energy turnover and mitochondrial DNA mutations of the hair cells will cause sensorineural hearing loss, which is normally bilateral, symmetrical and progressive. Hearing loss secondary to mitochondrial DNA mutations comprises 0.5 to 1% of all genetic hearing losses. Based on the literature review, it may be observed that hearing loss secondary to mitochondrial DNA mutations manifest in two distinct forms: isolated hearing loss (nonsyndromic), as in aminoglycoside hypersensitivity and presbyacusis, or associated to other diseases in a syndrome, such as Kearns-Sayre syndrome and maternally inherited diabetes and deafness.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

27

Síndrome psicótica evoluindo com demência como manifestação clinica de deleção do DNA mitocondrial/ Psycothic syndrome developing into dementia as a clinical manifestation of mitochondrial DNA deletion

Vasconcellos, Luiz Felipe Rocha; Leite, Ana Claudia Celestino; Cavalcanti, José Luis Sá; Moreira, Denise Madeira; Feijó, Denise; Souza, Carolina Fischinger Moura de
2007-03-01

Resumo em português As manifestações das doenças mitocondriais são variadas, acometendo, mais freqüentemente, órgãos com alto metabolismo aeróbico em que são mais abundantes, como, por exemplo, o sistema nervoso. O início dos sintomas em geral é observado na infância havendo relatos de início na idade adulta. Apresentamos caso atípico de doença mitocondrial associada à deleção do DNA mitocondrial em um homem de 39 anos com sintomas psiquiátricos configuraram quadro clínic (mais) o inicial e somente 12 anos após o início dos sintomas surgiram alterações neurológicas. O diagnóstico da doença mitocondrial foi confirmado por biópsia de músculo sendo documentada deleção do DNA mitocondrial. Resumo em inglês The manifestations of mitochondrial disease are variable, affecting more frequently the organs with high aerobic metabolism in which they are more abundant, for example the nervous system. The beginning of symptoms in general is observed at chilhood, but some patients presented on adult age. We present an atypical case associated with mitochondrial DNA deletion. A 39-years-old man with psychiatric symptoms that configured initial clinical picture and only after 12 years o (mais) f the beginning of symptoms neurological alterations became noticeable. The diagnosis of mitochondrial illness was confirmed by muscle biopsy being documented mitochondrial DNA deletion.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

28

Uso do Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) no estudo populacional do Triatoma brasiliensis Neiva, 1911/ Use of Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) in the populational study of Triatoma brasiliensis Neiva, 1911

Borges, Érika C.; Romanha, Alvaro J.; Diotaiuti, Liléia
2000-01-01

Resumo em português Para o estudo de variabilidade genética em Triatoma brasiliensis, o principal vetor da doença de Chagas no Nordeste brasileiro, espécimes de três diferentes populações intradomiciliares foram analisados. Regiões do DNA genômico foram amplificadas utilizando dois iniciadores randômicos através da técnica de RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA), visualizados em géis de poliacrilamida corados pela prata. Os perfis originados se mostraram bastante homogêneos q (mais) uando comparados intrapopulacionalmente. Populações capturadas em duas regiões diferentes do Estado do Ceará também apresentaram homogeneidade entre si, mas, quando comparadas com a população proveniente do Piauí, foi possível diferenciá-las. Esses resultados, preliminares, indicam que o RAPD pode ser usado com sucesso nos estudos de variabilidade em triatomíneos, bem como sugerem a existência de variabilidade entre diferentes populações de T. brasiliensis pertencentes a uma mesma subespécie. Resumo em inglês We evaluated the genetic variability of Triatoma brasiliensis, the main vector of Chagas disease in Northeast Brazil, using specimens from three populations. Regions of genomic DNA were amplified by RAPD (Random Amplified Polimorphic DNA), using two primers. The products were visualized after polyacrylamide gel electrophoresis followed by silver staining. A dendrogram constructed through the Dice similarity coefficient allowed for separation of the tested specimens into t (mais) hree distinct groups. The populations captured in areas from Ceará State showed similar profiles, but different from that captured in Piauí State. Our results indicate that RAPD can be used successfully in triatomine studies and suggest the presence of genetic variability between different populations of T. brasiliensis.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

29

Uso do Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) no estudo populacional do Triatoma brasiliensis Neiva, 1911/ Use of Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) in the populational study of Triatoma brasiliensis Neiva, 1911

Borges, Érika C.; Romanha, Alvaro J.; Diotaiuti, Liléia
2000-01-01

Resumo em português Para o estudo de variabilidade genética em Triatoma brasiliensis, o principal vetor da doença de Chagas no Nordeste brasileiro, espécimes de três diferentes populações intradomiciliares foram analisados. Regiões do DNA genômico foram amplificadas utilizando dois iniciadores randômicos através da técnica de RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA), visualizados em géis de poliacrilamida corados pela prata. Os perfis originados se mostraram bastante homogêneos q (mais) uando comparados intrapopulacionalmente. Populações capturadas em duas regiões diferentes do Estado do Ceará também apresentaram homogeneidade entre si, mas, quando comparadas com a população proveniente do Piauí, foi possível diferenciá-las. Esses resultados, preliminares, indicam que o RAPD pode ser usado com sucesso nos estudos de variabilidade em triatomíneos, bem como sugerem a existência de variabilidade entre diferentes populações de T. brasiliensis pertencentes a uma mesma subespécie. Resumo em inglês We evaluated the genetic variability of Triatoma brasiliensis, the main vector of Chagas disease in Northeast Brazil, using specimens from three populations. Regions of genomic DNA were amplified by RAPD (Random Amplified Polimorphic DNA), using two primers. The products were visualized after polyacrylamide gel electrophoresis followed by silver staining. A dendrogram constructed through the Dice similarity coefficient allowed for separation of the tested specimens into t (mais) hree distinct groups. The populations captured in areas from Ceará State showed similar profiles, but different from that captured in Piauí State. Our results indicate that RAPD can be used successfully in triatomine studies and suggest the presence of genetic variability between different populations of T. brasiliensis.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

30

Comparação entre métodos de estocagem de DNA extraído de amostras de sangue, sêmen e pêlos e entre técnicas de extração/ Comparison between storage methods of DNA extracted from blood, semen and hair and between the techniques of extraction

Coelho, E.G.A.; Oliveira, D.A.A.; Teixeira, C.S; Sampaio, I.B.M.; Rodrigues, S.G.; Alves, C.
2004-02-01

Resumo em inglês DNA samples of six bovines obtained from three tissues (blood, semen and hair) were extracted using two different techniques. After the extraction procedures the samples were divided in six fractions. Three were stored at -20° C and three at 4° C. Every three months one sample of each tissue/extraction procedure was analyzed in spectrophotometer, to determine the quantity of the DNA and the extract was amplified using the primer RM 29. No differences in the DNA quantity (mais) or in the level of protein contamination among the three periods of analyses were observed. All the DNA extracted by quick extraction technique showed good amplification patterns during the nine months, meaning that this technique can be used in laboratory routine instead of the permanent extraction technique. The extract obtained from blood, using the permanent extraction technique, showed the higher quantity of DNA with the smaller index of protein contamination. The high quantity of protein contamination found in the semen samples preserved in egg yolk demanded modifications in both extraction techniques. After that the results were positive, showing good amplification patterns.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

31

Produção de micélio de Crinipellis perniciosa em quatro meios de cultura, visando extração de DNA/ Mycelial production of Crinipellis perniciosa on four culture media for DNA extraction

Faleiro, Fábio G.; Niella, Givaldo R.; Cerqueira, Ana Rosa R.N.; Damaceno, Virgínia O.; Gomes, Luana M.C.; Faleiro, Alessandra S.G.
2004-06-01

Resumo em português A produção de massa micelial é o primeiro passo para obter amostras de DNA de qualidade e quantidade suficiente para análises moleculares. Neste trabalho, objetivou-se analisar a quantidade e a qualidade do DNA de Crinipellis perniciosa extraído a partir de massa micelial obtida em quatro meios de cultura. Foi avaliado o peso de micélio liofilizado produzido nos seguintes meios de cultura: 1. extrato de levedura (2,5%); 2. extrato de malte (2,5%); 3. BD (batata 20% (mais) e dextrose 2%) e 4. extrato de malte + BD (50% de cada meio). O crescimento micelial foi iniciado a partir de um disco de micélio colocado no centro de placas de Petri de 90 mm contendo o meio testado e mantidas a 25 ºC e fotoperíodo de 12 h, por dez dias. Foi utilizado o DIC com dez repetições. O micélio produzido foi liofilizado e o DNA extraído utilizando-se o método do SDS com a desproteinização feita com ou sem fenol. A pureza do DNA baseada na relação A260/A280 e a integridade em gel de agarose 0,8% foram analisadas. A quantidade de micélio produzida nos meios de cultura 1 e 4 foi maior do que nos meios 2 e 3. O DNA extraído a partir de micélio produzido nos meios 2 e 3 apresentou maior integridade, obtendo-se produtos de amplificação mais nítidos. A desproteinização com fenol possibilitou a extração de DNA mais puro. Porém, DNA de ótima qualidade e em quantidade suficiente pode ser extraído a partir de micélio produzido em meios baratos como o BD, sem a necessidade da desproteinização com fenol. Resumo em inglês Mycelial production is the first step in getting good quality and quantity of DNA samples for molecular analysis. The objective of this work was to analyse the quantity and quality of DNA extracted from Crinipellis perniciosa mycelial mass obtained on four culture media. The lyophilized mycelial mass weight was evaluated in the following culture media: 1. yeast extract (2.5%); 2. Malt extract (2.5%); 3. PD (potato 20% and dextrose 2%) and 4. malt extract + PD (50% of each (mais) culture media 2 and 3). Mycelial growth was produced by depositing of a mycelial disk in the center of 90 mm Petri dishes containing each culture medium. The dishes were kept in a BOD incubator at 25 ºC under a photoperiod of 12 h, for ten days. The experiment was organized in complete random design with ten repetitions. The DNA was extracted from 250mg of lyophilizated mycelial mass using the SDS method with desproteinization carried out either with or without phenol. The DNA purity based on the absorbance A260/A280 and the DNA integrity in agarose gel 0,8% were analyzed. The quantity of mycelial mass-produced on culture media 1 and 4 was larger than on culture media 2 and 3. The DNA extracted from the mycelial mass produced in culture media 2 and 3 demonstrated greater integrity, yielding good amplification products. The DNA purity was higher after desproteinization with phenol. However, good quality and abundant DNA could be extracted from the mycelial mass produced in PD, even without desproteinization with phenol.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

32

Padronização de condições para detecção de DNA de Leishmania spp. em flebotomíneos (Diptera, Psychodidae) pela reação em cadeia da polimerase/ Standardization of conditions for PCR detection of Leishmania spp. DNA in sand flies (Diptera, Psychodidae)

Paiva, Byanca Regina de; Secundino, Nagilá Francinete Costa; Pimenta, Paulo Fillemon Paulocci; Galati, Eunice Aparecida Biacnhi; Andrade Junior, Heitor Franco; Malafronte, Rosely dos Santos
2007-01-01

Resumo em português A correta identificação dos agentes etiológicos em insetos vetores é de crucial importância aos estudos epidemiológicos. A pesquisa de flagelado nesses vetores, pela dissecção de seu trato digestivo, observação microscópica do seu conteúdo ou por isolamento dos parasitas provenientes de insetos em meios de cultura, tem-se mostrado operacionalmente inadequada e com baixa especificidade do diagnóstico, pois fêmeas de flebotomíneos também podem albergar outro (mais) s flagelados como Trypanosoma e Endotrypanum. Acreditamos que por sua eficiência e especificidade, a amplificação de seqüências-alvo do DNA da Leishmania, por meio da reação em cadeia de polimerase, pode ser aplicada na investigação de sua presença em flebotomíneos, desde que estes estejam devidamente acondicionados e o DNA do parasita extraído a partir de metodologia adequada. Este trabalho descreve metodologias utilizadas na padronização da conservação dos espécimes de flebotomíneos e extração do DNA da Leishmania como uma alternativa mais prática que os métodos tradicionais. Resumo em inglês The correct identification of etiological agents in vector insects is crucial for epidemiological studies. Identification of flagellates in such vectors, usually by dissection of the digestive tract and microscopic observation of the contents as well as attempts at parasite isolation from insects in culture media, have proven operationally inadequate and with poor diagnostic specificity, since female sand flies are also hosts for other flagellates like Trypanosoma and End (mais) otrypanum. Due to the efficiency and specificity of DNA target sequence amplification by polymerase chain reaction (PCR), the latter could be used to investigate the presence of Leishmania in sand flies, although the insects need to be properly stored and the Leishmania DNA extracted using appropriate methodology. This paper describes methodologies to standardize sand fly storage and Leishmania DNA extraction in such specimens as a more practical method in field studies.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

33

Padronização de condições para detecção de DNA de Leishmania spp. em flebotomíneos (Diptera, Psychodidae) pela reação em cadeia da polimerase/ Standardization of conditions for PCR detection of Leishmania spp. DNA in sand flies (Diptera, Psychodidae)

Paiva, Byanca Regina de; Secundino, Nagilá Francinete Costa; Pimenta, Paulo Fillemon Paulocci; Galati, Eunice Aparecida Biacnhi; Andrade Junior, Heitor Franco; Malafronte, Rosely dos Santos
2007-01-01

Resumo em português A correta identificação dos agentes etiológicos em insetos vetores é de crucial importância aos estudos epidemiológicos. A pesquisa de flagelado nesses vetores, pela dissecção de seu trato digestivo, observação microscópica do seu conteúdo ou por isolamento dos parasitas provenientes de insetos em meios de cultura, tem-se mostrado operacionalmente inadequada e com baixa especificidade do diagnóstico, pois fêmeas de flebotomíneos também podem albergar outro (mais) s flagelados como Trypanosoma e Endotrypanum. Acreditamos que por sua eficiência e especificidade, a amplificação de seqüências-alvo do DNA da Leishmania, por meio da reação em cadeia de polimerase, pode ser aplicada na investigação de sua presença em flebotomíneos, desde que estes estejam devidamente acondicionados e o DNA do parasita extraído a partir de metodologia adequada. Este trabalho descreve metodologias utilizadas na padronização da conservação dos espécimes de flebotomíneos e extração do DNA da Leishmania como uma alternativa mais prática que os métodos tradicionais. Resumo em inglês The correct identification of etiological agents in vector insects is crucial for epidemiological studies. Identification of flagellates in such vectors, usually by dissection of the digestive tract and microscopic observation of the contents as well as attempts at parasite isolation from insects in culture media, have proven operationally inadequate and with poor diagnostic specificity, since female sand flies are also hosts for other flagellates like Trypanosoma and End (mais) otrypanum. Due to the efficiency and specificity of DNA target sequence amplification by polymerase chain reaction (PCR), the latter could be used to investigate the presence of Leishmania in sand flies, although the insects need to be properly stored and the Leishmania DNA extracted using appropriate methodology. This paper describes methodologies to standardize sand fly storage and Leishmania DNA extraction in such specimens as a more practical method in field studies.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

34

Eletrodos modificados com DNA: uma nova alternativa em eletroanálise/ DNA-modified electrodes: a new alternative for electroanalysis

La-Scalea, Mauro A.; Serrano, Silvia H. P.; Gutz, Ivano G. R.
1999-06-01

Resumo em inglês The first studies about DNA electrochemistry appeared at the end of the fifties. The voltammetric techniques became important tool for the DNA conformational analysis, producing evidences about DNA double helix polimorphism. The new techniques based on electrodes modification with nucleic acid enlarged the use of the electrochemical methods on the DNA research. DNA electrochemical biosensors are able to detect specific sequences of DNA bases, becoming important alternativ (mais) e for the diagnosis of disease, as well as in the carcinogenic species determination. Besides, the use of DNA biosensors in the mechanism study of biological drug actions can be useful for drug design.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

35

Padronização da técnica de extração de DNA de células de mucosa oral com NaCl: aplicação no estudo do gene PROP1/ Standardization of DNA extraction with NaCl from oral mucosa cells: application in PROP1 gene study

Abrão, Milena Garcia; Billerbeck, Ana Elisa C.; Nishi, Mirian Yumie; Marui, Suemi; Mendonça, Berenice B. de
2005-12-01

Resumo em português A extração de DNA de leucócitos periféricos é o meio de obtenção de DNA mais amplamente utilizado. Entretanto, a coleta de células a partir de swab oral, geralmente utilizada em medicina forense, é útil para obtenção de amostras de DNA de recém-nascidos, crianças e de pacientes que vivem em locais onde a coleta e o envio da amostra de sangue não é factível. Nosso objetivo foi padronizar a técnica de extração de DNA a partir de swab de células de mucos (mais) a oral utilizando NaCl, comparando-a com a extração pelo kit comercial. Para testar a qualidade do DNA, amplificamos os 3 éxons do gene PROP1 de 12 pacientes com hipopituitarismo hipofisário em DNA extraído simultaneamente de células da mucosa oral e de sangue periférico. A amplificação de fragmentos maiores foi testada em DNA de mucosa oral de indivíduos normais utilizando-se primers do éxon 10 do gene do FSHR (1000pb) e do gene CYP21A2 (1200pb). Ambos os métodos resultaram em DNA de boa qualidade, permitindo o estudo molecular. O método por NaCl mostrou-se mais rápido e barato, resultando em maior quantidade de DNA quando comparado ao kit comercial. Nos pacientes com hipopituitarismo, identificamos a mutação delAG301-302 em 6 pacientes, 4 em homozigose (33%) e 2 em heterozigose (16%), e a mutação G51A em heterozigose em uma paciente. Em conclusão, padronizamos a técnica de extração de DNA de células de swab oral com NaCl que, quando comparada à extração com kit comercial, apresentou menor custo e maior rapidez, indicando ser esta uma forma confiável de obtenção de DNA para estudos genéticos. Resumo em inglês DNA extraction of peripheral leukocytes is the most broadly used technique to obtain DNA. However, cell collection from an oral swab, frequently used in forensics, is useful to obtain DNA samples, mainly in newborns, children and patients who live far from the collection sites, where blood sample collection and sending is not feasible. Our objective was to standardize DNA extraction from an oral swab, using the NaCl method, comparing it with a commercial kit. To test DNA (mais) quality, we amplified the 3 exons of PROP1 gene of 12 patients with hypopituitarism in DNA obtained from oral cells and peripheral blood cells. Amplification of larger fragments was tested in oral DNA of normal subjects using primers of exon 10 of FSHR gene (1000bp) and of CYP21A2 gene (1200bp). Both methods yielded good quality DNA, allowing the amplification of 3 exons of PROP1 gene. The NaCl method showed to be faster and less expensive, resulting in a larger amount of DNA when compared to the commercial kit. We identified the delAG301-302 mutation in 6 patients, 4 in homozygous (33%) and 2 in heterozygous (16%) state and G51A mutation in heterozygous state in a single patient. In conclusion, we standardized the DNA extraction of oral cells with NaCl, which presented lower costs and faster results, when compared with the extraction by a commercial kit indicating that DNA from oral swabs are a reliable source for genetic studies.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

37

Análise das impressões digitais de DNA e de fatores de virulência de linhagens de Helicobacter pylori/ Analysis of molecular fingerprint and virulence factors of Helicobacter pylori strains

Godoy, Anita P. O.; Miranda, Maíra C. B.; Paulino, Luciana C.; Mendonça, Sergio; Ribeiro, Marcelo Lima; Pedrazzoli Jr., José
2007-06-01

Resumo em português RACIONAL: Helicobacter pylori é hoje aceito como o principal agente etiológico de gastrite em seres humanos e fator de risco para úlcera péptica e câncer gástrico. A evolução da infecção está relacionada a diversos fatores, inclusive bacterianos, como presença do gene cagA e o genótipo vacA s1m1, associados ao desenvolvimento de úlcera e adenocarcinoma gástrico. A técnica de RAPD ("random amplified polimorphic") tem sido amplamente utilizada para obtençã (mais) o de impressões digitais de DNA para examinar a similaridade entre linhagens. OBJETIVOS: Avaliar a presença de cagA e alelos do vacA em amostras de H. pylori e associar os achados com a doença apresentada e também investigar possível clonicidade entre os fatores de virulência e as doenças com a impressão digital de DNA gerada pelo RAPD-PCR. MÉTODOS: Foram incluídas 112 amostras provenientes de pacientes com diferentes laudos endoscópicos: gastrite (n = 41), esofagite de refluxo (n = 14), úlcera gástrica (n = 19) e úlcera duodenal (n = 38). A análise dos fatores de virulência da bactéria foi feita por PCR e as impressões digitais de DNA foram estabelecidas pelo método de RAPD-PCR. RESULTADOS: Os resultados obtidos indicam que houve uma associação significativa entre úlcera duodenal e o mosaico vacA s1m1. Analisando-se os padrões de bandas geradas pelo RAPD-PCR, sete diferentes dendogramas foram construídos e não foi possível detectar associação significativa entre os agrupamentos, sugerindo que as amostras não possuem perfil clonal. CONCLUSÃO: Os resultados reforçam a importância do gene vacA como um marcador de virulência do H. pylori. O RAPD da impressão digital de DNA realizado foi incapaz de associar o padrão de bandas com as enfermidades e os genótipos de vacA e cagA. Resumo em inglês BACKGROUND: Helicobacter pylori is now accepted as the most important agent of gastritis in humans, as well as a risk factor for peptic ulcer disease and gastric carcinoma. The outcome of the infection is related to several factors, among them bacterial ones such as cagA and vacA s1m1 genotype. Random amplified polymorphic DNA (RAPD)-PCR, has been used to generate DNA fingerprints to evaluate similarity among strains within a bacterial species. AIM: To assess the associat (mais) ion between RAPD fingerprinting, virulence factors and the disease. METHODS: H. pylori was isolated from 112 patients (41 with gastritis; 19 with gastric ulcers; 38 with duodenal ulcer disease; and 14 with gastroesophageal reflux disease). Allelic variants of cagA and vacA were identified using the polymerase chain reaction (PCR) and the fingerprints were generated by RAPD-PCR. RESULTS: There was a strong association between the genotype vacA s1m1 and duodenal ulcers. Although RADP-PCR is a very useful tool in genotyping H. pylori, no significant correlation between the diseases studied and DNA fingerprint was detected neither with fingerprint and different vacA and, cagA genotypes. CONCLUSIONS: The extension of our analysis to patients with well-characterized gastric diseases may provide significant information on the relationship between vacA genotypes and clinical outcomes of H. pylori infection.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

38

Avaliação de dois métodos de extração de DNA de material parafinado para amplificação em PCR/ Evaluation of two methods of DNA extraction from paraffin-embedded material for PCR amplification

Simonato, Luciana Estevam; Garcia, José Fernando; Nunes, Cáris Maroni; Miyahara, Glauco Issamu
2007-04-01

Resumo em português INTRODUÇÃO: Diversos métodos para extração de DNA a partir de tecidos biológicos inclusos em parafina encontram-se descritos na literatura, sendo o sucesso desse procedimento de grande importância para a realização de métodos moleculares de diagnóstico empregando a reação em cadeia da polimerase (PCR). OBJETIVO: Este estudo avaliou dois métodos de extração de DNA de material parafinado, visando à amplificação do DNA genômico pela técnica da PCR. MATER (mais) IAL E MÉTODO: Foram utilizadas 35 amostras de casos de carcinoma epidermóide de assoalho bucal diagnosticados e tratados no Centro de Oncologia Bucal da Universidade Estadual Paulista (Unesp). Os métodos de extração de DNA avaliados incluíram: 1. digestão com proteinase K seguida por purificação com Chelex 100® (BioRad); e 2. sistema QIAamp DNA minikit® (Qiagen). O DNA obtido foi quantificado por espectrofotometria e amplificado pela técnica da PCR, utilizando-se oligonucleotídeos iniciadores para betaglobina. RESULTADOS: A concentração de DNA obtido do material extraído com o primeiro método apresentou média de 120,62 ng/µl com razão entre as leituras das absorbâncias 260/280 variando de 0,8 a 1,41. Para as amostras extraídas com o segundo procedimento, o rendimento médio foi de 67,38 ng/µl, no entanto a razão 260/280 variou entre 1,11 e 2,53. O material foi submetido à PCR e, das 35 amostras extraídas com cada método, respectivamente, 29 e 30 apresentaram sinal positivo. CONCLUSÃO: Os dois métodos utilizados para obtenção de DNA de material parafinado apresentaram desempenho semelhante, revelando que ambos têm potencial para auxiliar na prática da biologia molecular diagnóstica, assim como no estudo diagnóstico retrospectivo em material parafinizado. Resumo em inglês BACKGROUND: There are several methods for DNA extraction from formalin-fixed paraffin-embedded tissues reported in the literature. High success rate on this procedure is important for the use of molecular diagnostic methods based on the polymerase chain reaction (PCR). OBJECTIVE: Two methods of DNA extraction from paraffin-embedded samples were tested aiming at PCR amplification of genomic DNA. MATERIAL AND METHOD: Thirty-five samples were obtained from patients with squa (mais) mous cell carcinoma of mouth floor treated at the Oral Oncology Center in Universidade Estadual Paulista. The DNA extraction methods included: 1. proteinase K digestion followed by Chelex 100® (BioRad) purification and 2. QIAamp DNA minikit® system (Qiagen). Purified DNA was quantified by spectrophometry and a beta-globin gene fragment was amplified using PCR. RESULTS: The DNA concentration from samples applied to the first method presented an average of 120.62 ng/µl and absorbance ratio 260/280 varying between 0.8 and 1.41. From the samples extracted using the second procedure, the mean DNA concentration was 67.38 ng/µl, with absorbance ratio varying between 1.11 and 2.53. DNA samples were submitted to PCR and from 35 samples extracted with both methods, respectively, 29 and 30 were successfully amplified for the beta-globin gene. CONCLUSION: Both methods used to obtain genomic DNA from formalin-fixed paraffin-embedded tissues presented similar performance, revealing their potential to be included in diagnosis of molecular biology, as well as in retrospective studies using archived paraffin-embedded samples.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

39

Avaliação de métodos de preservação de amostras de plantas de savanas neotropicais para a obtenção de DNA de alta qualidade para estudos moleculares/ Evaluation of methods of Neotropical Savanna plant samples preservation for yielding high quality DNA for molecular studies

Feres, Fabíola; Souza, Anete P. de; Amaral, Maria do Carmo E. do; Bittrich, Volker
2005-06-01

Resumo em português Foram comparadas metodologias para preservação de amostras de folhas de plantas de savanas neotropicais, visando a posterior obtenção de DNA de alta qualidade para estudos moleculares. Foram também testadas diferentes metodologias para extração de DNA das amostras investigadas. A qualidade do DNA extraído foi avaliada através de dois métodos: por digestão, utilizando-se três enzimas de restrição e através da amplificação do gene mitocondrial cox3 (subunid (mais) ade III da citocromo oxidase) por PCR. Os resultados revelaram que, para as plantas de savanas investigadas, a metodologia de preservação de amostras mais comumente empregada pelos botânicos (desidratação rápida usando sílica-gel) não é a mais eficiente. Os resultados obtidos demonstram a importância de testar diferentes métodos de preservação de amostras vegetais para estudos moleculares, para garantir a obtenção de DNA de alta qualidade. Para as plantas de savanas neotropicais, o método de preservação em sílica gel pode ser menos eficiente do que outros métodos igualmente simples de preservação de amostras. Resumo em inglês Methods for the preservation of leaf sample from plants occurring in neotropical savannas were compared, with the aim to get high quality DNA for molecular studies. Different methods for DNA isolation of the same samples were also compared. The DNA quality was evaluated by two empirical methods: digestion of the DNA with three restriction enzymes and by amplification of the mitochondrial cox3 gene by PCR. The results show that, for the savanna plants investigated, the mos (mais) t commonly employed method for plant sample preservation (quick dehydratation using silica gel) is not the most efficient. Our results demonstrate the importance of testing different methods of plant tissue preservation for molecular studies to guarantee high quality DNA. For plants from neotropical savannas, the silica gel method might be often less efficient than other equally simple methods of sample preservation.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

40

Comparison of chickpea rhizobia isolates from diverse Portuguese natural populations based on symbiotic effectiveness and DNA fingerprint

Laranjo, Marta; Branco, Cristina; Rebeca, Soares; Alho, Luís; Carvalho, Mário; Oliveira, Solange

Abstract: Aims: To test the hypothesis that differences in chickpea yields obtained in four distinct Portuguese regions (Beja, Elvas-Casas Velhas , Elvas-Estacao Nacional de Melhoramento de Plantas (ENMP) and Evora) could be due to variation between the natural rhizobia populations.Methods and Resu...

DRIVER (Portuguese)

41

Comparação de três protocolos de extração de DNA a partir de tecido fixado em formol e incluído em parafina/ Comparison of three DNA extraction protocols from formaldehyde-fixed and paraffin-embedded tissues

Fernandes, José Veríssimo; Meissner, Rosely de Vasconcellos; Fernandes, Thales Allyrio Araújo de Medeiros; Rocha, Luiz Reginaldo Menezes da; Cabral, Maulori Curie; Villa, Luisa Lina
2004-06-01

Resumo em português OBJETIVO: Padronizar um método alternativo para extração de DNA a partir de tecido fixado em formol e conservado em arquivos de blocos de parafina, visando à realização de estudos retrospectivos. MÉTODOS: Comparou-se a eficiência de protocolos de extração de DNA a partir de tecido parafinado, para análise por reação em cadeia de polimerase (PCR), tomando-se como parâmetro um protocolo baseado em um kit comercial. Foram feitas extrações do DNA de 60 espéci (mais) mes por três métodos: o protocolo A, baseado no kit GlassMAX; o B, utilizando-se o kit GFX TM; e o C, tendo como base o método de Banerjee et al.(2). A integridade e a suficiência do DNA presente na amostra foram avaliadas pela amplificação por PCR de um segmento de 110pb do gene da beta-globina humana, com visualização por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida, corado pela prata. Resultados: Das 60 amostras analisadas, 45 apresentaram resultado positivo na PCR quando o DNA foi extraído por qualquer um dos três protocolos. Em seis amostras, a amplificação foi positiva apenas para o DNA extraído pelos protocolos A e C. Em três amostras, o resultado foi positivo apenas para o DNA extraído pelo protocolo A, e em duas, apenas para o DNA extraído pelo protocolo C. CONCLUSÕES: O protocolo C apresentou desempenho semelhante ao do protocolo A, com as vantagens de apresentar menor custo, dispensar o uso de kit comercial, além de não utilizar solventes orgânicos, revelando-se uma alternativa viável para a obtenção de DNA a partir de tecido fixado em formol e incluído em parafina. Resumo em inglês OBJECTIVE: To set up a method for DNA extraction from paraffin embedded cervical cancer specimens, previously formalin-fixed, aiming to accomplish retrospective analysis. METHODS: Sixty specimens were submitted to DNA extraction by three different methods. All of them involved digestion of the tissues by proteinase K, followed by DNA purification, based in three different approaches: protocol A used a DNA isolation kit, GlassMax (Gibco/BRL); protocol B was performed with (mais) the kit GFX TM Amersham Pharmacia Biotech; and protocol C was based on the method proposed by Banerjee et al.(2), with modifications. To evaluate the integrity and sufficiency of the DNA, the samples were submitted to a in vitro amplification of a segment of the human beta-globin gene, and the PCR products were analyzed by electrophoresis on 7% polyacrylamide gels, followed by silver staining. Results: Among 60 analyzed samples, 45 showed positive results when submitted to the three protocols. In six samples, PCR fragments were obtained with DNAs extracted through protocols A e C; in three samples, DNA extraction was achieved with protocol A only; and in two samples the DNA was successfully extracted only through protocol C. CONCLUSIONS: Protocols A and C generated similar results. Although protocol C is more labor-intensive and time consuming, it does not require a commercial kit and therefore has a lower cost. Furthermore, it does not require the use of organic solvents and may be considered a good alternative for DNA extraction from paraffin embedded tissues.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

42

Comparação entre dois métodos de detecção de DNA de papilomavírus humano em carcinoma epidermoide de lábio/ Comparison between two methods for human papilomavírus DNA detection in lip squamous cell carcinoma

Demathe, Adriana; Bernabé, Daniel Galera; Garcia, José Fernando; Nunes, Caris Maroni; Miyahara, Glauco Issamu
2010-04-01

Resumo em português Introdução: Recentemente o papilomavírus humano (HPV) tem sido associado à carcinogênese oral. A metodologia empregada na detecção do vírus é uma das maiores causas observadas da grande variabilidade nas taxas de detecção do HPV. Objetivo: Este estudo comparou a sensibilidade de detecção do DNA do HPV em casos de carcinoma epidermoide de lábio utilizando a amplificação do DNA viral por reação em cadeia da polimerase (PCR) ou nPCR. Material e método: For (mais) am utilizadas 33 amostras provenientes de casos de carcinoma epidermoide de lábio. Para as extrações do DNA utilizou-se o sistema QIAamp DNA Mini Kit. Como controle interno utilizou-se o gene da b-globina. Das 33 amostras iniciais, 30 foram positivas para o gene b-globina, sendo utilizadas para detectar o DNA viral. Comparou-se a amplificação do DNA viral pelos métodos da PCR com os oligonucleotídeos MY09/MY11 e nPCR, empregando-se os pares de oligonucleotídeos iniciadores MY09/MY11 e, na segunda etapa, o par GP5+/GP6+. O controle positivo para a presença do DNA do HPV utilizado foi a linhagem de células HeLa e, como controle negativo, a mistura de amplificação sem DNA. A análise dos produtos de PCR e nPCR para HPV foi realizada por eletroforese em gel de poliacrilamida a 8%. Resultados: Utilizando-se o método da PCR, a amplificação do DNA do HPV foi constatada em dois casos. Com a nPCR foi verificada presença de DNA viral em 13 das 30 amostras. Conclusão: Com a utilização da nPCR, a detecção do HPV nos casos estudados aumentou mais de seis vezes. Resumo em inglês Introduction: Human papillomavirus (HPV) has been currently associated with oral carcinogesis. The methodology applied in virus detection is one of the main reasons for the great variability observed in HPV detection. Objectives: This study compared HPV DNA detection efficiency in lip squamous cell carcinoma samples (SCC) using viral DNA amplification by PCR or nPCR. Methods: Thirty three samples of lip squamous cell carcinoma were selected. DNA extractions were performed (mais) with QIAamp DNA minikit. The internal control was b-globin gene. Thirty out of 33 initial samples were positive for b-globin gene, which were employed to detect viral DNA. The amplification of viral DNA was compared by PCR method through MY09/MY11 oligonucleotides and nPCR through MY09/MY11 oligonucleotides in the first stage and GP5+/GP6+ in the second stage. HeLa cells were used as positive control for HPV DNA presence and the amplification mixture without DNA as negative control. The analysis of PCR and nPCR products for HPV DNA was performed through gel electrophoresis in polyacrylamide at 8%. Results: HPV DNA amplification was verified in two cases by the use of PCR method. HPV DNA presence was verified in 13 out of 30 samples by the use of nPCR. Conclusion: HPV DNA detection of lip SCC increased sixfold in the studied cases with the employment of nPCR.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

43

Purification of plasmid DNA vectors by aqueous two-phase extraction and hydrophobic interaction chromatography

Trindade, Inês P.; Diogo, Maria M.; Prazeres, Duarte M. F.; Marcos, João Carlos

The current study explores the possibility of using a polyethyleneglycol(PEG)/ammonium sulphate aqueous two-phase system (ATPS) as an early step in a process for the purification of a model 6.1 kbp plasmid DNA (pDNA) vector. Neutralised alkaline lysates were fed directly to ATPS. Conditions were sel...

DRIVER (Portuguese)

44

Derivado cinamoílico com atividade no reparo de DNA e outras substâncias de Cinnamomum australe (Lauraceae)/ DNA-damaging activity of a cinnamate derivative and further compounds from Cinnamomum australe (Lauraceae)

Carbonezi, Carlos Alberto; Lopes, Márcia Nasser; Silva, Dulce Helena Siqueira; Araújo, Ângela Regina; Bolzani, Vanderlan da Silva; Young, Maria Claudia Marx; Silva, Marcelo Rogério da
2004-04-01

Resumo em inglês The bioactive compound trans-3'-methylsulphonylallyl trans-cinnamate (1) along with the inactives iryelliptin (2) and (7R,8S,1'S)-delta8'-3',5'-dimethoxy-1',4'-dihydro-4'-oxo-7.0.2',8.1'-neolignan (3) were isolated from the leaves of Cinnamomum australe. The structures of these compounds were assigned by analysis of 1D and 2D NMR data and comparison with data registered in the literature for these compounds. The DNA-damaging activity of 1 is being described for the first time.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

46

Mitochondrial and nuclear DNA phylogeography of Crassostrea angulata, the Portuguese oyster endangered in Europe

Huvet Arnaud; Lapegue Sylvie; Magoulas A; Boudry Pierre

The respective status of the Portuguese oyster, Crassostrea angulata, and the Pacific oyster, Crassostrea gigas, has long been a matter of controversy. Morphological and physiological similarities, homogeneity of allozyme allelic frequencies between populations of the two taxa and the demonstration ...

DRIVER (Portuguese)

47

Políticas de identidade: perfil de DNA e a identidade genético-criminal/ Identity politics: DNA profile and the genetic-criminal identity

Machado, Helena; Silva, Susana; Amorim, António
2010-01-01

Resumo em português O DNA é visto por muitos como a “verdadeira” base da identidade humana, por se tratar de uma estrutura biológica, em princípio, única em cada indivíduo. Esta noção de “unicidade”, pilar fundamental da investigação criminal e da genética forense, tem alimentado políticas de identidade da parte dos Estados modernos pela classificação e armazenamento de informação sobre “criminosos”. Neste artigo analisam-se estratégias médico-legais e burocrático-est (mais) atais de produção da identidade “genético-criminal” relacionadas com a criação, em Portugal, de uma base de dados forense de perfis de DNA. Discutem-se os impactos desta política de identidade na gestão, categorização e vigilância de indivíduos classificados como criminosos. Resumo em inglês DNA is seen by many as the “true” basis of human identity, insofar as it is a biological structure that is, in principle, unique in each individual. This notion of “uniqueness”, a fundamental pillar of criminal investigation and forensic genetics, has fostered identity politics by modern states through the classification and storage of information about “criminals”. This article explores the alignment of science and state bureaucracy for producing the “genetic-crim (mais) inal” identity in the context of the Portuguese forensic DNA database for forensic purposes. We discuss the impacts of this sort of identity politics for the management, categorization, and surveillance of individuals classified as criminals.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

48

Formação de adutos exocíclicos com bases de DNA: implicações em mutagênese e carcinogênese/ Exocyclic DNA adducts: implications in mutagenesis and carcinogenesis

Loureiro, Ana Paula M.; Di Mascio, Paolo; Medeiros, Marisa H. G.
2002-09-01

Resumo em inglês A number of ring-extended DNA adducts resulting from reaction of alpha,beta-unsaturated aldehydes, or their epoxides, with DNA bases have been characterized in recent years. These adducts can lead to miscoding during DNA replication which, if not repaired, result in mutations that can contribute to cancer development. Recently, the use of ultrasensitive methods allowed the detection of background levels of etheno DNA adducts in tissues of untreated animals and humans sugg (mais) esting the existence of endogenous sources of reactive intermediates. In this review, we briefly summarize the recent advances in the chemistry of these DNA lesions.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

49

Efeito da adição de trolox e pentoxifilina na motilidade, integridade do acrossoma e do DNA de espermatozoides equinos após descongelação/ Effect of trolox and pentoxifylline on motility and integrity of, acrossome and DNA of equine spermatozoa after thawing

Silva, K.M.G.; Moraes, T.A.P.; Silva, E.C.B.; Gamboa, S.C.; Guerra, M.M.P.
2009-02-01

Resumo em português Três garanhões foram utilizados para estudar o efeito da adição de trolox e pentoxifilina na motilidade, integridade do acrossoma e DNA de espermatozoides pós-descongelação. Para congelação, utilizou-se Tris-gema com glicerol (5%) em máquina de congelação de sêmen. As amostras foram descongeladas a 37ºC durante 30 segundos e tratadas com: T1= 150µL de sêmen + 150µL de Tris; T2= 150µL de sêmen + 150µL de Tris + 120µM/mL de trolox; T3= 150µL de sêmen (mais) + 150µL de Tris + 3,5mM de pentoxifilina e T4= 150µL de sêmen + 150µL de Tris + 3,5mM de pentoxifilina + 120µM/mL de trolox. Após 0, 60 e 120 minutos de incubação (37ºC), as amostras foram analisadas quanto à motilidade, vigor, integridade de acrossoma e DNA. Não houve diferença (P>0,05) entre tratamentos após 0 e 60 minutos de incubação em todos os parâmetros estudados. Após 120 minutos de incubação, verificou-se maior porcentual (P Resumo em inglês Three stallions were used to study the effect of trolox and pentoxifylline addition on the motility and integrity of acrossome and DNA equine spermatozoa after thawing. Tris-egg-yolg diluent with glycerol (5%) were used to freeze the semen samples in a freezing machine. The samples were thawed at 37ºC during 30 seconds and treated with: T1=150µL of semen + 150µL of Tris; T2= 150µL of semen + 150µL of Tris +150mM/mL of trolox; T3= 150µL of semen + 150µL Tris +3.5mM (mais) of pentoxifylline; and T4= 150µL of semen + 150µL of Tris + 3.5mM of pentoxifylline + 150mM of trolox. After 0, 60, and 120 minutes of incubation (37ºC), the samples were analyzed to motility, vigor, and integrity of acrossome and DNA. There was no difference (P>0.05) among treatments considering 0 and 60 minutes of incubation in all studied parameters. After 120 minutes of incubation, it was observed higher percentage (P

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

50

Determinação da quantidade de DNA nuclear em plantas/ Nuclear DNA content determination in plants

Schifino-Wittmann, Maria Teresa
2001-10-01

Resumo em português O valor C de DNA é um caráter de significado biológico fundamental e o conhecimento da quantidade de DNA nuclear de um grupo de organismos pode ser útil em vários campos da ciência. Do ponto de vista prático, a determinação da quantidade de DNA nuclear, que é mais comumente realizada por microdensitometria de Feulgen e citometria de fluxo, pode substituir a contagem de cromossomos, especialmente quando se trabalha com um número muito grande de indivíduos. A mi (mais) crodensitometria por Feulgen baseia-se na ligação específica do DNA a esse corante, havendo uma proporcionalidade entre a quantidade de DNA existente e a quantidade de corante que o núcleo incorporou. A citometria de fluxo envolve a análise das propriedades óticas de partículas em fluxo. Em plantas, basicamente consiste no isolamento dos núcleos, coloração destes com um fluorocromo e leitura da fluorescência emitida. As grandes vantagens desta técnica, em relação à microdensitometria de Feulgen, são a relativa facilidade e a rapidez da preparação das amostras, o grande número de núcleos que podem ser analisados, a necessidade de pequenas quantidades de tecido e a possibilidade de detecção de pequenas diferenças na quantidade de DNA. Relatos de resultados conflitantes entre determinações de diferentes autores mostram a necessidade de uma criteriosa padronização das técnicas, para que problemas metodológicos não venham a ser interpretados como eventuais diferenças reais na quantidade de DNA. Resumo em inglês The DNA C value is an important biological characteristic and the knowledge of DNA content may be applied to several branches of science. Nuclear DNA content determinations, normally performed by Feulgen microdensitometry and flow cytometry, may replace chromosome counts especially when a high number of individuals are being analysed. Feulgen microdensitometry is based on the affinity of this dye and the DNA: the amount of DNA is proportional to the amount of dye taken by (mais) the nucleus. Flow cytometry is based on the optical properties of particles on a flow. In plants the technique basically consists in the isolation of nuclei, staining with a fluorochrome and measurement of the emitted fluorescence. The advantages of this technique, when compared to Feulgen densitometry, are the relative easiness and speed of sample preparation, the possibility to analyse a high number of nuclei, the need of small tissue amounts and the detection of small differences in DNA contents. Conflicting results from different authors show the need of a rigid technical standardization so that methodological errors are not misinterpreted with eventual real differences in DNA contents.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

51

Câncer e agentes antineoplásicos ciclo-celular específicos e ciclo-celular não específicos que interagem com o DNA: uma introdução/ Cancer and cell cicle-specific and cell cicle nonspecific anticancer DNA-interactive agents: an introduction

Almeida, Vera Lúcia de; Leitão, Andrei; Reina, Luisa del Carmen Barrett; Montanari, Carlos Alberto; Donnici, Claudio Luis; Lopes, Míriam Teresa Paz
2005-02-01

Resumo em inglês The chemotherapy agents against cancer may be classified as "cell cycle-specific" or "cell cycle-nonspecific". Nevertheless, several of them have their biological activity related to any kind of action on DNA such as: antimetabolic agents (DNA synthesis inhibition), inherently reactive agents (DNA alkylating electrophilic traps for macromolecular nucleophiles from DNA through inter-strand cross-linking - ISC - alkylation) and intercalating agents (drug-DNA interactions in (mais) herent to the binding made due to the agent penetration in to the minor groove of the double helix). The earliest and perhaps most extensively studied and most heavily employed clinical anticancer agents in use today are the DNA inter-strand cross-linking agents.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

52

Método rápido de extração de DNA de bactérias/ A fast DNA extraction method for bacteria

Rosa, Daniel Dias
2008-09-01

Resumo em português Desenvolveu-se um método rápido para extração de DNA de bactérias, que ao contrário de outros métodos, não requer o uso de enzimas, como lisozima e proteinase K, previamente, utilizado-se o carbonato de silício (carborundum) como agente físico para efetuar a quebrar da parede celular da bactéria. Com este método conseguiu-se extrair DNA bacteriano num menor tempo, além de mais rápido, ele mostrou-se mais simples e econômico, quando comparado aos métodos co (mais) nvencionais. O DNA obtido pode ser utilizado para diversas finalidades relacionadas ao DNA de bactérias, obtendo-se uma quantidade razoável de DNA, que varia de 725 µg/mL a 1170 µg/mL por cada 0,1 g de célula bacteriana, com ótima qualidade. Resumo em inglês A fast extraction method for bacteria DNA was developed. Unlike some other methods, the method does not require enzymes like lysozime and proteinase K. Carbonate silicate (carborundum) was used to break cell more efficiently. This method is fast, simple and more economic when compared to the previously report ones. The prepared DNA from bacteria has good quality and amount.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

53

Conectando famílias de construções genéticas: testes de DNA na reunificação da família somali na Finlândia/ Connecting genes-building families: DNA testing in somali family reunification in Finland

Hautaniemi, Petri
2007-12-01

Resumo em português Os temas centrais desse artigo, reunificação familiar em geral e teste de DNA em particular, surgiram a partir de uma pesquisa em andamento acerca de jovens da Somália na Finlândia. Desde 1996, realizo uma pesquisa etnográfica - em escolas, clubes de jovens, ruas e cafés - com jovens da Somália que chegaram à Finlândia por volta de 1994 e que freqüentam escolas finlandesas nos subúrbios de Helsinki. Meu interesse geral nesta pesquisa longitudinal era conhecer a (mais) s experiências de passagem para a vida adulta em contextos altamente diferenciados, não apenas do ponto de vista do país anfitrião, mas também cultural e transnacionalmente. O tema, testes de DNA, toca na questão central desta pesquisa de modo profundo. Aqui, crescer não é visto como uma simples questão biológica. É um processo social no qual as relações, como laços de parentesco, são constituídas, vivenciadas e contestadas. Essas relações são poderosas para a identificação individual e social. A testagem-DNA pode violar simbólica e fisicamente o processo social de identificações íntimas e de integridade pessoal. Resumo em inglês The central themes of this article, family reunification in general, and DNA testing in particular, came to the fore during a research project about young Somalians in Finland. Since 1996, I have been conducting ethnographic research - in schools, youth clubs, streets and cafés - with youngsters from Somalia who arrived in Finland around 1994, and who attend Finnish schools in the suburbs of Helsinki. My general interest in this longitudinal study was to learn about the (mais) experiences of coming of age in highly dispersed settings, not only in the vein of a local host country, but also culturally and transnationally. Here, growing up is seen not as a simple biological question. It is a social process in which relationships such as kinship ties are constituted, experienced, and contested. These are powerful relations for individual and social identifications. DNA-testing may both symbolically and physically violate this social process of intimate identifications and personal integrity.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

54

Métodos subsidiários para o diagnóstico da Leishmaniose tegumentar americana (LTA): comparação dos resultados do seqüenciamento de DNA e da PCR-RFLP para determinação da espécie de leishmania em amostras cutâneo-mucosas/ Subsidiary methods for the diagnosis of American tegumentar leishmaniasis (ATL): comparison of sequencing of DNA and PCR-RFLP for identification of leishmania species in skin samples

Garcia, Flávio C. Barbosa; Santos, Sandra Silva Rodrigues dos; Chociay, Maria Fernanda; Medeiros, Ângela C. Rapela; Roselino, Ana Maria F.
2005-12-01

Resumo em português FUNDAMENTOS: Métodos moleculares têm-se mostrados mais eficazes para o diagnóstico da LTA. OBJETIVOS: Comparar os resultados da intradermorreação de Montenegro (IRM), presença de leishmania em biópsia (Bc), reação de imunofluorescência indireta (Rifi), seqüenciamento de DNA e PCR-RFLP (-restriction fragment lenght polymorphism) para o diagnóstico da LTA. MÉTODOS: Foram estudados 152 pacientes com LTA. Para a PCR em Bc, utilizaram-se primers específicos para (mais) seqüência de 120bp do kDNA do minicírculo comum a todas as espécies de leishmanias. O produto da PCR, utilizado para seqüenciamento e para restrição enzimática com Hae III, foi comparado às culturas L. (L.) amazonensis e L. (V.) braziliensis. RESULTADOS: Houve predomínio do sexo masculino (75%), da cor branca (80%) e da profissão urbana (48%). A idade variou de três a 77 anos, com 56,5% entre 21 e 50 anos. 65,8% eram do Estado de São Paulo, prevalecendo a forma cutânea (79,6%). A IRM foi positiva em 73,4%, e a Rifi em 59,7%, enquanto a Bc evidenciou presença de leishmania em 30,6%. A PCR foi positiva em 81,6%, e a PCR-RFLP identificou L. (V.) braziliensis como espécie predominante (66%), o que também ocorreu com o seqüenciamento. Comparando PCR-RFLP e seqüenciamento, houve 61% de concordância entre os resultados, mostrando significância da PCR-RFLP para L. (V.) braziliensis. CONCLUSÕES: A IRM e a PCR foram estatisticamente equivalentes como métodos subsidiários para o diagnóstico da LTA, a PCR-RFLP e o seqüenciamento também o foram na identificação das espécies de leishmania, o primeiro apresentando menores custo e tempo de execução comparado ao seqüenciamento de DNA. Resumo em inglês BACKGROUND: ATL is endemic in Brazil, and molecular methods have been shown more effective for its diagnosis. OBJECTIVES: Our purpose was to compare the results of Montenegro’s skin reaction (MR), presence of leishmania in skin biopsy (Bx), indirect immunofluorescence (IIF) for leishmania in sera samples, PCR, sequencing of DNA and PCR-RFLP (polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism) as subsidiary exams for ATL diagnose. METHODS: 152 patients wer (mais) e studied, with accomplishment of MR, Bx, IIF and PCR for leishmania in skin samples. For PCR, a specific pair of primers for a sequence of 120bp from kDNA minicircle, common to all leishmanias species, was used. The product of PCR was used for DNA sequencing and for RFLP with the enzyme Hae III. The analysis of the restriction pattern was compared to the cultures of L. (L.) amazonensis and L. (V.) braziliensis. RESULTS: The predominant sex was male (75%), the white color (80%) and urban professional occupation (48%). The age varied from 3 to 77 years, with prevalence from 21 to 50 years (56.5%). In relation to the origin, 65.8% was from the state of São Paulo, being the cutaneous form the more prevalent (79.6%). MR was positive in 73.4% and there was presence of leishmania in 30.6% of the samples, while IIF presented 59.7% of positivity. PCR was positive in 81.6% of skin samples, and PCR-RFLP identified L. (V.) braziliensis (66%) as predominant species, fact that also happened with DNA sequencing, with 64.4% of the positive results for L. (V.) braziliensis. Comparing PCR-RFLP and DNA sequencing there was 61% of agreement amongst the results, being significant in PCR-RFLP for L. (V.) braziliensis. CONCLUSION: MR and PCR were equivalent as subsidiary methods for the diagnosis of ATL, such as PCR-RFLP and DNA sequencing in the identification of the leishmania species. On the other hand, the method PCR-RFLP presented smaller cost and smaller time of execution compared to the sequencing of DNA.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

55

Avaliação da expressão tecidual do gene de reparo MLH1 e dos níveis de dano oxidativo ao DNA em doentes com câncer colorretal/ Evaluation of expression of mismatch repair gene MLH1 and levels of oxidative DNA damage in normal and neoplastic tissues of patients with colorectal cancer

Martinez, Carlos Augusto Real; Cordeiro, Adriana Teixeira; Priolli, Denise Gonçalves; Miranda, Daniel Duarte da Conceição; Bartchewsky Júnior, Waldemar; Margarido, Nelson Fontana; Ribeiro, Marcelo Lima
2009-09-01

Resumo em português O dano oxidativo ao DNA provocado por radicais livres de oxigênio representa um dos principais mecanismos responsáveis pelas etapas iniciais da carcinogênese colorretal. O estresse oxidativo ocasiona erros de pareamento de bases possibilitando o aparecimento de mutações em genes controladores do ciclo celular. As células possuem um sistema de defesa representado pelos genes de reparo do DNA que corrigindo os erros de pareamento impedem o desenvolvimento de mutaçõe (mais) s. Poucos estudos avaliaram a relação entre dano oxidativo ao DNA e a expressão tecidual do gene de reparo MLH1. OBJETIVO: O objetivo do presente estudo foi avaliar os níveis de estresse oxidativo ao DNA e a expressão tecidual do gene de reparo MLH1 nas células da mucosa cólica normal e neoplásica de doentes com câncer colorretal. MATERIAL E MÉTODO: Foram estudados 44 doentes com diagnóstico de adenocarcinoma colorretal. Foram excluídos os doentes com câncer colorretal hereditário, portadores de câncer relacionado às doenças inflamatórias intestinais e os submetidos à radioquimioterapia neoadjuvante. Para a avaliação dos níveis de dano oxidativo ao DNA utilizou-se a técnica da eletroforese alcalina em gel de célula isolada (ensaio do cometa) avaliando 100 células obtidas dos tecidos normal e neoplásico. Para a avaliação da expressão do gene MLH1 utilizou-se a técnica de reação de polimerase em cadeia em tempo real (RT-PCR) com primer especificamente desenhados para amplificação do gene. A comparação dos resultados encontrados para os níveis de estresse oxidativo ao DNA, e expressão do gene MLH1 nos tecidos normais e neoplásicos foi feito pelo teste t de Student, adotando-se nível de significância de 5% (p Resumo em inglês The oxidative DNA damage caused by oxygen free radicals is one of the most important mechanisms responsible for the initial steps of colorectal carcinogenesis. The oxidative stress can cause errors in the pairing of nitrogenous bases that form the DNA, allowing mutations in controlling genes of the cell cycle. The cells have a defense system represented by the DNA mismatch repair genes that correct the errors of matching prevent the development of DNA mutations. Few studi (mais) es have evaluated the relationship between oxidative DNA damage and the tissue expression of mismatch repair genes. AIM: The aim of the present study was evaluate the levels of oxidative DNA and the tissue expression of MLH1 mismatch repair gene in the cells of normal and neoplastic colonic mucosa of patients with colorectal cancer. MATERIAL AND METHODS: Were studied 44 patients with diagnosis of colorectal adenocarcinoma. Were excluded patients with hereditary colorectal cancer, with colorectal cancer associate with inflammatory bowel diseases and those undergoing neoadjuvant radioquimiotherapy. To evaluate the levels of oxidative DNA damage was used the single cell gel electrophoresis (comet assay) evaluating 100 cells obtained from normal and neoplastic tissues. For the evaluation of the tissue expression of MLH1 gene was employed the technique of polymerase chain reaction in real time (RT-PCR) with primer specifically designed for MLH1 gene. The comparison among the levels of DNA oxidative stress and expression of MLH1 mismatch repair gene in normal and neoplastic tissues was done by Student t test adopting a significance level of 5% (p

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

56

Diversidade genética e diferenciação das raças portuguesas de ovinos com base em marcadores de DNA-microssatélites: uma perspectiva de conservação

Almeida, Paulo António Russo

Tese de Doutoramento em Ciência Animal Nas últimas décadas tem crescido a consciencialização de quanto é urgente tomar medidas que visem travar o crescente desaparecimento de raças de animais domésticos, de forma a evitar a erosão dos recursos genéticos disponíveis e com ela a redução de opções futur...

DRIVER (Portuguese)

57

Mutação mitocondrial C1494T, deficiência auditiva e uso de antibióticos aminoglicosídeos/ C1494T mitochondrial dna mutation, hearing loss, and aminoglycosides antibiotics

Postal, Mariana; Palodeto, Bruna; Sartorato, Edi Lúcia; Oliveira, Camila Andréa de
2009-12-01

Resumo em português Tendo em vista a complexidade do mecanismo da audição, não é difícil compreender que a deficiência auditiva possa resultar de ampla variedade de anomalias geneticamente determinadas, bem como de diversos fatores ambientais. Mutações específicas no gene 12S rRNA em DNA mitocondrial são responsáveis por perda da audição não-sindrômica de herança materna, e pelo aumento da susceptibilidade ototóxica dos antibióticos aminoglicosídeos. OBJETIVO: Neste trabal (mais) ho, nós avaliamos a presença da mutação C1494T entre os indivíduos ouvintes e com deficiência auditiva que utilizaram aminoglicosídeos e os que não tiveram contato com o antibiótico. MATERIAL E MÉTODO: Foram estudados 20 pacientes com deficiência auditiva neurossensorial não-sindrômica sem histórico de sensibilização aos aminoglicosídeos e 40 recém-nascidos, prematuros e de alto-risco que utilizaram a droga ototóxica, dos quais 20 eram ouvintes e 20 com perda auditiva. As amostras foram analisadas por PCR-RFLP com a enzima de restrição Hph I. FORMA DE ESTUDO: Experimental. RESULTADOS: A mutação mitocondrial C1494T no gene 12S rRNA não foi detectada em nenhuma das amostras analisadas. CONCLUSÃO: Nossos dados sugerem que a deficiência auditiva dos indivíduos analisados não está relacionada com a ototoxicidade da mutação C1494T, demonstrando que esta mutação não é frequente em nossa população. Resumo em inglês In view of the complex mechanism of hearing, it is not difficult to understand that hearing impairment may result from a wide variety of genetically determined anomalies and various environmental factors. Specific mutations in the mitochondrial DNA 12S rRNA gene are responsible for maternally inherited non-syndromic hearing loss, and for increased susceptibility to the ototoxicity of aminoglycoside antibiotics. AIM: To asses the presence of C1494T mutation among individua (mais) ls with normal hearing and hearing impairment who used aminoglycosides and those who had not had contact with the antibiotic. MATERIAL AND METHOD: The study was composed of 20 patients with nonsyndromic sensorineural hearing loss without prior use of aminoglycosides and 40 premature and high-risk newborns who used ototoxic drugs, of whom 20 had good hearing and 20 had hearing loss. The samples were analyzed by PCR-RFLP with the restriction enzyme Hph I. STUDY DESIGN: Experimental. RESULTS: The mitochondrial 12S rRNA C1494T mutation was not detected in any of the samples analyzed. CONCLUSION: Our data suggest that the hearing loss of the individuals we analyzed was not related to the ototoxicity of mutation C1494T, showing that this mutation is not frequent in our population.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

58

Estresse oxidativo, lesões no genoma e processos de sinalização no controle do ciclo celular/ Oxidative stress, genome lesions and signaling pathways in cell cycle control

Berra, Carolina M.; Menck, Carlos F. M.; Di Mascio, Paolo
2006-12-01

Resumo em inglês The generation of reactive oxygen species (ROS) may be both beneficial to cells, performing functions in intracellular signaling and detrimental, modifying cellular biomolecules. ROS can cause DNA damage, such as base damage and strand breaks. Organisms respond to chromosome insults by activation of a complex and hierarchical DNA-damage response pathway. The extent of DNA damages determines cell fate: cell cycle arrest and DNA repair or cell death. The ATM is a central pr (mais) otein in the response to DNA double-strand breaks by acting as a transducer protein. Collected evidences suggest that ATM is also involved in the response to oxidative DNA damage.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

59

Validação de métodos laboratoriais aplicadas a análises com marcadores microssatélites/ Validation of laboratory methods applied to microsatellite markers

Oliveira, Tiago Silva; Hoffmann, Lucia Vieira; Alves, Poliana Ferreira; Lucena, Valeska Silva; Silva Filho, João Luís da
2010-06-01

Resumo em português A troca de informação sobre biodiversidade e a utilização de recursos genéticos podem ser melhor realizadas se os laboratórios que geram as informações puderem demonstrar que seus resultados são confiáveis através de metodologias adequadas de validação. Para definir critérios que sirvam para demonstrar a confiabilidade de resultados em laboratórios onde são realizadas pesquisas com marcadores de DNA, foram analisados erros associados à quantificação de (mais) DNA em gel de agarose e à repetitividade e robustez da reação da polimerase em cadeia (PCR) utilizando primers baseados em marcadores microssatélites (SSR). O erro associado à quantificação de DNA foi menor quando 100 ng foram quantificadas, e aumentou para quantidades de DNA maiores, com a tendência de subestimar sua quantidade. O limite de quantificação, entendido como as menores diferenças de quantidade de DNA que o método detecta, variou expressivamente com pequena variação da quantidade de DNA. A incerteza associada ao PCR foi estimada por sua repetitividade, que mostrou-se sensível à quantidade de DNA da reação. A baixa robustez da PCR quanto à quantidade de DNA demonstra a necessidade prioritária de avaliação deste parâmetro. As considerações feitas podem ser auxiliares para que laboratórios de marcadores moleculares utilizem procedimentos de validação. Resumo em inglês Biodiversity information exchange and the use of genetic resources can be improved if the laboratories are able to assure their results thought suitable methodologies of validation. Aiming to define criteria which demonstrate the reliability of results in laboratories which work with DNA markers, errors associated to the DNA quantification in agarose gel, PCR repeatability and robustness using microsatellite (SSR) markers were analyzed. The error associated to DNA quantif (mais) ication was smaller when 100 ng of DNA were quantified, and increased for greater amounts of DNA, tending to sub estimations. Quantification limits, or the smallest quantity detected by the method used, varied markedly with small variations on the DNA amounts. Uncertainty associated to microsatellite PCR reaction was measured by its repeatability, which was affected by the quantities of DNA in the reaction. The low robustness of the microsatellite PCR reaction due to sensibility to quantities of DNA showed the priority on evaluating this parameter. The presented methodologies may be useful to laboratories working with molecular markers implementing validation procedures.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

60

História natural da hepatite crônica B/ Natural history of chronic hepatitis B

Fonseca, José Carlos Ferraz da
2007-12-01

Resumo em português Estima-se que existam 350 milhões de portadores crônicos do VHB distribuídos ao redor do mundo. Três fases de infecção crônica pelo VHB são reconhecidas: fase de imunotolerância (HBsAg e HBeAg positivos, altos títulos de HBV-DNA, ALT normal e não evidência de doença hepática ativa); fase imunoativa ou de hepatite crônica B (HBsAg e HBeAg positivos, altos títulos de HBV-DNA, ALT elevada e evidência de doença hepática ativa); fase de portador inativo do V (mais) HB ou assintomático (HBsAg no soro sem o HBeAg , títulos do HBV-DNA Resumo em inglês An estimated 350 million people worldwide are chronically infected with hepatitis B virus (HBV). Three phases of chronic hepatitis B virus infection is are recognized: the immune tolerant phase (HBeAg-positive, high levels of serum HBV-DNA, normal ALT, and no evidence of active liver diseases), the immune clearance phase or chronic hepatitis phase (HBeAg-positive, high levels of serum HBV-DNA, elevated ALT, and active liver disease ), and the inactive carrier state or asy (mais) mptomatic phase (HBsAg-positive in serum without HBeAg, HBV-DNA levels than

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

61

As controvérsias a respeito da participação de Rosalind Franklin na construção do modelo da dupla hélice

Silva, Marcos Rodrigues da
2010-03-01

Resumo em português Em The double helix, James Watson narra sua versão da construção do modelo da dupla hélice do DNA, na qual indica que Rosalind Franklin, física especialista em cristalografia de raios X, desenvolveu trabalhos empíricos fundamentais para a construção do modelo de Watson e Crick. O relato de Watson dá origem a um problema historiográfico: por que Franklin, que dispunha dos dados empíricos produzidos por ela mesma, não decifrou a estrutura molecular do DNA? O pr� (mais) �prio Watson fornece uma resposta, ao sugerir que Franklin não teria nenhuma inclinação teórica para a representação helicoidal do DNA, fazendo trabalho estritamente experimental. Essa sugestão tem recebido réplicas de historiadores, de modo que o problema historiográfico subentendido no relato de Watson se manteve até hoje. No entanto, é possível obter pistas de que, antes de estar envolvida com a construção de uma estrutura para o DNA, Franklin estava preocupada em mapear todos os aspectos da molécula. Este artigo tem dois objetivos: mostrar que a linha de defesa de Franklin adotada por alguns de seus defensores muitas vezes acaba, na verdade, por comprometê-la e apresentar um esboço de interpretação alternativa que, ao não atribuir a Franklin o objetivo principal de construção da estrutura molecular para o DNA, acaba por dar-lhe um papel muito mais confortável do ponto de vista histórico (o que não significará negar que ela tivesse o objetivo secundário de alcançar uma estrutura para o DNA). Resumo em inglês In The double helix, James Watson narrated his version of the building of the DNA double-helix model, in which he indicates that Rosalind Franklin, a physicist specialized in X-Ray crystallography, developed empirical fundamental works to Watson and Crick's model construction. Watson's report gave rise to a historiographical problem: why Franklin, who disposes of the empirical data produced by herself, did not decipher the DNA molecular structure? Watson himself provides (mais) an answer, suggesting that Franklin had no theoretical inclination for a helicoidal representation of DNA, making strictly experimental work. This suggestion has received replies by historians, so that the historiographical problem subjacent to Watson's report maintains its actuality. Nevertheless, it is possible to obtain clues that, rather getting involved in the building of a new structure for DNA, Franklin was concerned with mapping all the aspects of the molecule. This article has two aims: showing that Franklin's line of defense adopted by some of her defenders in fact occasionally end up compromising Franklin, and presenting an outline of an alternative interpretation which, not attributing to Franklin the main goal of building a molecular structure for DNA, ends up giving her a much more comfortable role according to the historical point of view (which does not mean denying that she had the secondary goal of reaching a structure for DNA).

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

62

Novos polimorfismos no gene da obesidade em raças divergentes de suínos/ Polymorphisms in the leptin gene in divergent swine breeds

Soares, M.A.M.; Guimarães, S.E.F.; Euclydes, R.F.; Lopes, P.S.; Peixoto, J.O.; Guimarães, M.F.M.; Wenceslau, A.A.; Pires, A.V.; Benevenuto Júnior, A.A.
2006-06-01

Resumo em português Investigou-se a existência de polimorfismo no gene da leptina (gene da obesidade) entre varrões da raça nativa Piau (porco tipo banha) e matrizes mestiças de raças comerciais (Landrace/Large White e Landrace/Large White com Pietrain), selecionadas para peso e precocidade. Oito pares de primers foram desenhados a partir da seqüência disponível no GenBank (U66254), usada, neste trabalho, como seqüência de referência. Amostras de DNA foram extraídas de células s (mais) angüíneas brancas utilizando-se solução de fenol:clorofórmio, após tratamento com proteinase K. Os fragmentos gerados por amplificação da reação em cadeia da polimerase foram purificados e seqüenciados em seqüenciador automático. As seqüências de nucleotídeos, obtidas a partir do DNA das raças comerciais de suíno, apresentaram maior similaridade com a seqüência de referência, e as seqüências geradas a partir do DNA dos animais nativos divergiram de ambas em algumas posições. Dos 28 polimorfismos encontrados, oito foram observados em apenas uma das três seqüências geradas a partir do DNA das raças nativas. Doze estavam presentes em duas seqüências, e os oito polimorfismos restantes foram encontrados nos três animais nativos. Resumo em inglês Leptin gene (obese gene) polymorphism was investigated in Piau boars (a fat, native breed) and sows from commercial strains (Landrace/Large White and Landrace/Large White by Pietrain) chosen for rapid growth and early sexual maturity. Eight pairs of primers designed using the sequence available from GenBank (access nº U66254) were identified as the reference sequence in this project. DNA samples were extracted from white blood cells using phenol:chloroform solution, afte (mais) r treatment with proteinase K. Fragments generated by amplification of the Polymerase Chain Reaction were purified and sequenced in an automatic sequencer. Nucleotide sequences obtained from DNA of commercial swine breeds were similar to the reference sequence; whereas sequences generated from native breed DNA diverged from the reference sequence and from domestic breed DNA. Of the 28 polymorphisms found, eight were observed in only one of the three sequences generated from DNA of native breeds. Twelve polymorphisms were present in two sequences and the eight remaining polymorphisms were found in all three categories of DNA.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

63

Detecção e genotipagem de papilomavírus humano em lesões de queratoacantoma solitário de pacientes imunocompetentes/ Detection and genotyping of human papillomavirus in solitary keratoacanthoma lesions of immunocompetent patients

Vela, Rodrigo Alessandro R.; Polettini, Jossimara; Marques, Mariângela Esther A.; Stolf, Hamilton Ometto; Candeias, João Manuel Grisi; Silva, Márcia Guimarães da; Costa, Ana Laura Bastos da; Matsuo, Cristiane Yuri; Miot, Hélio Amante
2007-02-01

Resumo em português FUNDAMENTOS: O queratoacantoma é neoplasia cutânea benigna que incide preferencialmente em indivíduos de pele clara, faixa etária elevada, acometendo áreas fotoexpostas. Além da exposição à radiação ultravioleta, sua etiologia é relacionada a diversos carcinógenos, entre eles a infecção pelo papilomavírus humano (HPV). OBJETIVOS: Avaliar a prevalência do DNA do HPV, bem como seus genótipos, em lesões de queratoacantoma solitário de pacientes imunocompe (mais) tentes. MÉTODOS: Foram estudados queratoacantomas de pacientes sem evidências de imunocomprometimento, excisados entre 1996 e 2000 em hospital universitário. Realizaram-se cortes histológicos, desparafinização e extração de DNA desses fragmentos. Os espécimes positivos para DNA de HPV foram submetidos ao seqüenciamento gênico, para determinação do genótipo. RESULTADOS: Foram estudados 58 pacientes com idade média de 64,5±13,8 anos. A proporção entre os sexos foi semelhante, e as localizações mais comuns foram os membros superiores (50%) e a face (27,6%). Detectou-se DNA de HPV em 48 (82,7%) fragmentos de queratoacantomas, sendo os genótipos 6, 11 e 16 os prevalentes. CONCLUSÕES: A alta prevalência do achado de DNA de HPV em lesões de queratoacantoma solitário pode sugerir a participação viral em sua oncogênese. Resumo em inglês BACKGROUND - Keratoacanthoma is a benign cutaneous neoplasm that preferentially affects fair skin individuals of older age groups and involves sun-exposed areas. Apart from ultraviolet radiation exposure, its etiology is related to several carcinogens, including human papillomavirus (HPV) infection. OBJECTIVES: To assess the prevalence of HPV DNA and its genotypes in solitary keratoacanthoma lesions of immunocompetent patients. Methods: Keratoacanthoma lesions of patients (mais) with no evidence of immunological involvement, excised from 1996 to 2000, at a university hospital, were assessed. Histological aspects, deparafinization and DNA extraction of these lesions were evaluated. The specimens positive for HPV DNA were submitted to gene sequencing to determine the genotype. RESULTS: Fifty-eight patients were studied, mean age of 64.5±13.8 years. Both sexes were similarly affected, and the most common sites were upper limbs (50%) and face (27.6%). HPV DNA was detected in 48 (82.7%) keratoacanthoma fragments, and the genotypes 6, 11 and 16 were the most prevalent. CONCLUSIONS: The high prevalence of HPV DNA in solitary keratoacanthoma lesions may suggest viral participation in its oncogenesis.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

64

Prevalência do herpes-vírus humano tipo 1 em neoplasias cutâneas epiteliais malignas/ Prevalence of human herpes virus type 1 in epithelial skin cancer

Ypiranga, Sylvia; Moraes, Aparecida Machado de
2009-04-01

Resumo em português FUNDAMENTOS - O DNA viral pode atuar como oncogene, favorecendo o desenvolvimento de neoplasias, como as linfoides e da pele. Entre esses vírus, encontram-se alguns herpes-vírus humanos. OBJETIVO - Identificar a presença de DNA do herpes-vírus humano tipo 1 em neoplasias epiteliais pré-malignas,malignas e pele normal de indivíduos controle, avaliando seu papel na carcinogênese. MÉTODOS - Identificação, por reação em cadeia da polimerase, do DNA viral do tumor (mais) e pele sã de 41 pacientes e comparação com grupo controle, sem neoplasia. Análise estatística: Testes de Fisher e de McNemar. RESULTADOS - O vírus foi identificado em 20 indivíduos sem e em 21 com neoplasia. Destes últimos, 11 o expessaram apenas nas células tumorais. A diferença, entretanto, não foi estatisticamente significante. CONCLUSÕES - Parece não haver relação direta entre o encontro do DNA viral na pele sã e na pele tumoral. Sua presença pode facilitar o desenvolvimento da neoplasia ou apenas coincidir de se localizar onde esta já ocorreu. Resumo em inglês BACKGROUND - Viral DNA may act as an oncogene, especially in skin and lymphoid organs. This group includes some human herpes virus. OBJECTIVE - To identify human herpes virus type 1 DNA in pre-malignant and malignant skin samples of epithelial tumors comparing to normal skin to determine its role in carcinogenesis. METHODS - Forty-one patients with epithelial tumors were submitted to biopsies from tumor and normal skin. The control group comprised 41 biopsies from patient (mais) s with other dermatoses than cancer. After DNA extraction, polymerase chain reaction was performed to identify 199-bp band. The results were statistically evaluated by Fisher and McNemar tests. RESULTS - The virus was identified in 20 subjects without cancer and in 21 with skin cancer. From these, 11 expressed it only in tumor cells. This difference was not significant. CONCLUSION - There seem to be no direct relation between viral findings in normal skin and skin cancer cells. It may act as a promoter or just coexist at the same site where a neoplastic transformation has already occurred.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

65

Determinação da pureza varietal de sementes de soja com o auxílio de marcadores moleculares microssatélites/ Determination of genetic purity of soybean seeds with the aid of microsatellite molecular markers

Schuster, Ivan; Queiroz, Vagner Tebaldi de; Teixeira, Arlindo Inês; Barros, Everaldo Gonçalves de; Moreira, Maurilio Alves
2004-03-01

Resumo em português Fatores ambientais contribuem para a produção de sementes de soja com características diferentes do padrão da variedade e a análise visual para determinação de pureza varietal não é suficiente. Marcadores moleculares de DNA podem auxiliar na identificação da pureza genética de sementes, durante o processo de certificação de sementes, uma vez que não sofrem influências ambientais. O objetivo deste trabalho foi avaliar um método de análise da pureza genét (mais) ica de sementes de soja, utilizando marcadores microssatélites. Amostras de DNA de sementes de soja, consideradas atípicas pelo método visual, foram analisadas com microssatélites e comparadas ao padrão da variedade. As amostras de DNA foram analisadas em bulk, o que permitiu diminuir os custos, com a mesma precisão da análise individual. De onze lotes de sementes avaliados como impuros na análise visual, e portanto, eliminados do processo de certificação, apenas quatro apresentaram número de sementes de outras cultivares acima do limite tolerado. Resumo em inglês Environmental factors contribute for production of soybean seeds with different characteristics from the standard pattern of a determined variety. DNA markers can contribute for the identification of genetic seed purity, once these type of markers are not influenced by the environment. The objective of this work was to evaluated a method for analysis of soybean seed genetic purity by using microsatellites markers. DNA samples from soybean seeds considered atypical by the (mais) visual method were analyzed by microsatellites and compared with the typical variety pattern. DNA samples were analyzed in bulks, reducing costs but keeping the same precision as the one obtained in the individual analysis. From eleven seed lots classified as contaminated by the visual method, and therefore eliminated through certification, only four were shown to present a number of contaminating seeds above the accepted limit trough DNA analysis.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

66

Estudo molecular de Vibrio cholerae não-O1 isolado de zooplâncton da Baía de São Marcos/São Luis - MA, Brasil/ Molecular study of Vibrio cholerae non-O1 isolated from zooplankton of São Marcos Bay/São Luis - MA, Brasil

Gonçalves, Eloisa da Graça do Rosario; Leal, Nilma Cintra; Hofer, Ernesto
2004-08-01

Resumo em português O estudo foi desenvolvido com o objetivo de analisar o perfil plasmidial, pesquisar genes de virulência e identificar os perfis genéticos de 31 cepas de Vibrio cholerae não O1 isoladas de zooplâncton dos estuários dos rios Anil e Bacanga em São Luis MA. O estudo do DNA plasmidial revelou a presença de 2 a 3 plasmídeos em 10 cepas, com pesos moleculares variando de 5,5 a 40 kilobases. A ribotipagem revelou um perfil comum a todas as cepas. A amplificação do DNA g (mais) enômico por PCR não revelou os genes ctxA, ace e zot, mostrando tratar-se de cepas não patogênicas, enquanto a RAPD-PCR identificou múltiplos perfis genéticos, achado compatível com o grande potencial de variabilidade desta espécie. Resumo em inglês The study was developed to analyze the plasmidial DNA, research virulence genes and identify genetic diversity of 31 strains of Vibrio cholerae non-O1 isolated from zooplankton of the Bacanga and Anil rivers in São Luis-MA. The study of plasmidial DNA showed 2 or 3 plasmids from 10 strains between 5.5 and 40 kilobasis. There was only single ribotype pattern. PCR methods did not show the genes ctxA, ace and zot, while RADP-PCR identified genetic diversity in the strains, showing the potential for variability in this species.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

67

Influência do hipotireoidismo induzido por propiltiouracil na mucosa gengival do rato/ Influence of propilthiouracil-induced hypothyroidism on rat gingival mucosa

Douglas, Nicolás; Olmedo, Pedro; Douglas, Carlos Roberto; Monte, Osmar
2006-10-01

Resumo em português O objetivo foi verificar a influência da deficiência dos hormônios tireoideanos induzida por propiltiouracil (PTU) na mucosa gengival do rato, analisando bioquimicamente as proteínas totais, colágeno (hidroxiprolina) e população celular (DNA). Foram utilizados 50 ratos machos da cepa Sprague-Dawley, separados em 2 grupos: propiltiouracil (PTU) (10 mg/d i.p.), e controle (C), durante 10 semanas. As proteínas totais foram determinadas pelo método de Lowry, a hidrox (mais) iprolina pelo método de Newman e DNA pelo método de Burton. Observou-se diminuição das proteínas totais no grupo PTU (PTU= 41,23 ± 24,05; C= 63,36 ± 18,05); não houve diferença na hidroxiprolina e DNA (PTU= 2,18 ± 1,48; C= 2,29 ± 1,51) e (PTU= 0,33 ± 0,19; C= 0,46 ± 0,31). Conclui-se que o tratamento com PTU diminui o conteúdo de proteínas totais na mucosa gengival do rato, provavelmente pela diminuição da síntese protéica, sem alteração do colágeno e da população celular. Resumo em inglês This work aimed at verifying the influence of propilthiouracil (PTU)-induced thyroid hormone deficiency on gingival mucosa of young male rats, measuring total protein concentration, collagen content and DNA concentration as indices of cellular population. Fifty Sprague-Dawley rats were used. The animals were grouped in: PTU-treated (i.p. 10 mg/d) and control rats (C). The experience was maintained for a period of 10 weeks. Total protein content of gingival mucosa tissue w (mais) as determined by the Lowry method; hydroxyprolin rate, as prototype aminoacid of collagen, was determined using the Newman method, and DNA concentration was measured by Burton's methodology. The results showed decreased amounts of PTU-treated rats gingival total protein content (PTU= 41.23 ± 24.05 vs. C= 63.36 ± 18.05); no alterations were seen in hydroxyprolin concentration neither in DNA content of PTU treated rats, respectively (PTU= 2.18 ± 1.48 vs. C= 2.29 ± 1.51) and (PTU= 0.33 ± 0.19 vs. C= 0.46 ± 0.41). Thus, PTU treatment promotes a decrease in total protein content of rat gingival mucosa that may be interpreted as a decrease in protein synthesis induced by the hypothyroid condition, but with no alteration either in collagen or nucleic acid rates.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

68

Good girls get paternity typing, bad girls don’t : an analysis of gendered uses of genetic tests in a judicial context

Machado, Helena

In this seminar I will present some of the main findings that I achieved through a case study of the Portuguese courts’ use of blood tests and DNA profiling to determine the paternity of any child in the course of paternity suits. The main aim is to show how paternity investigation is a mean of co...

DRIVER (Portuguese)

69

Mitochondrial sequence variation suggests an African influence in Portuguese cattle.

Bradley, D G; Cymbron, T; Malheiro, M I; Loftus, R T

A total of 49 samples from indigenous Portuguese cattle breeds were analysed for sequence variation in the hypervariable region of the mitochondrial DNA D-loop. Sequence comparison and phylogenetic analyses revealed that haplotypes fell into two distinct groups. These corresponded with two separate ...

DRIVER (Portuguese)

70

Estrutura e propriedades de elipticinas/ Structure and properties of ellipticines

Cirino, José J. V.; Belletato, Paulo; Dantas, Sócrates de O.; Ribeiro, Lucicleide; Ferreira, Gilson R.; Santos, Hélio F. dos
2005-02-01

Resumo em inglês The ellipticines constitute a broad class of molecules with antitumor activity. In the present work we analyzed the structure and properties of a series of ellipticine derivatives in the gas phase and in solution using quantum mechanical and Monte Carlo methods. The results showed a good correlation between the solvation energies in water obtained with the continuum model and the Monte Carlo simulation. Molecular descriptors were considered in the development of QSAR mode (mais) ls using the DNA association constant (log Kapp) as biological data. The results showed that the DNA binding is dominated by electronic parameters, with small contributions from the molecular volume and area.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

71

Pesquisa do vírus herpes simples na saliva de pacientes com paralisia facial periférica de Bell/ Herpes simplex virus in the saliva of peripheral Bell’s palsy patients

Lazarini, Paulo Roberto; Vianna, Melissa Ferreira; Alcantara, Mônica Porto Alves; Scalia, Rodolfo Alexander; Caiaffa Filho, Hélio Hehl
2006-02-01

Resumo em português Os primeiros herpes-vírus a serem descritos foram os tipos 1 e 2, cuja denominação é herpes simplex 1 e 2 ou HSV-1 e HSV-2. Estes vírus possuem características biológicas particulares, tais como a capacidade de causar diferentes tipos de doenças, assim como estabelecer infecções latentes ou persistentes por toda a vida dos hospedeiros e de serem reativados causando lesões que podem se localizar no sítio da infecção primária inicial ou próxima a ele. Postul (mais) a-se que a reativação deste vírus no gânglio geniculado esteja relacionada com a paralisia de Bell. Nesta situação, os vírus, que estariam latentes neste gânglio, sofreriam reativação e replicação difundindo-se pelo nervo facial e seus ramos, dentre eles o nervo corda do tímpano, que ao estimular a secreção salivar possibilitaria a identificação do DNA viral na saliva dos pacientes. Até recentemente, um grande número de pacientes eram diagnosticados como portadores de uma forma desta paralisia, chamada de idiopática ou de paralisia de Bell. Com o advento da técnica de estudo do DNA viral pelo método da reação da polimerase em cadeia (PCR), diversos autores encontraram DNA do vírus herpes simplex tipo I no líquido cefalorraquidiano, na secreção lacrimal, na saliva e nos gânglios geniculados de pacientes com paralisia de Bell. OBJETIVO: observar a prevalência do vírus herpes simplex tipo I pela técnica de PCR, na saliva de pacientes com PFP de Bell, relacionando-a com a evolução clínica destes casos. METODOLOGIA: Avaliamos 38 pacientes portadores de Paralisia Facial Periférica de Bell, que foram submetidos a anamnese, exame médico geral e otorrinolaringológico e coleta de saliva para detecção do DNA viral pela técnica de PCR. O grupo controle correspondeu a 10 adultos normais. RESULTADOS: Obtivemos positividade para o DNA viral em 11 casos dos 38 avaliados, o que corresponde a 29% da amostra. Este resultado foi estatisticamente significante se comparado ao grupo controle, no qual não foi obtido nenhum caso de positividade. CONCLUSÃO: Concluiu-se que a presença do HSV-1 na saliva de pacientes portadores de PFP de Bell indica que a reativação viral pode ser a etiologia desta doença. A detecção do vírus na saliva destes pacientes não influencia o prognóstico da doença. Resumo em inglês The first herpes virus to be described was types 1 and 2, whose denomination is herpes simplex 1 and 2 or HSV -1 and HSV -2. These viruses have specific biological characteristics, such as the ability to cause different kinds of diseases, as well as to establish host’s latent or persistent lifetime infections and also of being reactivated, causing lesions that can be located at the same site of the initial primary infection or close to it. It is suggested that this virus (mais) reactivation in the geniculate ganglion may be related to Bell’s palsy. In this situation, the viruses that would be latent in this ganglion, would suffer reactivation and replication, then be diffused through the facial nerve and its branches, among them the chorda tympani nerve, which by stimulating salivary secretion would enable the identification of the viral DNA in the patients’ saliva. Until recently, a great number of patients was diagnosed as holders of this kind of paralysis, named idiopathic or Bell’s palsy. With the introduction of the technique studying the viral DNA by Polymerase Chain Reaction (PCR), several authors have found herpes simplex virus type I DNA in the cerebrospinal fluid, in the lachrymal secretion, in the saliva and in the geniculate ganglia of patients with Bell’s palsy. AIM: observe the occurrence of herpes simplex type I virus using PCR technique in the saliva of patients with Bell’s palsy and relating it to the clinical evolution of these cases. METHODOLOGY: We evaluated 38 patients with Bell’s palsy submitted to anamnesis, clinical and ENT examination and saliva sampling for viral DNA detection by PCR technique. The control group was ten normal adults. RESULTS: We found positive viral DNA in 11 cases out of the 38, which corresponded to 29% of the sample. This result was statistically significant if compared to the control group, in which we did not find any positive case. CONCLUSION: The end result was that the presence of HSV -1 in the saliva of patients with Bell’s palsy indicating that the viral reactivation can be the etiology of this disease. The detection of the virus in these patients’ saliva does not influence the disease prognosis.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

72

Repetições CAG: candidatos na gênese das psicoses funcionais

Lima, Ivanor Velloso Meira
1999-10-01

Resumo em português O autor discorre sobre a instabilidade do DNA em regiões de repetições CAG e sua associação com doenças que afetam o SNC e apresentam o fenômeno da antecipação genética. Revisa também os achados de antecipação em famílias com transtorno bipolar e esquizofrenia, assim como as investigações com o método RED (Repeat Expansion Detection) e com o anticorpo 1C2, que apontam para uma participação desse mecanismo mutacional na determinação genética das psicoses funcionais. Resumo em inglês The author comments about the DNA instability associated with CNS's diseases which display genetic anticipation. He reviews the evidence of anticipation in bipolar and schizophrenia families. He also presents the RED (Repeat Expansion Detection) investigations and screenings with the antibody 1C2 which demonstrated the participation of this mutational mechanism on the functional psychosis genesis.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

73

Optimização da detecção do polimorfismo Ala 677 - Val do gene que codifica a metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR)/ Optimization of Methylenetetrahydrofolate Reductase C677T polimorphism detection

Persuhn, Darlene Camati; Soares Melo, Sandra; Maccagnan, Carlos Leonardo; Besen, Pinheiro; Sansão, Fabiano; Mangrich, Iriane Eger
2006-03-01

Resumo em português A mutação (C677T) no gene que codifica a enzima metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR) tem sido associada a hiperhomocisteinemia e possivelmente ao risco elevado para doenças vasculares. O objetivo deste trabalho foi otimizar sua detecção por PCR para faciliar estudos populacionais. Foram testadas metodologias alternativas de purificação do DNA genômico humano e os resultados obtidos permitiram padronizar uma técnica com redução de reagentes para extração (mais) de DNA por precipitação com NaCl. Foram realizados experimentos variando a concentração dos componentes da reação de PCR que permitiram definir que reações contendo metade do volume inicial de deoxinucleotídeos e iniciadores (primers), assim como 0,5U de Taq DNA polimerase produzem essencialmente a mesma quantidade de amplificado que a reação anteriormente utilizada. Testou-se ainda, a redução do volume da reação de PCR com objetivo de utilizar o produto de amplificação diretamente para digestão com a enzima HinfI, evitando assim, etapas de pipetagem que acarretam em risco de contaminação. Obteve-se sucesso com 15 mL de volume final; que permitiu a utilização do sistema de PCR completo para digestão do produto amplificado. A importância deste estudo pode ser justificada pela significância que as doenças vasculares apresentam em termos populacionais e por este polimorfismo estar potencialmente relacionado com o risco de DAC (doença artério-coronariana) precoce. Resumo em inglês A common mutation C677T in methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene, involved in the metabolism of homocysteine, has been suggested to play a role in increasing cardiovascular disease risk. In order to facilitate the obtainment of population data, the objective of this work was improve its PCR detection. Leucocytes DNA purification alternative protocols were tested and a new low cost method of NaCl precipitation was developed. The composition of PCR mixture was al (mais) so tested and it defined that the concentration of deoxynucleotides, primers and Taq DNA polimerase could be reduced in a half. The final volume of PCR mixture was reduced to 15 µL, enabling the utilization of the same tube to amplification and HinfI digestion processes, avoiding extra steps. The significance of cardiovascular disease in populational data and the possibility of involvement of this mutation as risk factor of precocious ACD (arterial cardiovascular disease) justify this work.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

74

Similaridade genética de variedades crioulas de arroz, em função da morfologia, marcadores RAPD e acúmulo de proteína nos grãos/ Genetic similarities of rice landraces according to morphology, RAPD markers and grain protein content

Areias, Rogeria Gregio de Biase Martins; Paiva, Diogo Mendes de; Souza, Sonia Regina; Fernandes, Manlio Silvestre
2006-01-01

Resumo em português Em experimentos em casa de vegetação e câmara de crescimento, estudou-se o possível aparecimento de réplicas em 20 variedades crioulas de arroz do Maranhão, mantidas no Banco Ativo de Germoplasma (BAG), do Centro Nacional de Pesquisa em Arroz e Feijão (CNPAF). As vinte variedades, divididas em seis grupos, com nomes similares e números de acessos diferentes no BAG foram avaliadas quanto à similaridade morfológica e molecular. As características morfológicas fo (mais) ram avaliadas e utilizadas para a construção de um dendrograma de similaridade. Após a colheita determinou-se o teor de proteína bruta dos grãos. No experimento em câmara de crescimento além das vinte variedades, utilizou-se a cultivar melhorada (IAC47). O DNA da parte aérea dessas plantas foi amplificado pela técnica do RAPD (DNA Polimórfico Amplificado ao Acaso), para se avaliar a similaridade genética entre as variedades. O dendrograma utilizando as características morfológicas revelou dois grupos, sendo um formado pelas plantas de nome "Lageado" e outro com as demais variedades. A análise genética confirmou os dados de morfologia, separando o grupo "Lageado" (com mais de 70 % de similaridade) das demais variedades, que formaram um grupo com dois subgrupos. Em um dos subgrupos, agruparam as variedades com maiores teores de proteína bruta nos grãos, confirmando a alta diversidade das variedades estudadas. Os resultados revelaram que algumas plantas de nome semelhante e número de acesso distinto são provavelmente a mesma variedade, e as plantas de nome "Lageado" formam um grupo à parte, cujas características, inclusive produtividade, merecem maiores estudos. Resumo em inglês Twenty rice landraces from Centro Nacional de Pesquisa em Arroz e Feijão (CNPAF), Brazil, were studied as to morphological traits, DNA markers revealed by RAPD technique and protein content. Assessed landraces were different Active Germplasm Bank (AGB) accessions comprising six groups of same common names. Similarity dendrograms based on morphological traits and DNA markers, revealed two groups, one of them, with 70% similarity, includes all accessions that had the term (mais) 'Lageado' in its common name. Dendrogram based on DNA markers further split the second group into two groups with different protein content. The results indicated that, in some cases, different accessions may actually represent the same germplasm. The 'Lageado" group deserves more detailed investigations due to its favorable agronomic characteristics and high yield.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

75

Variabilidade genética na região its do rDNA de isolados de trichoderma spp. (Biocontrolador) e Fusarium oxysporum f. sp. Chrysanthemi/ Genetic variability in rDNA ITS region of Trichoderma spp. (biocontrole agent) and Fusarium oxysporum f. sp. chrysanthemi isolates

Menezes, Josiane Pacheco; Lupatini, Manoeli; Antoniolli, Zaida Inês; Blume, Elena; Junges, Emanuele; Manzoni, Clarice G.
2010-02-01

Resumo em português A análise de características morfológicas e culturais podem não ser suficientes para uma caracterização precisa das espécies de Trichoderma e Fusarium. Objetivou-se, neste trabalho, caracterizar a região do Espaço Interno Transcrito (ITS) do rDNA dos isolados UFSMT15.1, UFSMT16 e UFSMT17 de Trichoderma spp. utilizados no biocontrole de Fusarium oxysporum f. sp. chrysanthemi (isolado) UFSMF6. A extração de DNA de cada isolado foi realizada a partir de micélio p (mais) roduzido em meio líquido Batata-Dextrose. As amostras de DNA genômico foram submetidas à Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) com os oligonucleotídeos iniciadores universais ITS1 e ITS4 e o produto gerado foi sequenciado. Os fragmentos gerados pela amplificação da PCR foram tratados com as enzimas de restrição HaeIII, HinfI e MboI. As regiões ITS1, ITS2 e 5.8S do rDNA desses isolados fúngicos foram amplificadas com sucesso. A região ITS dos isolados UFSMT15.1, UFSMT16 e UFSMT17 de Trichoderma e o isolado UFSMF6 de Fusarium apresentaram uma banda simples com um fragmento de aproximadamente 600 pares de base (pb). As enzimas de restrição HaeIII, HinfI e MboI geraram polimorfismo de bandas entre os isolados. Com base nas análises da sequência de DNA, os isolados UFSMT15.1, UFSMT16, UFSMT17 e UFSMF6 apresentaram maior similaridade com as espécies Trichoderma koningiopsis, Hypocrea virens, Hypocrea lixii e Fusarium oxysporum, respectivamente. Resumo em inglês The analysis of morphological and cultural characteristics may not enough for the characterization of the species of Trichoderma and Fusarium. The aim of this work was to characterize the Internal Transcribed Spacer (ITS) region of the rDNA of UFSMT15.1, UFSMT16 and UFSMT17 isolates of Trichoderma spp. used in the biocontrol of Fusarium oxysporum f. sp. chrysanthemi UFSMF6. DNA extraction of each isolate was accomplished starting from hyphae produced in liquid medium Pota (mais) to-Dextrose-Agar. The samples of genomic DNA were submitted to the Polymerase Chain Reaction (PCR) with the primers ITS1 and ITS4, and the product was sequenced. The fragments generated from PCR amplification were digested with the restriction enzymes HaeIII, HinfI and MboI. The ITS region of the Trichoderma's isolates UFSMT15.1, UFSMT16 and UFSMT17 and the Fusarium UFSMF6 isolate showed a simple band with a fragment with 600 base pairs (bp) approximately. The restriction enzymes HaeIII, HinfI and MboI generated band polymorphism among the isolates. The isolates UFSMT15.1, UFSMT16, UFSMT17 and UFSMF6 showed high similarity whit Trichoderma koningiopsis, Hypocrea virens, Hypocrea lixii and Fusarium oxysporum species, respectively.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

76

Rastreamento da mutação mitocondrial A1555G em pacientes com deficiência auditiva sensorioneural/ Screening of the mitochondrial A1555G mutation in patients with sensorineural hearing loss

Maniglia, Luciano Pereira; Moreira, Bruna Carolina Lemos; Silva, Magali Aparecida Orate Menezes da; Piatto, Vânia Belintani; Maniglia, José Victor
2008-10-01

Resumo em português A mutação mitocondrial A1555G é a principal alteração associada à surdez ocasionada pelo uso de aminoglicosídeos. OBJETIVO: Investigar a prevalência da mutação A1555G em pacientes com deficiência auditiva sensorioneural com e sem uso de antibióticos aminoglicosídeos. MATERIAL E MÉTODO: Estudo em amostras de 27 pacientes com surdez, como casos, e em 100 neonatos, com audição normal, como grupo controle. O DNA foi extraído de leucócitos de amostras de sang (mais) ue e "primers" específicos foram utilizados para amplificar o gene do citocromo b e a região que abrange a mutação A1555G do DNA mitocondrial, usando as técnicas da Reação em Cadeia da Polimerase e do Polimorfismo no Comprimento de Fragmentos de Restrição. DESENHO CIENTÍFICO: Estudo de casos em corte transversal. RESULTADOS: A região do gene do citocromo b foi amplificada, sendo confirmada a presença do DNA mitocondrial em todas as 127 amostras do estudo. A mutação A1555G não foi identificada nos 27 pacientes com deficiência auditiva e no grupo controle (100 neonatos). CONCLUSÕES: Os resultados são concordantes com estudos que relatam que a mutação A1555G não é prevalente nas Américas. Há interesse na determinação da real prevalência dessa mutação e na investigação de outras mutações que possam ocasionar deficiência auditiva associada ou não ao uso de aminoglicosídeos na população brasileira. Resumo em inglês The A1555G mitochondrial mutation is the main alteration associated with aminoglycoside-induced deafness. AIM: to investigate the prevalence of the A1555G mutation in patients sensorineural hearing loss patients with and without aminoglycosides antibiotic use. MATERIAL AND METHOD: a study of 27 cases with deafness as the sample, and 100 neonates with normal hearing as the control group. DNA was extracted from blood leukocyte samples, and specific oligonucleotide primers w (mais) ere designed to amplify the cytochrome b gene and the region which encloses the A1555G mutation of the mitocondrial DNA using the polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism. DESIGN: a cross-sectional case study. RESULTS: a region of the cytochrome b gene was amplified and the presence of the mtDNA was confirmed in all of the 127 cases. The A1555G mutation was not found in any of the 27 patients with hearing loss or the control group with 100 neonates. CONCLUSION: the results agree with studies stating that the A1555G mutation is not prevalent in the Americas. There is interest in establishing the real prevalence of this mutation and to investigate other mutations that may cause hearing loss, associated or not with the use of aminoglycosides, in the Brazilian population.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

77

Diagnóstico pré-natal das genodermatoses/ Prenatal diagnosis of genodermatoses

Sampaio, Maria Carolina de Abreu; Oliveira, Zilda Najjar Prado de; Miguelez, Javier
2007-08-01

Resumo em português O diagnóstico pré-natal está indicado para algumas genodermatoses graves, como a epidermólise bolhosa distrófica recessiva e a epidermólise bolhosa juncional. A biópsia de pele fetal foi introduzida em 1980, mas não pode ser realizada antes da 15a semana de gestação. A análise do DNA fetal é método preciso e pode ser realizado mais precocemente na gestação. No entanto, deve-se conhecer a base molecular da genodermatose, e é essencial determinar a mutação (mais) e/ou marcadores informativos nas famílias com criança previamente afetada. O DNA fetal pode ser obtido pela biópsia da vilosidade coriônica ou amniocentese. O diagnóstico genético pré-implantação tem surgido como alternativa que dispensa a interrupção da gestação. Essa técnica, que envolve fertilização in vitro e teste genético do embrião. vem sendo realizada para genodermatoses em poucos centros de referência. A ultra-sonografia é exame não invasivo, mas tem uso limitado no diagnóstico pré-natal de genodermatoses. A ultrasonografia tridimensional geralmente estabelece o diagnóstico tardiamente na gestação, e há apenas relatos anedóticos de diagnóstico pré-natal de genodermatoses usando esse método. Resumo em inglês Prenatal diagnostic testing is indicated for some severe genodermatoses, such as recessive dystrophic epidermolysis bullosa and junctional epidermolysis bullosa. Fetal skin biopsy was introduced in 1980, but it cannot be performed before 15th gestational week. Fetal DNA analysis is a precise method and can be performed earlier in pregnancy. However, the molecular basis of the genodermatoses must be known and it is essential to determine the gene mutations and/or informati (mais) ve markers in the families with a previously affected child. Fetal DNA can be obtained by chorionic villus sampling or amniocentesis. Preimplantation genetic diagnosis is an alternative approach obviating the need for termination of pregnancy. It involves in vitro fertilization and genetic testing of embryos. However, this technique has been performed for genodermatoses in only a few reference centers. Ultrasonography is a non-invasive test, but has a limited use in prenatal diagnosis of genodermatoses. Tridimensional ultrasonography usually establishes diagnosis late in pregnancy and there are only anecdotal reports of prenatal diagnosis of genodermatoses using this method.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

78

Pode a genética definir quem deve se beneficiar das cotas universitárias e demais ações afirmativas?

Pena, Sérgio D.J.; Bortolini, Maria Cátira
2004-04-01

Resumo em português NESTE TRABALHO nós usamos o instrumental da genética molecular e da genética de populações para estimar quantitativamente a contribuição africana para a formação do povo brasileiro. Examinamos dois compartimentos genômicos: o DNA mitocondrial, de herança matrilínea, e o DNA nuclear, de herança bi-parental. Os estudos mitocondriais revelaram que aproximadamente 30% dos brasileiros autoclassificados como brancos e 80% dos negros apresentam linhagens maternas ca (mais) racterísticas da áfrica subsaariana. A partir destes dados, estimamos que pelo menos 89 milhões de brasileiros são afro-descendentes, um número bem superior aos 76 milhões de pessoas que se declararam negros (pretos e pardos) no censo de 2000 do IBGE. As análises de polimorfismos nucleares com marcadores "informativos de ancestralidade" mostraram resultados mais expressivos ainda. Usando estudos de brasileiros autoclassificados como brancos de várias regiões do Brasil, estimamos que aproximadamente 146 milhões de brasileiros (86% da população) apresentam mais de 10% de contribuição africana em seu genoma. Estes números devem ser levados em conta nas discussões sobre ações afirmativas no Brasil, mas em um sentido descritivo e não prescritivo. Resumo em inglês IN THIS ARTICLE we used tools of molecular and population genetics to estimate quantitatively the African contribution for the formation of the Brazilian population. We examined two genomic compartments: mitochondrial DNA (mtDNA), maternally inherited, and nuclear DNA, inherited from both parents. The studies using mtDNA showed that about 30% of Brazilians self-classified as White and 80% of Brazilian Negroes carry maternal lineages typical of Sub-Saharan Africa. Using th (mais) ese data we could estimate that at least 89 million Brazilians are afrodescendants, a number considerably larger than the 76 million individuals self-classified as Negro in the 2000 census. The analyses on nuclear polymorphisms employed "ancestry informative" markers and showed even more striking results. On the basis of studies in individuals self-classified as White from several Brazilian regions, we estimated that approximately 146 million Brazilians (86% of the population) had more than 10% African contribution to their genome. These numbers should be taken into account in discussing affirmative action programs in Brazil, but in a descriptive rather than a prescriptive sense.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

79

Detecção de HPV na mucosa oral e genital pela técnica PCR em mulheres com diagnóstico histopatológico positivo para HPV genital/ HPV detection in the oral and genital mucosa of women with positive histopathological exam for genital HPV, by means of the PCR

Castro, Therezita M. Peixoto Patury Galvão; Bussoloti Filho, Ivo; Nascimento, Velber Xavier; Xavier, Sandra Doria
2009-04-01

Resumo em português A infecção do papilomavírus humano (HPV) é uma das mais freqüentes doenças sexualmente transmissíveis em todo o mundo. A relação entre o HPV genital e oral permanece incerta, assim como o seu papel na carcinogênese oral. O objetivo deste estudo foi verificar a presença do DNA do HPV na mucosa oral e genital de mulheres com infecção genital por HPV, pela técnica de reação em cadeia de polimerase (PCR). FORMA DE ESTUDO: Coorte transversal. MATERIAL E MÉTODO (mais) : Trata-se de um estudo piloto, prospectivo, com 30 mulheres, idade de 14 a 51 anos, portadoras de infecção genital por HPV confirmada pelo exame de histopatológico. Todas as pacientes foram submetidas a exame e coleta por raspagem da cavidade oral e genital para pesquisa do DNA do HPV pela técnica PCR. RESULTADOS: Nenhuma das amostras da cavidade oral foi positiva para HPV, enquanto no genital, o HPV foi detectado em 17 (57%) das 30 pacientes, principalmente o HPV 6b e 16. CONCLUSÃO: Os resultados mostraram maior porcentagem do HPV genital em relação à cavidade oral, e sugerem que o HPV genital não parece ser fator predisponente para a infecção oral no mesmo paciente. Resumo em inglês Infection by the Human Papilloma Virus (HPV) is one of the most frequent sexually transmitted diseases all over the world. The relationship between oral and genital HPV remains uncertain, as it is with its role on oral carcinogenesis. The goal of the present investigation was to check for the presence of HPV DNA in the oral and genital mucosas of women with HPV genital infection, using the polymerase chain reaction (PCR). STUDY METHOD: Cross-sectional cohort. MATERIALS AN (mais) D METHODS: this is a pilot and prospective study involving 30 women, aged between 14 and 51 years, with HPV genital infection, confirmed by histopathology. All the patients were submitted to the exam and sample collection by swabbing the oral and genital mucosas in order to test for HPV DNA through the PCR technique. RESULTS: none of the oral cavity samples were positive for HPV, while in the genital tract, HPV was detected in 17 (57%) of the 30 patients, especially HPVs 6b and 16. CONCLUSION: Results show a higher percentage of genital HPV in comparison to the oral cavity, and suggest that genital HPV does not seem to be a predisposing factor for the oral infection in the same patient.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

80

Biotecnologia animal

Coutinho, Luiz Lehmann; Rosário, Millor Fernandes do
2010-01-01

Resumo em português A biotecnologia animal tem fornecido novas ferramentas para os programas de melhoramento e, dessa forma, contribuído para melhorar a eficiência da produção dos produtos de origem animal. No entanto, os avanços têm sido mais lentos do que antecipados, especialmente em razão da dificuldade na identificação dos genes responsáveis pelas características fenotípicas de interesse zootécnico. Três estratégias principais têm sido utilizadas para identificar esses g (mais) enes - mapeamento de QTL, genes candidatos e sequenciamento de DNA e mRNA - e cada uma tem suas vantagens e limitações. O mapeamento de QTL permite determinar as regiões genômicas que contêm genes, mas o intervalo de confiança do QTL pode ser grande e conter muitos genes. A estratégia de genes candidatos é limitada por causa do conhecimento ainda restrito das funções de todos os genes. Os sequenciamentos de genomas e de sequências expressas podem auxiliar na identificação da posição de genes e de vias metabólicas associadas à característica de interesse. A integração dessas estratégias por meio do desenvolvimento de programas de bioinformática permitirá a identificação de novos genes de interesse zootécnico. Assim, os programas de melhoramento genético se beneficiarão pela inclusão da informação obtida diretamente do DNA na avaliação do mérito genético dos plantéis disponíveis. Resumo em inglês Animal biotechnology is providing new tools for animal breeding and genetics and thus contributing to advances in production efficiency and quality of animal products. However, the progress is slower than anticipated, mainly because of the difficulty involved in identifying genes that control phenotypic characteristics of importance to the animal industry. Three main strategies: QTL mapping, candidate genes and DNA and mRNA sequencing have been used to identify genes of e (mais) conomic interest to animal breeding and each has advantages and disadvantages. QTL mapping allows identification of the genomic region that contains the genes, but the confidence interval of the regions is usually large and may contain several genes. Candidate gene approach is limited to our restricted knowledge of the biological function of the genes. Sequencing of genomes and expressed sequences tags can provide identifying gene position and metabolic pathways associated with phenotypic trait. Integrating these strategies using bioinformatics software will allow identifying of novel genes for animal production. Then, animal breeding programs will include the information from DNA directly on evaluation of genetic value of livestock production.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

81

Biologia molecular aplicada às dermatoses tropicais/ Molecular biology in tropical dermatoses

Roselino, Ana Maria
2008-06-01

Resumo em português São apresentados conceitos básicos sobre célula, código genético e síntese protéica, e sobre algumas técnicas de biologia molecular, tais como PCR, PCR-RFLP, seqüenciamento de DNA, RT-PCR e immunoblotting. São fornecidos protocolos de extração de nucleotídeos e de proteínas, como salting out no sangue periférico e métodos do fenol-clorofórmio e do trizol em tecidos. Seguem-se exemplos comentados da aplicação de técnicas de biologia molecular para o dia (mais) gnóstico etiológico e pesquisa em dermatoses tropicais, com ênfase na leishmaniose tegumentar americana e hanseníase. Resumo em inglês Initially, basic concepts are presented concerning the cell, genetic code and protein synthesis, and some techniques of molecular biology, such as PCR, PCR-RFLP, DNA sequencing, RT-PCR and immunoblotting. Protocols of nucleotides and of proteins extraction are supplied, such as salting out in peripheral blood allied to phenol-chloroform and trizol methods in skin samples. To proceed, commented examples of application of those techniques of molecular biology for the etiolo (mais) gic diagnosis and for research in tropical dermatoses, with emphasis to American tegumentary leishmaniasis and leprosy are presented.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

82

Pythium insidiosum: relato do primeiro caso de infecção humana no Brasil/ Pythium insidiosum: report of the first case of human infection in Brazil

Marques, Silvio Alencar; Bagagli, Eduardo; Bosco, Sandra M. G.; Camargo, Rosangela M. P.; Marques, Mariangela E. A.
2006-10-01

Resumo em português A pitiose é causada por microorganismo aquático, fungo-símile, o Pythium insidiosum, patógeno de homens e animais. Observou-se um paciente com úlcera fagedênica no membro inferior, com exame anatomopatológico sugestivo de zigomicose, pouco sensível à terapêutica antifúngica, obtendo-se cura por meio de ampla exérese. A comprovação etiológica resultou de métodos moleculares, com amplificação e seqüenciamento de DNA de organismo isolado em ágar Sabouraud, observando-se 100% de analogia com seqüências de P. insidiosum depositadas no GenBank. Resumo em inglês Pythiosis is caused by an aquatic fungus-like organism, Pythium insidiosum, pathogenic to men and animals. A patient with a phagedenic ulcer on the leg is reported. Histopathological examination was suggestive of zygomycosis, response to antifungal drugs was poor and cure was obtained by means of wide surgical excision. Etiologic diagnosis was confirmed by molecular amplification and DNA sequencing of colonies isolated in Sabouraud agar. After BLAST analysis, the sequence showed 100% identity with those of P. insidiosum deposited on the GenBank.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

83

Terapia gênica: o que é, o que não é e o que será

Linden, Rafael
2010-01-01

Resumo em português Terapia gênica é o tratamento baseado na introdução de genes sadios com uso de técnicas de DNA recombinante. O primeiro teste clínico bem-sucedido dessa técnica foi divulgado em 1990. Em que pese a ocorrência, em certos estudos clínicos, de efeitos adversos, alguns dos quais graves, laboratórios de pesquisa e empresas vêm continuamente desenvolvendo novos materiais e procedimentos mais seguros e eficazes. Embora ainda em estágio experimental, progressos recent (mais) es indicam oportunidades crescentes de investimento pela indústria, bem como justificam a expectativa de que, em alguns casos, essa tecnologia poderá chegar à prática clínica dentro de poucos anos. Resumo em inglês Gene therapy is the therapeutic procedure based on the introduction of healthy genes using recombinant DNA techniques. The first successful clinical trial of this technique was published in 1990. Despite the occurrence, in certain clinical trials, of adverse effects, some of which serious, both laboratories and companies are continuously developing novel materials and establishing both safer and more effective procedures. Although still in experimental stages, recent prog (mais) ress both points to growing opportunities for investment by industry, as well as justify the expectation that, in some cases, this technology may reach clinical practice within a few years.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

84

Diversidade genética entre acessos de capim-elefante obtida com marcadores moleculares/ Genetic diversity among elephantgrass accessions estimated by molecular markers

Pereira, Antonio Vander; Machado, Marco Antonio; Azevedo, Ana Luisa Sousa; Nascimento, Carlos Souza do; Campos, Ana Lúcia; Lédo, Francisco José da Silva
2008-07-01

Resumo em português Este trabalho foi realizado para estimar a diversidade genética de 30 acessos de capim-elefante utilizando-se marcadores moleculares. Amostras de DNA genômico de cada acesso foram obtidas para realização da amplificação por PCR utilizando a técnica de marcadores RAPD. Foram utilizados 20 primers aleatórios que geraram 88 bandas de DNA de alta intensidade e reprodutíveis (64 bandas polimórficas e 24 monomórficas). Os acessos foram agrupados pelo método UPGMA co (mais) m base na estimativa das distâncias genéticas. Os grupos de acessos Porto Rico, Santa Rita e IJ-7136 cv. EMPASC 307 e; Mineiro e Mineiro Ipeaco apresentaram distância genética nula entre si, comprovando tratar-se do mesmo material genético com designação diferente. Alguns pares de acessos apresentaram distância genética mínima, como Napier e Mineiro ou Mineiro Ipeaco (0,01); P 241 Piracicaba e Guaçu / IZ2 (0,01); Capim Cana D'África e Vrukwona (0,02); Merker Comum e Merker Comum de Pinda (0,03), indicando tratar-se de genótipos com estreito grau de parentesco. A maior distância genética foi obtida entre os acessos Mercker Comum de Pinda e Napier X 23A (0,34). Os resultados indicam que existe variabilidade genética entre os acessos e que as estimativas de distância genética podem ser utilizadas como critério para seleção de genitores em programas de melhoramento desta gramínea forrageira. Resumo em inglês This study aimed to estimate the genetic diversity among Elephantgrass accessions using molecular markers. DNA samples of 30 accessions were obtained to perform PCR amplification using RAPD technique. Twenty random primers were used to obtain 88 high intensity and reproducible DNA bands (64 were polymorphic and 24 were monomorphic). Accessions were grouped by genetic distance estimates using UPGMA clustering. Genetic distances among Porto Rico, Santa Rita, IJ-7136 cv EMPA (mais) SC 307; Mineiro and Mineiro Ipeaco accessions were null, suggesting that they are genetically the same although labeled with different names. Genetic distances were minimum between the pairs of accessions Napier and Mineiro or Mineiro Ipeaco (0,01); P 241 Piracicaba and Guaçu / IZ2 (0,01); Capim Cana D'África and Vrukwona (0,02); Merker Comum and Merker Comum de Pinda (0,03) and indicate that their genotypes are closely related. The largest genetic distance (0,34) was observed between the Mercker Comum de Pinda and Napier X 23A accessions. Overall, the results indicate genetic variability among accessions and suggest that genetic distance may be used as an auxiliary criterion of selection in breeding programs of elephantgrass genotypes.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

85

Identificação diferencial de Rhodococcus equi e Dietzia maris em bubalinos/ Differential identification of Rhodococcus equi and Dietzia maris in buffaloes

Viana, L.R.; Krewer, C.C.; Drescher, G.; Lazzari, A.; Botton, S.A.; Costa, M.M.; Loreto, E.L.S.; Vargas, A.C.
2009-08-01

Resumo em português Foram analisados 24 isolados bacterianos oriundos de leite e pele de búfalas (Bubalus bubalis), os quais foram previamente identificados como Rhodococcus equi com o auxílio de fenotipia concisa. Testes fenotípicos complementares e ferramentas moleculares foram utilizados com o objetivo de caracterizar esses isolados, bem como diferenciá-los de outros microrganismos intimamente relacionados. Observaram-se três fenótipos distintos, porém a identificação dos isolado (mais) s foi inconclusiva. Apenas um dos isolados foi comprovado como sendo R. equi com a realização da PCR espécie-específica, sequenciamento e análise dos fragmentos de DNA. Os demais isolados só foram identificados pelo sequenciamento de fragmento do gene que codifica a região 16S do rRNA universal de bactérias, indicando tratar-se de Dietzia maris. O perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos revelou maior resistência dos isolados de D. maris para oxacilina (96%) e rifampicina (87%). O isolado de R. equi apresentou resistência à amicacina, oxacilina, penicilina, rifampicina e tetraciclina. Alerta-se para o risco da incorreta identificação dos isolados baseados em testes fenotípicos concisos e para a necessidade de utilização de testes complementares para diferenciação entre R. equi e D. maris. Resumo em inglês Twenty-four bacterial isolates from milk and skin of buffalo females (Bubalus bubalis), which previously had been identified as Rhodococcus equi by using a restricted number of phenotypical tests for bacterial characterization, were analyzed. The goal of this study was to perform the characterization of these isolates, as well as the differentiation of other microorganisms closely related by using additional phenotypical tests and molecular tools. Based on the phenotypica (mais) l results, three different biotypes were obtained. However, the identification of the isolates was inconclusive. Only one of the isolates was confirmed as R. equi by the PCR specifically for this species, as well DNA sequencing and DNA fragment analysis. All the other isolates only could be precisely identified after the DNA sequencing, and they were characterized as Dietzia maris. The sensitivity profile to antimicrobials demonstrated the highest resistance of D. maris to oxacillin and rifampin, 96% and 87%, respectively. R. equi isolate, presented resistance to amikacin, oxacillin, penicillin, rifampin, and tetracycline. Thus, it is important to alert for the risk of the incorrect identification of the bacterial isolates by using diagnostic analysis based on phenotypical tests in order to differentiate R. equi and D. maris, besides the necessity to use complementary tests for differentiation of these microorganisms.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

86

Associação entre carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço e polimorfismo no p53 (códon 72)/ P53 codon 72 polymorphism association with head and neck squamous cell carcinoma

Mojtahedi, Zahra; Hashemi, Seyed Basir; Khademi, Bijan; Karimi, Morteza; Haghshenas, Mohammad Reza; Fattahi, Mohammad Javad; Ghaderi, Abbas
2010-06-01

Resumo em português O gene supressor tumoral p53 abriga um polimorfismo funcional que codifica ou arginina (Arg) ou prolina (Pro) no códon 72 da proteína p53. Este polimorfismo tem sido considerado associado com o desenvolvimento e prognóstico do carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço (CECP). OBJETIVO: Foram avaliados genótipo e freqüências alélicas do códon 72 do p53 em pacientes iranianos com CECP. TIPO DE ESTUDO: Estudo de Caso. MATERIAIS E MÉTODOS: Um total de 132 pacient (mais) es com CECP e 123 controles saudáveis foram genotipados. A fonte de DNA foi composta de células mononucleares do sangue periférico. A amplificação do DNA foi realizada através da reação em cadeia da polimerase específica para alelos. RESULTADOS: A distribuição dos alelos e genótipos não foi significativamente diferente entre os pacientes e controles. Além disso, nenhuma associação estatisticamente significativa foi encontrada entre o polimorfismo do códon 72 do p53 e localização, sexo ou idade no momento do diagnóstico. No entanto, o genótipo Pro/Pro estava significativamente aumentado em pacientes no estágio IV (30,8%) quando comparado ao estágio I-III da doença (11,1%) (p=0,03), e um número significativamente maior de doentes com o alelo Pro teve um aumento no risco de desenvolver doença no estágio IV (OR=2,2, IC= 95% =1.2-4.2, p=0,01). CONCLUSÃO: Os dados revelaram que o polimorfismo do p53 não afeta o risco de CECP em iranianos; porém, pode afetar a progressão para um estágio superior tumor. Resumo em inglês p53 tumoral suppressor gene harbors a functional polymorphism which codes either arginine (Arg) or proline (Pro) in the protein p53 of codon 72. Such polymorphism has been associated with the development or prognosis of head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC). AIM: we assessed codon 72 p53 allelic frequencies and genotypes in HNSCC Iranian patients. STUDY DESIGN: Case Study. MATERIALS AND METHODS: a total of 132 HNSCC patients and 123 healthy controls were genotyped (mais) . DNA source was from mononuclear cells of the peripheral blood. DNA amplification was done by means of the allele-specific polymerase chain reaction. RESULTS: genotypes and allele distribution were not significantly different between patients and controls. Moreover, no statistically significant association was found between the 72 and p53 codon tumor location, gender or age at the time of diagnosis. However, the Pro/Pro genotype was significantly increase in stage IV patients (30.8%) when compared to stages I-III of the disease (11.1%) (p=0.03), and a significantly higher percentage of patients with the Pro allele had and a risk increase in stage IV disease (OR=2.2, 95% CI=1.2-4.2, p=0.01). CONCLUSION: data revealed that the p53 polymorphism do not impact the risk of HNSCC in Iranians, nonetheless, it can affect tumor progression to a higher tumor stage.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

87

Associação entre funções da via auditiva eferente e genotoxicidade em adultos jovens/ Association between auditory pathway efferent functions and genotoxicity in young adults

Fronza, Andressa Boer; Barreto, Daniele Coronel Menna; Tochetto, Tânia Maria; Cruz, Ivana Batrice Mânica da; Silveira, Aron Ferreira da
2011-02-01

Resumo em português Funções da via auditiva eferente incluem a modulação das células ciliadas externas, proteção contra ruído e melhora na detecção da fonte sonora em ambientes ruidosos. Genotoxicidade são danos ao DNA. OBJETIVOS: Analisar associação entre funções da via auditiva eferente com marcadores genotóxicos. Adicionalmente, considerou-se tabagismo e gênero como principais variáveis intervenientes. MATERIAL E MÉTODO: Estudo prospectivo-clínico, quantitativo, transv (mais) ersal, contemporâneo. Foi realizada uma análise da função da via auditiva eferente e indicadores de genotoxicidade em 60 voluntários adultos jovens. RESULTADOS: Idade média dos voluntários foi de 24,86±3,68 anos; 30 do gênero masculino e 30 do gênero feminino, 15 de cada gênero tabagistas e 15 não tabagistas; indivíduos do gênero masculino tabagistas apresentaram maior ocorrência de efeito de supressão das EOAEPDs nas frequências de 2000 e 6000Hz na orelha do lado esquerdo; mulheres tabagistas apresentaram maior prevalência de queixa de dificuldade de ouvir em ambiente ruidoso; indivíduos tabagistas e mulheres apresentaram maiores danos ao DNA; indivíduos com queixas de dificuldade auditiva e zumbido apresentaram maiores índices de genotoxicidade. CONCLUSÕES: Em adultos jovens normo-ouvintes que referem queixas relacionadas às funções da via auditiva eferente, como zumbido e dificuldade auditiva, já é possível observar associação com genotoxicidade considerando interações entre gênero e tabagismo. Resumo em inglês Efferent auditory pathways modulate outer hair cells of the cochlea, protect against noise, and improve the detection of sound sources in noisy environments. Genotoxicity is DNA damage. AIM: To study the association between auditory pathway efferent functions with genotoxic markers. The study also considered smoking and gender as two main variables. METHODS: A prospective-clinical, quantitative, cross-sectional, contemporary study. The function of efferent auditory pathwa (mais) ys and genotoxicity tests in 60 healthy young subjects were assessed. RESULTS: The mean age of subjects was 24.86 years +/- 3.68 years; there were 30 males and 30 females, 15 of each gender smokers and 15 non-smokers. Male smokers had a higher incidence of DPOEA suppression effect at 2000 and 6000 Hz in the left ear; female smokers had a higher prevalence of complaints of difficulty to hear in noisy environments; smokers and women had a higher mean DNA damage; subjects with complaints of hearing loss and tinnitus had higher genotoxicity. CONCLUSIONS: In young normal-hearing adults that complain about efferent auditory pathways functions, such as tinnitus and hearing impairment, there are possible associations with genotoxicity; interactions between gender and smoking are considered.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

88

Metilglioxal: uma toxina endógena?/ Is methylglyoxal an endogenous toxin?

Sartori, Adriano; Bechara, Etelvino José Henriques
2010-01-01

Resumo em inglês Methylglyoxal is a very reactive α-oxoaldehyde putatively produced by glycolysis, cytochrome P450-catalyzed acetone oxidation and aminoacetone oxidation. Methylglyoxal has been pointed as a substrate for the glyoxalase system ultimately energy-yielding pyruvate, but methylglyoxal is also a toxicant involved in protein aggregation and DNA modification. Controversial hypothesis on methylglyoxal as an anticancer agent, an energy-yielding glycolysis intermediates, and as (mais) a regulator of cell division have also been proposed. Methylglyoxal research focuses now on unveiling its biological properties and on the discovery of drugs capable to inhibit its toxic effects, principally in diabetes.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

89

Detecção de Toxoplasma gondii no sêmen de ovinos naturalmente infectados/ Toxoplasma gondii detection in the semen of naturally infected sheep

Moraes, Érica P.B.X; Faria, Eduardo B; Batista, André M; Freitas, Antonio Carlos; Silva, Jean Carlos R; Albuquerque, Pedro Paulo F; Mota, Rinaldo A
2010-11-01

Resumo em português O objetivo deste trabalho foi estudar a eliminação de Toxoplasma gondii no sêmen de carneiros naturalmente infectados. Foram utilizados 65 reprodutores submetidos inicialmente à pesquisa de anticorpos anti-T. gondii por meio da técnica de imunofluorescência indireta (IFI). Os carneiros sorologicamente positivos foram submetidos à colheita de sêmen para detecção do DNA de T. gondii. Na sorologia observaram-se 6/65 (9,2%) carneiros positivos, enquanto no PCR neste (mais) d de sêmen 4/6 (66,6%) carneiros foram positivos. Conclui-se que a detecção, por meio da técnica da PCR nested, da forma proliferativa de T. gondii no sêmen de carneiros naturalmente infectados, reforça a necessidade de se pesquisar sobre a possibilidade da transmissão horizontal do parasito via sêmen na espécie ovina. Resumo em inglês The aim of this paper was to study the Toxoplasma gondii shedding in the semen of naturally infected rams. Sixty-five rams were initially submitted to anti-T. gondii antibody detection by indirect immunofluorescence (IIF). Serologically positive rams were then submitted to semen collection for T. gondii DNA detection. In the serology, 6/65 (9.2%) rams were positive, while in the nested PCR of semen there were 4/6 (66.6%) positive rams. It can be concluded that detection o (mais) f the proliferative form of T. gondii in semen of naturally infected rams by the nested PCR technique reinforces the need to investigate possible horizontal transmission of this parasite via semen in sheep.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

90

Vasculite granulomatosa necrosante isolada de colo uterino associada à infecção por papilomavírus humano/ Isolated necrotizing granulomatous vasculitis of the uterine cervix associated with human papillomavirus infection

Rosa Neto, Nilton Salles; Souza, Fernando Henrique Carlos de; Shiang, Christina; Saldanha, Luís Balthazar; Shinjo, Samuel Katsuyuki; Halpern, Ari Stiel Radu
2009-10-01

Resumo em português Vasculites de órgão único, ou isoladas, já foram descritas em diversos órgãos e seu achado pode ser acidental. Relatamos um caso de vasculite granulomatosa necrosante isolada de colo uterino em uma paciente de meia-idade, previamente hígida, sexualmente ativa, e cuja pesquisa de DNA de papilomavírus humano (Human Papiloma Virus - HPV) por captura híbrida foi positiva. Não foi identificado comprometimento sistêmico e, como houve excisão completa da lesão, opto (mais) u-se pelo acompanhamento clínico. Há poucos relatos, na literatura, de acometimento do trato genital feminino de forma isolada, alguns com presença simultânea de lesões que podem ser causadas pelo HPV, postulando-se uma associação patogênica. Resumo em inglês Single organ vasculitis (SOV), or isolated vasculitis, has been described in several organs and it can be an accidental finding. We report a case of isolated necrotizing granulomatous vasculitis of the uterine cervix in a middle-aged woman, previously healthy, and sexually active, and whose human papillomavirus (HPV) DNA hybrid capture assay was positive. Systemic involvement was not detected and, since the lesion was completely removed, we opted for a clinical follow-up. (mais) The literature has very few reports on the isolated involvement of the female genital tract, and some had concomitant lesions that could be caused by the HPV, indicati.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

91

Papilomavírus humano e neoplasia cervical/ Human papillomavirus and cervical neoplasia

Rosa, Maria Inês da; Medeiros, Lídia Rosi; Rosa, Daniela Dornelles; Bozzeti, Mary Clarisse; Silva, Fábio Rosa; Silva, Bruno Rosa
2009-05-01

Resumo em português O papilomavírus humano (HPV) é um fator etiológico bem estabelecido para o câncer cervical. Esse vírus de DNA infecta primariamente o epitélio e pode induzir lesões benignas ou malignas na pele e na mucosa. Alguns HPVs são considerados de alto risco, responsáveis pela progressão das lesões precursoras até câncer cervical. A infecção genital pelo HPV é comum em mulheres jovens e geralmente é transitória. Uma pequena proporção de mulheres infectadas dese (mais) nvolve câncer cervical, implicando o envolvimento de fatores ambientais e fatores genéticos na carcinogênese. Essa revisão aborda a estrutura viral, classificação e patologia do HPV, história natural e fatores de risco para neoplasia cervical e perspectivas futuras com a vacina anti-HPV. Resumo em inglês Human papillomavirus (HPV) has been established as an important etiological factor for the development of cervical cancer. This DNA virus primarily infects the epithelium and can induce benign and malignant lesions of the mucous membranes and skin. Some HPVs are considered high risk due to their role in malignant progression of cervical tumors. Genital HPV infections are common and usually transient among young sexually active women. Only a small fraction of infected wome (mais) n develop cervical cancer, implying the involvement of environmental and genetic cofactors in cervical carcinogenesis. Classification, virology, pathology, natural history, epidemiological features of genital HPV infection, and future prospects for cervical cancer prevention with HPV vaccines will be reviewed here.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

92

Papilomavírus humano e neoplasia cervical/ Human papillomavirus and cervical neoplasia

Rosa, Maria Inês da; Medeiros, Lídia Rosi; Rosa, Daniela Dornelles; Bozzeti, Mary Clarisse; Silva, Fábio Rosa; Silva, Bruno Rosa
2009-05-01

Resumo em português O papilomavírus humano (HPV) é um fator etiológico bem estabelecido para o câncer cervical. Esse vírus de DNA infecta primariamente o epitélio e pode induzir lesões benignas ou malignas na pele e na mucosa. Alguns HPVs são considerados de alto risco, responsáveis pela progressão das lesões precursoras até câncer cervical. A infecção genital pelo HPV é comum em mulheres jovens e geralmente é transitória. Uma pequena proporção de mulheres infectadas dese (mais) nvolve câncer cervical, implicando o envolvimento de fatores ambientais e fatores genéticos na carcinogênese. Essa revisão aborda a estrutura viral, classificação e patologia do HPV, história natural e fatores de risco para neoplasia cervical e perspectivas futuras com a vacina anti-HPV. Resumo em inglês Human papillomavirus (HPV) has been established as an important etiological factor for the development of cervical cancer. This DNA virus primarily infects the epithelium and can induce benign and malignant lesions of the mucous membranes and skin. Some HPVs are considered high risk due to their role in malignant progression of cervical tumors. Genital HPV infections are common and usually transient among young sexually active women. Only a small fraction of infected wome (mais) n develop cervical cancer, implying the involvement of environmental and genetic cofactors in cervical carcinogenesis. Classification, virology, pathology, natural history, epidemiological features of genital HPV infection, and future prospects for cervical cancer prevention with HPV vaccines will be reviewed here.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

93

Evidência de transmissão de leishmaniose visceral por Lutzomyia cruzi no município de Jaciara, Estado de Mato Grosso, Brasil/ Evidence of transmission of visceral leishmaniasis by Lutzomyia cruzi in the municipality of Jaciara, State of Mato Grosso, Brazil

Missawa, Nanci Akemi; Veloso, Márcia Aurélia Esser; Maciel, Giovana Belem Moreira Lima; Michalsky, Érika Monteiro; Dias, Edelberto Santos
2011-02-01

Resumo em português INTRODUÇÃO: O município de Jaciara foi classificado em 2003, como área de transmissão de leishmaniose visceral em situação de surto. O trabalho objetivou determinar evidência de transmissão de Leishmania (Leishmania) infantum chagasi por Lutzomyia cruzi no município de Jaciara, Estado de Mato Grosso, Brasil. MÉTODOS: O município situa-se a 127km da capital Cuiabá e é um importante ponto de atração para os praticantes de eco-turismo. Fêmeas de Lutzomyia cr (mais) uzi, capturadas com armadilha de CDC, foram dissecadas para confirmação da espécie e armazenadas a -20ºC em pools de 10 indivíduos para extração de DNA, PCR genérico, RFLP específico e eletroforese em gel de poliacrilamida. RESULTADOS: O levantamento entomológico demonstrou a ocorrência abundante de Lutzomyia cruzi e ausência de Lutzomyia longipalpis, principal vetora da Leishmania (Leishmania) infantum chagasi. Uma das três amostras analisadas apresentou banda característica de DNA de Leishmania (120pb) em PCR genérico. Para confirmação da espécie de Leishmania, na RFLP utilizaram-se controles positivos de Leishmania (Leishmania) amazonensis, Leishmania (Viannia) braziliensis e Leishmania (Leishmania) infantum chagasi digeridas com enzima de restrição HaeIII. Constatou-se um padrão de bandas semelhante à Leishmania (Leishmania) infantum chagasi em uma amostra, confirmando a detecção de infecção natural de Leishmania (Leishmania) infantum chagasi em Lutzomyia cruzi. CONCLUSÕES: A ocorrência de casos humanos e cães positivos, a presença da Lutzomyia cruzi e a ausência de Lutzomyia longipalpis, bem como a detecção de infecção natural por Leishmania (Leishmania) infantum chagasi, evidenciam a participação de Lutzomyia cruzi na transmissão da leishmaniose visceral em Jaciara, Estado de Mato Grosso, Brasil. Resumo em inglês INTRODUCTION: The municipality of Jaciara was classified in 2003 as a transmission area for visceral leishmaniasis in outbreak situations. This study aimed to establish evidence of transmission of Leishmania (Leishmania) infantum chagasi by Lutzomyia cruzi in the municipality of Jaciara, State of Mato Grosso, Brazil. METHODS: This municipality is located 127 km from the state capital (Cuiabá) and is an important center for ecotourism practitioners. Females of Lutzomyia c (mais) ruzi, captured using CDC traps, were dissected to confirm the species and stored at -20ºC in pools of 10 individuals for DNA extraction, generic PCR, specific RFLP and electrophoresis on polyacrylamide gel. RESULTS: The entomological survey showed abundant occurrence of Lutzomyia cruzi and absence of Lutzomyia longipalpis (the main vector for Leishmania (Leishmania) infantum chagasi). One of the three samples showed a characteristic DNA band from Leishmania (120 bp) in generic PCR. To confirm the Leishmania species via RFLP, positive controls for Leishmania (Leishmania) amazonensis, Leishmania (Viannia) braziliensis and Leishmania (Leishmania) infantum chagasi digested with restriction enzyme HaeIII were used. A pattern of bands similar to Leishmania (Leishmania) infantum chagasi was found in one sample, thus confirming the detection of natural infection with Leishmania (Leishmania) infantum chagasi in Lutzomyia cruzi. CONCLUSIONS: The occurrences of positive cases in humans and dogs, the presence of Lutzomyia cruzi and the absence of Lutzomyia longipalpis together with the detection of natural infection with Leishmania (Leishmania) infantum chagasi, indicate that Lutzomyia cruzi participates in visceral leishmaniasis transmission in Jaciara, State of Mato Grosso, Brazil.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

94

Aspectos mecanísticos da bioatividade e toxicidade de nitrocompostos/ Aspects of bioactivity and toxicity of nitrocompounds

Paulai, Fávero Reisdorfer; Serrano, Silvia Helena Pires; Tavares, Leoberto Costa
2009-01-01

Resumo em inglês Nitrocompounds are bioactive molecules used as antibacterial, antiparasitic and antitumoral agents. In the past of years, these molecules have been broadly studied in several fields, such as medicinal chemistry, organic chemistry, biochemical, toxicology and electrochemistry. The nitrocompounds mode of action involves the biotransformation of the nitro group, releasing intermediates in the redox process. Some of those intermediates attack enzymes, membranes and DNA, provi (mais) ding the basis for their biological activity and adverse effects. In this report, some aspects regarding the biological activity, mechanism of action and toxicity of nitrocompounds are explored, purposing the research of new bioactive derivatives having low toxicity.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

95

O papel das selenoproteínas no câncer/ The role of selenoproteins in cancer

Almondes, Kaluce Gonçalves de Sousa; Leal, Greisse Viero da Silva; Cozzolino, Silvia Maria Franciscato; Philippi, Sonia Tucunduva; Rondó, Patrícia Helen de Carvalho
2010-01-01

Resumo em português Evidências têm demonstrado que distúrbios do metabolismo são comuns em células tumorais, levando ao aumento do estresse oxidativo. A elevação na produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) associada à baixa atividade antioxidante tem sido relacionada a vários tipos de câncer. O selênio, micronutriente antioxidante, pode funcionar como um agente antimutagênico, prevenindo transformações malignas de células normais. Realizou-se um levantamento biblio (mais) gráfico no período 2000 a 2009 mediante consulta à base de dados PubMed (National Library of Medicine´s Medline Biomedical Literature, USA), selecionando-se 39 artigos que avaliaram a relação entre câncer, estresse oxidativo e suplementação com selênio. O efeito protetor desse mineral é especialmente associado à sua presença na glutationa peroxidase e na tioredoxina redutase, enzimas protetoras do DNA e outros componentes celulares contra o dano oxidativo causado pelas EROs. Vários estudos têm demonstrado a expressão reduzida destas enzimas em diversos tipos de câncer, principalmente quando associados a uma baixa ingestão de selênio, que pode acentuar os danos causados. A suplementação de selênio parece ocasionar redução do risco de alguns tipos de câncer diminuindo o estresse oxidativo e o dano ao DNA. No entanto, mais estudos são necessários para esclarecer as doses de selênio adequadas para cada situação (sexo, localização geográfica e tipo de câncer). Resumo em inglês There are evidences that metabolic disorders are common in tumoral cells, leading to increased oxidative stress. The rising in the production of reactive oxygen species associated to low antioxidant activity have been associated to different types of cancer. Selenium, an antioxidant micronutrient can work as an anti-cancer agent preventing malignant modification in healthy cells. A literature review was carried out in the period 2000-2009 in the database PubMed selecting (mais) 39 articles which assessed the relationship between cancer, oxidative stress, and supplementation with selenium. The protective effect of selenium is specially associated to the presence of glutathione peroxidase and of thioredoxin reductase enzymes and with other cell components which protect the tissues against the oxidative damage caused by reactive oxygen species - ROS. Several studies have shown a decrease of these enzymes in many types of cancer, mainly when associated with low selenium consumption, increasing the damage caused by ROS. Selenium supplementation seems to reduce the risk of some types of cancer by stress oxidative reduction and by limiting the damage to DNA. Nevertheless, more studies are necessary to clarify the adequate selenium doses in each situation (gender, geographic localization and type of cancer).

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

96

Cadeia Respiratória Mitocondrial Aspectos Clínicos, Bioquímicos, Enzimáticos e Moleculares Associados ao Défice do Complexo I/ Mitochondrial Respiratory Chain

Ferreira, Mariana; Aguiar, Tatiana; Vilarinho, Laura
2008-01-01

Resumo em português As citopatias mitocondriais constituem um grupo heterogéneo de doenças que se caracterizam por alterações da estrutura mitocondrial e deficiência da fosforilação oxidativa (OXPHOS). A OXPHOS é constituída por cinco complexos proteicos e dois transportadores de electões. A NADHubiquinona oxidoreductase - complexo I, o primeiro e maior dos cinco complexos é o principal ponto de entrada de electrões, provenientes do ciclo de Krebs, no sistema OXPHOS. Os dé (mais) fices do complexo I são um diagnóstico relativamente frequente de citopatia mitocondrial, sendo causados por mutações no DNA mitocondrial ou no DNA nuclear. Devido a este controlo genético duplo, que contribui para a complexidade do sistema OXPHOS, defeitos no complexo I resultam numa variedade de fenótipos clínicos, que estão geralmente associados a disfunções metabólicas graves da infância, incluindo cardiomiopatia progressiva, encefalomiopatia, leucodistrofia ou síndrome de Leigh. Na investigação dos mecanismos subjacentes aos défices do complexo I, são utilizados vários modelos, tais como a Neuropora crassa e os cíbridos, que conjuntamente com o uso de novas ferramentas bioquímicas (Blue Native Polyacrylamide gel electrophoresis), revelam-se de extrema importância para o processo. Perante a complexidade deste sistema enzimático, quer estrutural como na sua manutenção, é difícil efectuar um diagnóstico molecular na rotina laboratorial. Em Portugal, o estudo destes pacientes tem sido restrito à medição da actividade enzimática dos complexos da cadeia respiratória e pesquisa das mutações pontuais mais comuns e rearranjos do mtDNA, até há alguns meses atrás. Como consequência a maioria dos casos de défices do complexo I continuam por esclarecer sob o ponto de vista molecular, tornando-se assim indispensável avançar para uma investigação mais abrangente, possibilitando desta forma um aconselhamento genético adequado e um diagnóstico pré-natal para as famílias de risco. Resumo em inglês Mitochondrial cytopathies are a group of genetically heterogeneous disorders, that is characterized by alterations in the mitochondrial structure and oxidative phosphorylation deficiency (OXPHOS). OXPHOS system consists of five multimeric protein complexes and two electron carriers. NADH-ubiquinone oxidoreductase (complex I), the first and largest of the five complexes, is the major entry point of electrons, from Krebs cycle, of the OXPHOS system. Complex I deficiency is (mais) a frequently diagnosed defect of the mitochondrial OXPHOS system, caused by mutations in either the mitochondrial DNA (mtDNA) or the nuclear DNA. Because of this dual genetic control, which contributes to the complexity of the OXPHOS system, defects on complex I results in a broad spectrum of clinical phenotypes, that are usually associated to severe metabolic disorders of childhood, including progressive cardiomyopathy, encephalomyopathy, leukodystrophy or Leigh syndrome. Research on the mechanisms underlying mitochondrial complex I deficiency has used several models, such as Neurospora crassa and human cell cybrids, and has taken advantage by the routinary use of novel biochemical tools, such as Blue Native Polyacrylamide gel electrophoresis. Given the complexity of this OXPHOS enzyme, both in structure and maintenance, it is difficult to achieve the molecular diagnosis of patients in a routine basis. In Portugal, the study of these patients did not go beyond the biochemical activity measurements of respiratory chain enzymes and screening of most common point mutations and rearrangements of mtDNA, until some months ago. As a consequence, at the molecular level, the majority of the complex I deficiency cases remain unsolved, being essential to move forward to a more wide-ranging study. Moreover, a correct diagnosis will permit adequate genetic counselling and prenatal diagnosis.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

97

Surto de polioencefalomalacia por ingestão excessiva de enxofre na dieta em bezerros no Rio Grande do Sul/ Outbreak of polioencephalomalacia in cattle consuming high sulphur diet in Rio Grande do Sul, Brazil

Cunha, Paulo H.J. da; Bandarra, Paulo M.; Dias, Marcelo M.; Borges, Alexandre S.; Driemeier, David
2010-08-01

Resumo em português Neste trabalho descreve-se surto de polioencefalomalacia em bovinos decorrente da ingestão de dieta com excessiva concentração de enxofre em uma propriedade no Rio Grande do Sul. O lote era composto por 30 bezerros, mantidos em um piquete com azevém (Lolium multiflorum) e suplementados com ração e sal mineral. Seis bezerros morreram e dois deles foram necropsiados; amostras de tecido hepático para dosagem de chumbo e fragmentos do sistema nervoso central para histo (mais) patológico foram colhidos. Um dos bezerros foi examinado antes da morte e sinais neurológicos encefálicos foram constatados. Foi estabelecido o teor de enxofre nos componentes da dieta e água, a produção de sulfeto de hidrogênio ruminal em cinco bovinos do mesmo lote e realizada PCR de um bloco de parafina para detecção de DNA do herpevirus bovino tipo 5. O consumo total de enxofre foi de 0,38% da matéria seca fornecida aos animais e as dosagens de sulfeto de hidrogênio ruminal em animais do mesmo lote variaram de 1.000 a 2.500ppm. Os achados histopatológicos indicaram necrose laminar do córtex cerebral. Não foi detectado chumbo na amostra de tecido hepático e não foi identificado DNA do herpesvirus bovino tipo 5 no encéfalo. O quadro clínico de síndrome cerebrocortical associado aos elevados valores do sulfeto de hidrogênio ruminal, alta ingestão de enxofre na dieta e os achados histopatológicos permitem estabelecer o excesso de enxofre como causador da polioencefalomalacia. Resumo em inglês An outbreak of polioencephalomalacia in cattle caused by ingestion of high sulphur diet, in Rio Grande do Sul, Brazil is described. One group of 30 calves was kept in Italian ryegrass (Lolium multiflorum) pasture and supplemented with concentrate and minerals. Six calves died, necropsy was performed in two of them and liver samples (for lead determination) and fragments of central nervous system were collected. Clinical and neurological examination was performed in one ca (mais) lf and confirmed brain involvement. Sulphur content on dietary components and water, ruminal hydrogen sulfide production in five calves of the same group and PCR from formalin-fixed paraffin-embedded cerebral tissues to detect bovine herpesvirus 5 DNA was perfomed. The total sulphur intake was 0.38% dry matter and the values of ruminal sulfide concentration ranged from 1,000 to 2,500ppm. Lead It was not detected in the liver samples and PCR was negative for bovine herpesvirus 5. The brain lesions were characterized by laminar neuronal necrosis. The clinical signs of cerebrocortical syndrome associated with high ruminal sulfide values, elevated intake of dietary sulphur and histological lesions confirmed that the excess of sulphur caused the polioencephalomacia in these calves.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

98

Glicogenose Tipo I: Disfunção do Complexo Glicose-6-fosfátase/ Type I Glycogenosis

Santos-Antunes, João; Fontes, Rui
2009-06-01

Resumo em português A Glicogenose tipo I é uma doença autossómica recessiva caracterizada por uma deficiência do complexo da glicose-6-fosfátase, um sistema enzimático do retículo endoplasmático responsável pela hidrólise da glicose-6-fosfato e a consequente formação de glicose nos órgãos que o possuem (fígado, rim e intestino). Esta patologia compreende essencialmente dois subtipos: a Glicogenose tipo Ia, caracterizada por um defeito na unidade catalítica do sistema e (mais) a Glicogenose tipo Ib, onde se verifica uma incapacidade do transporte da glicose-6-fosfato para o lúmen do retículo endoplasmático, onde a hidrólise ocorre. As principais alterações da Glicogenose tipo I aparecem normalmente no primeiro ano de vida e consistem num abdómen globoso (devido à hepatomegalia), hipoglicemia, hiperlipidemia, hiperuricemia e hiperlactacidemia, além da neutropenia, disfunção neutrofílica, infecções recorrentes e enterite, estas verificadas no subtipo Ib. A longo prazo podem surgir adenomas hepáticos e hepatocarcinoma, insuficiência renal, gota, osteoporose e disfunção plaquetária. Para fins diagnósticos utiliza-se a análise de mutações, combinada com as alterações clínicas e bioquímicas; para o diagnóstico pré-natal faz-se o estudo do DNA extraído de amniócitos. O tratamento actual visa, essencialmente, evitar as alterações metabólicas assim como atenuar o atraso de crescimento e a deterioração precoce da função renal; consiste, fundamentalmente, no controlo glicémico e pode ser complementado com tratamento farmacológico. Em casos de insucesso terapêutico, poderá ser ponderado o transplante hepático ou renal. Resumo em inglês Type I Glycogenosis is an autossomic recessive disease characterized by a dysfunction of the glucose-6-phospha-tase complex, an endoplasmic reticulum system that is responsible for the glucose-6-phosphate hydrolysis and consequent formation of glucose in liver, kidney, and intestine. This disease has essentially two subtypes: Type Ia Glycogenosis, in which a defect in the system’s catalytic unit is present, and Type Ib Glycogenosis, which is caused by a failure of t (mais) he glucose-6-phosphate transport to the lumen of the endoplasmatic reticulum where the enzymatic reaction occurs. The signs and symptoms of Type I Glycogenosis appear usually in the first year of life and include a prominent abdomen due to hepatomegaly, hypoglycemia, hyperlipidemia, hyperuricemia and hyperlactacidemia, as well as neutropenia, neutrophilic dysfunction, recurrent infections and enteritis in Type Ib Glycogenosis. Long term complications comprise hepatic adenomas and hepatocarcinoma, renal failure, gout, osteoporosis and plaquetary dysfunction. For diagnostic purposes, it is recommended DNA analysis combined with clinical and laboratory findings, and for pre-natal diagnosis amniocytes DNA study is done. Treatment is essentially aimed at avoiding metabolic changes and at reducing growth retardation and early deterioration of renal function; it consists mainly in glycemic control and can be complemented with pharmacological management. When these treatments are unsuccessful, one can consider hepatic or renal transplant.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

99

Conidiobolomicose causada por Conidiobolus lamprauges em ovinos no Estado de Santa Catarina/ Conidiobolomycosis caused by Conidiobolus lamprauges in sheep in the state of Santa Catarina, Brazil

Furlan, Fernando Henrique; Lucioli, Joelma; Veronezi, Luciane Orben; Fonteque, Joandes Henrique; Traverso, Sandra Davi; Nakazato, Luciano; Gava, Aldo
2010-07-01

Resumo em português Descreve-se um surto de conidiobolomicose em ovinos no Estado de Santa Catarina. O surto ocorreu entre os meses de dezembro e março de 2006, no município de Santo Amaro da Imperatriz, região litorânea do Estado. A propriedade possuía 75 ovinos da raça Santa Inês e seis desses animais adoeceram. Clinicamente os animais doentes apresentavam dificuldade respiratória, corrimento nasal seroso a mucossanguinolento e, por vezes exolftalmia. Na necropsia verificou-se uma (mais) massa amarelada na região etmoidal e adjacências que, às vezes, atingia os linfonodos regionais, cérebro, globo ocular e pleura. Microscopicamente a massa caracterizava-se por infiltrado inflamatório granulomatoso com áreas necróticas associadas a hifas largas pouco ramificadas. Através de exame molecular detectou-se DNA de Conidiobolus lamprauges. Os aspectos clínicos, epidemiológicos, macroscópicos, microscópicos e moleculares caracterizam a conidiobolomicose causada por Conidiobolus lamprauges em ovinos. Resumo em inglês An outbreak of conidiobolomycosis affecting sheep in the State of Santa Catarina, Southern Brazil is reported. The disease occurred in six Santa Inês breed sheep from a flock of 75 during the rainy season. Common clinical signs were noisy respiration and dyspnea, serous to mucosanguineous nasal discharge and exophthalmus. At necropsy there was a dense yellow mass in the nasopharyngeal area affecting the ethmoidal region, turbinate bones and occasionally limph nodes, cent (mais) ral nervous system and pleura. Histopathologycally there was multifocal granulomas whith an eosinophilic necrotic reaction containing ribbon type hyphae similar to zygomycetous fungi. At molecular examination Conidiobolus lamprauges DNA was detected. The clinical, epidemiological, macroscopical, microscopical and molecular aspects characterize conidiobolomycosis caused by Conidiobolus lamprauges in sheep.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

100

Chlamydia pneumoniae e Mycoplasma pneumoniae nos nódulos de calcificação da estenose da valva aórtica/ Chlamydia pneumoniae and Mycoplasma pneumoniae in calcified nodes of stenosed aortic valves

Higuchi-dos-Santos, Marilia Harumi; Pierri, Humberto; Higuchi, Maria de Lourdes; Nussbacher, Amit; Palomino, Sueli; Sambiase, Nadia Vieira; Ramires, José Antonio Franchini; Wajngarten, Maurício
2005-06-01

Resumo em português OBJETIVO: Investigar se chlamydia pneumoniae (CP) ou mycoplasma pneumoniae (MP) estão presentes na estenose da valva aórtica (EA). MÉTODOS: Imuno-histoquímica foi utilizada para identificar os antígenos de CP (Ag-CP), a hibridização in situ para identificar o DNA de MP, e microscopia eletrônica para avaliação dos dois agentes, nos grupos: normal - 11 valvas normais de autópsia; aterosclerose - 10 valvas de pacientes com aterosclerose sistêmica de autópsia e s (mais) em EA; e EA - 14 espécimes cirúrgicos provenientes de pacientes com EA analisados em 3 sub-regiões: EA-preservada - regiões mais preservadas na periferia da valva; EA-fibrose - tecido fibrótico peri-calcificação; e EA-calcificação - nódulos calcificados. RESULTADOS: As medianas da fração de área positiva para Ag-CP foram 0,09; 0,30; 0,18; 1,33; e 3,3 nos grupos acima descritos, respectivamente. A densidade de CP foi significativamente maior nos grupos aterosclerose e EA-calcificação em relação ao normal (p Resumo em inglês OBJECTIVE: We investigated whether Chlamydia pneumoniae (CP) and Mycoplasma pneumoniae (MP) are present in aortic valve stenosis (AS). METHODS: Immunohistochemistry was utilized to identify CP antigens, in situ hybridization to identify MP DNA, and electron microscopy was used to evaluate the following three groups: Normal - 11 normal autopsy valves; Atherosclerosis - 10 autopsy valves from patients with systemic atherosclerosis and no AS; and AS - 14 surgical specimens o (mais) f AS analyzed in 3 sub-regions: AS-Preserved - peripheral, preserved regions; AS-Fibrosis - peri-calcified fibrotic tissue; and AS-Calcification - calcified nodules. RESULTS: The positive area fraction of CP antigen median values were 0.09, 0.30, 0.18, 1.33, and 3.3 in groups Normal, Atherosclerosis, AS-Preserved, AS-Fibrosis, and AS-Calcification, respectively. CP density was significantly greater in Atherosclerosis and AS-Calcification than in Normal (P

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

101

Diferenciação de micobactérias por PCR multiplex/ Differentiation of micobacteria by multiplex PCR

Poroca, Diogo da Rocha; Lima, Andrea Santos; Lima, Juliana Falcão de Araújo; Cruz, Heidi Lacerda Alves da; Montenegro, Rosana de Albuquerque; Melo, Fábio Lopes de; Schindler, Haiana Charifker; Montenegro, Lílian Maria Lapa
2009-12-01

Resumo em português O trabalho visou à otimização de um método baseado na reação em cadeia da polimerase multiplex - para diferenciação de micobactérias de interesse para a saúde pública. A PCR Multiplex baseou-se na amplificação simultânea do genehsp65, presente em todo gênero Mycobacterium, do gene dnaJ, presente apenas em Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium e da sequência de inserção IS6110 presente no complexo Mycobacterium tuberculosis, gerando amplicons d (mais) e 165pb, 365pb e 541pb, respectivamente. O limite de detecção foi de 1fg para o alvo hsp65, 100pg para o dnaJ e 0,1fg para o IS6110. A PCR multiplex detectou até 100pg de DNA de Mycobacterium tuberculosis. O sistema demonstrou ser específico e sensível na detecção de Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis, Mycobacterium avium e Mycobacterium smegmatis. Os resultados obtidos utilizando cepas de referência demonstraram que a PCR multiplex pode ser uma ferramenta rápida, sensível e específica na diferenciação de micobactérias. Resumo em inglês This study aimed to optimize a method based on the polymerase chain reaction - multiplex PCR - for differentiation of mycobacteria species of interest for public health. The multiplex PCR was based on simultaneous amplification of the hsp65 gene, which is present in all species of the Mycobacterium genus, the dnaJ gene, which is present only in Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium avium and the IS6110 insertion sequence, which is present in the Mycobacterium tuber (mais) culosis complex, generating amplicons of 165 bp, 365 bp and 541 bp, respectively. The detection limit was 1 fg for the hsp65 target, 100 pg for dnaJ and 0.1 fg for IS6110. The multiplex PCR detected down to 100 pg of DNA of Mycobacterium tuberculosis. The system was shown to be specific and sensitive for detection of Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis, Mycobacterium avium and Mycobacterium smegmatis. The results obtained using reference strains of mycobacteria showed that multiplex PCR may be a fast, sensitive and specific tool for differentiation of mycobacteria.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

102

Envolvimento mucocutâneo no lúpus eritematoso sistêmico e sua associação com auto-anticorpos/ Mucocutaneous involvement in systemic lupus erythematosus and its association with autoantibodies

Machado, Ana Paula Bachtold; Dykyj, Michelle Totti; Vandresen, Nadine; Skare, Thelma L
2008-08-01

Resumo em português FUNDAMENTOS: As manifestações mucocutâneas são comuns em pacientes com lúpus eritematoso sistêmico,podendo assumir espectro bastante variado. OBJETIVOS: Estudar a prevalência de lesões mucocutâneas no lúpus eritematoso sistêmico e verificar suas possíveis associações com auto-anticorpos. MÉTODOS: Submeteram-se 113 pacientes com lúpus eritematoso sistêmico a anamnese dirigida para envolvimento mucocutâneo e exame ectoscópico. Seus prontuários foram exam (mais) inados para dados demográficos e perfil de auto-anticorpos como anti-Ro/SS-A, antiLa/SS-B, antiDNA e anti-Sm. RESULTADOS: Os achados mais prevalentes foram os de fotossensibilidade (83,1%), alopecia (65,4%), eritema em vespertílio(54,3%) e fenômeno de Raynaud (53,9%). Em 46,9% existia algum tipo de queixa mucocutânea no momento do diagnóstico da doença. Encontrou-se associação entre a ocorrência de lúpus cutâneo subagudo e presença do anti-Ro/SSA (p = 0,03), do fenômeno de Raynaud e o anticorpo anti-Sm (p = 0,05) e do eritema em vespertílio e o anticorpo antiDNA (p = 0,03). CONCLUSÃO: Os achados mucocutâneos estão presentes na maioria dos pacientes com lúpus sistêmico, existindo em aproximadamente metade deles no momento do diagnóstico. As lesões mais comuns foram fotossensibilidade, alopecia, eritema em vespertílio e fenômeno de Raynaud. Resumo em inglês BACKGROUND: Mucocutaneous manifestations are very common in systemic lupus erythematosus and vary widely. OBJECTIVES: To study the prevalence of mucocutaneous lesions in systemic lupus erythematosus and to verify their possible association with autoantibodies. METHODS: One hundred and thirteen patients with systemic lupus erythematosus underwent clinical history directed to skin disorders and ectoscopic examination. Their charts were reviewed for demographic data and auto (mais) antibody profile (anti-Ro/SS-A, anti-La/SS-B, anti-DNA and anti-Sm). RESULTS: The most prevalent findings were photosensitivity (83.1%), alopecia (65.4%), butterfly rash (54.3%) and Raynaud’s phenomenon (53.9%). In 46.9% of patients there was mucocutaneous complaint upon diagnosis. We found an association between subacute cutaneous lupus and anti-Ro/SS-A (p=0.03), Raynaud’s phenomenon and anti-Sm(p=0.05), butterfly rash and anti-DNA (p=0.03). CONCLUSION: Mucocutaneous lesions are present in most systemic lupus patients and in almost half of them they are present at diagnosis. The most common findings were photosensitivity, alopecia, butterfly rash and Raynaud’s phenomenon.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

103

cDNA-AFLP na identificação de genes relacionados a qualidade fisiológica/ cDNA-AFLP technique to genes identification interesting to physiological quality

Mertz, Liliane Marcia; Henning, Fernando Augusto; Zimmer, Paulo Dejalma
2009-01-01

Resumo em português Alguns trabalhos têm evidenciado a existência de genótipos de soja contrastantes para qualidade fisiológica de semente. Tais diferenças existem em virtude da presença de sementes com total ou parcial impermeabilidade do tegumento à água, o que as tornam menos susceptíveis aos danos mecânicos, as adversidades climáticas e a deterioração por umidade. A característica de tegumento semi-permeável pode ser incorporada às cultivares de alta produção por meio d (mais) os programas de melhoramento. No entanto, há necessidade de caracterizar os genes ou as regiões genômicas envolvidas com esta característica. Nesse contexto, ferramentas da biologia molecular, como a técnica de cDNA-AFLP, podem auxiliar a identificação de genes relacionados a qualidade fisiológica de sementes. O objetivo desse estudo foi verificar a eficácia da técnica de cDNA-AFLP, na obtenção de fragmentos de genes diferencialmente expressos entre tegumentos de sementes de soja com permeabilidade contrastante. Sementes provenientes dos genótipos CD-202 (tegumento amarelo, permeável e susceptível a deterioração) e TP (tegumento preto, semi-permeável e resistente a deterioração) foram cultivadas em casa-de-vegetação, sob condições homogêneas. Realizou-se a coleta das sementes em diferentes estágios de desenvolvimento (25, 30, 35, 40 e 55 dias após a antese). Procedeu-se à extração do RNA total utilizando-se três métodos, sendo o reagente Pure Link Plant RNA o mais eficiente. Para obtenção do cDNA dupla fita utilizou-se o kit Double Stranded cDNA Synthesis. A partir do cDNA obtido, aplicou-se a técnica de AFLP testando-se um total de 64 combinações de primers. Foram obtidos 47 fragmentos de cDNA diferencialmente expressos entre os tegumentos de sementes dos dois genótipos, os quais poderão ter suas funções reveladas pelo sequenciamento e análise in sílico. De acordo com os resultados obtidos, a técnica de cDNA-AFLP demonstra ser uma alternativa promissora para estudos que visem à identificação de genes relacionados a qualidade de sementes. Resumo em inglês Some studies have reported the existence of contrasting soybean genotypes for seed physiological quality. Differences such as presence of seeds with total or partial impermeability for water absorption through the seedcoat make them less susceptible to mechanical damage, adverse weather and deterioration. The semi-permeable seed coat trait can be used in soybean crop breeding programs to be incorporated in genotypes with high production. However, is necessary to character (mais) ize genes involved with the trait. Molecular biology tools, such as the cDNA-AFLP technique, can be used to identify genes involved in seed physiological quality. The objective of this study was to evaluate the efficacy of the cDNA-AFLP technique to obtain gene fragments differently expressed among soybean seedcoats with contrasting permeability. Seeds from two genotypes, CD-202 (susceptible to deterioration and permeable yellow coat) and TP (resistant to deterioration and semi-permeable black coat) were produced in greenhouse under homogeneous conditions. Seeds were harvested at different times (25, 30, 35, 40 e 55 days after anthesis). The total RNA was extracted using Pure Link Plant RNA reagent. The Double Stranded cDNA Synthesis Kit was used to obtain cDNA double strand. The AFLP technique was applied and 64 primer combinations were tested. This tool permitted the identification of 47 gene fragments differently expressed among coats from the two genotypes and was shown to be an efficient alternative to studies related to the identification of genes involved in seed quality.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

104

Uso de PCR e sequenciamento do rDNA 16S para identificação de bactérias do gênero Staphylococcus isoladas de mastite bovina/ Identification of Staphylococcus strains isolated from bovine mastitis by PCR and 16S rDNA sequencing

Lange, Carla C.; Brito, Maria A.V.P.; Brito, José R.F.; Arcuri, Edna F.; Souza, Guilherme N.; Machado, Marco A.; Domingues, Robert; Salimena, Alessandra P.S.
2011-01-01

Resumo em português O objetivo deste trabalho foi identificar espécies de Staphylococcus (n=100) isoladas de mastite em rebanhos bovinos do Estado de Minas Gerais. Para esta finalidade foram utilizadas reações de PCR empregando oligonucleotídeos iniciadores descritos anteriormente para amplificar genes específicos de S. aureus (femA), S. intermedius (rDNA 16S) e S. hyicus (rDNA 16S-23S) e o sequenciamento do rDNA 16S. De acordo com as reações de PCR, 83 isolados foram identificados co (mais) mo S. aureus, 13 isolados como S. intermedius, dois como S. hyicus e dois isolados não foram identificados. Foram submetidos ao sequenciamento do rDNA 16S seis isolados identificados como S. aureus e os 17 restantes. Os seis isolados identificados como S. aureus confirmaram essa identificação. Dos outros 17 isolados, 13 foram identificados como S. chromogenes e quatro como S. hyicus, com similaridade igual ou superior a 99%. Baseando-se nos resultados da reação de PCR do gene femA e do sequenciamento do rDNA 16S, foram identificados 83 S. aureus, 13 S. chromogenes e quatro S. hyicus. Neste estudo os oligonucleotídeos iniciadores empregados na reação de PCR para S. intermedius não foram específicos, pois amplificaram também S. chromogenes; e os empregados na reação de PCR para S. hyicus não foram sensíveis, pois falharam na identificação de dois isolados de S. hyicus. A identificação definitiva das duas últimas espécies somente foi possível pelo sequenciamento do rDNA 16S. Resumo em inglês The objective of this study was to identify the species of 100 isolates of Staphylococcus from mastitis in dairy cows from herds located in the state of Minas Gerais, Brazil. PCR reactions were carried out using specific primers described previously for S. aureus (femA gene), S. intermedius (16S rDNA) and S. hyicus (16S-23S rDNA spacer region). In addition, products of amplification of variable regions of the 16S rDNA gene of the strains were sequenced. According to the r (mais) esults of the PCR, 83 strains were identified as S. aureus, 13 as S. intermedius, two as S. hyicus and two isolates were not identified. The sequencing of 16S rDNA was applied to 23 strains identified by PCR amplifications: six S. aureus and the strains identified as S. intermedius (n=13), S. hyicus (n=2) or not identified (n=2). The sequencing of 16S rDNA confirmed the six strains as S. aureus. The others 17 strains were identified as S. chromogenes (13 isolates) and S. hyicus (four isolates). Each sample was related to a specie according to the smallest E-value and highest similarity (> 99%). The identification of S. hyicus and S. chromogenes was accomplished only by 16S rDNA sequencing.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

105

TRANSTHYRETIN GENE ANALYSIS IN EUROPEAN PATIENTS WITH SUSPECTED FAMILIAL AMYLOID POLYNEUROPATHY

REILLY, MM; ADAMS, D; BOOTH, DR; DAVIS, MB; SAID, G; LAUBRIATBIANCHIN, M; PEPYS, MB; THOMAS, PK; HARDING, AE

We investigated 99 patients from 64 European families (51 French, II British, one Italian and one Spanish) with suspected familial amyloid polyneuropathy (FAP) for transthyretin (TTR) gene mutations. Thirty-nine families were found to have point mutations causing the following amino acid substitutio...

DRIVER (Portuguese)

106

Populational analysis of Saccharomyces cerevisiae strains from different appellations of origin and grape varieties by microsatellite analysis

Pereira, Leonor; Machado, Sofia; Ramos, P.; Alemão, F.; Gomes, P.; Sousa, S.; Santos, Manuel; Duarte, F. L.; Casal, Margarida

Comunicação oral, apresentada por Dorit Schuller The objective of the present study was to evaluate populational relationships among Saccharomyces cerevisiae strains isolated from some of the Portuguese most important grapevine varieties in different appellations of origin, using polymorphic microsat...

DRIVER (Portuguese)

107

Panorama ecólogico de cepas de Saccharomyces cerevisiae en um viñedo dela región Vinho Verde en Portugal

Schuller, Dorit; Alves, Hugo; Dequin, Sylvie; Casal, Margarida

ENOSAFE (Nº 762, Programa AGRO, medida 8). Portuguese Institute for International Scientific and Technological Cooperation (ICCTI)/French Embassy in Lisbon - grant nº 657 C2.

DRIVER (Portuguese)

109

Estudo longitudinal do anticorpo antilipoproteína lipase e sua relação com atividade de doença nos indivíduos com lúpus eritematoso sistêmico sem anticorpos anti-dsDNA/ Longitudinal fluctuation of anti-lipoprotein lipase antibody is related with disease activity in systemic lupus erythematosus patients without anti-dsDNA antibodies

Carvalho, Jozélio Freire de; Viana, Vilma Santos Trindade; Borba Neto, Eduardo Ferreira; Leon, Elaine Pires; Bueno, Cleonice; Bonfá, Eloísa
2009-02-01

Resumo em português INTRODUÇÃO: O Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) se caracteriza por períodos de exacerbação e remissão clínica que frequentemente são acompanhados por alterações nos níveis séricos de anticorpos específicos, como o anti-dsDNA, que está presente em 40% dos casos, associado principalmente à atividade renal. Recentemente houve a descrição de duas subpopulações de anticorpos antilipoproteína lipase (anti-LPL) no LES: uma com e a outra sem atividade anti-d (mais) sDNA. A possível relação desse último grupo de anticorpos com a atividade inflamatória de doença ainda não foi analisada no LES. OBJETIVOS: Avaliar longitudinalmente a associação dos níveis séricos dos anticorpos anti-LPL com atividade do LES em pacientes com anti-dsDNA persistentemente negativo. PACIENTES E MÉTODOS: Cinco pacientes com LES com anti-dsDNA persistentemente negativo mensurado por ELISA e por imunofluorescência indireta em crithidia luciliae e altos títulos de anti-LPL por ELISA (> 5 desvios-padrão (DP) da média de 20 controles normais) foram selecionados e acompanhados longitudinalmente durante um período mínimo de dois anos. RESULTADOS: Caso 1: Homem, 24 anos com LES desde 2001 apresentou hemorragia alveolar, proteinúria, hipertensão arterial sistêmica, eritema malar, aftas, artrite, FAN+, com SLEDAI (systemic lupus erythematosus disease activity index) = 16 e anti-LPL = 144UA. Tratado com pulso de metilprednisolona e prednisona com melhora clínica e SLEDAI = 0 e redução do anti-LPL (109UA). Nova atividade com acometimento renal em abril de 2002, SLEDAI = 10 e aumento de anti-LPL (150UA). Iniciada pulsoterapia de ciclofosfamida e metilprednisolona com boa resposta, SLEDAI = 0 e diminuição de anti-LPL (77UA) até a sua total negativação acompanhando a remissão do quadro no ano de 2003. Caso 2: Mulher, 32 anos, com LES desde 1997. Em setembro de 2001 iniciou vasculite cutânea, febre e rash, SLEDAI = 10, anti-LPL = 80UA. Em janeiro de 2002, teve atividade renal e HAS, SLEDAI = 8 e anti-LPL = 25UA, mas com a introdução de CE e ciclofosfamida evoluiu com melhora importante. Em 2003, assintomática, apresentava SLEDAI = 2 e anti-LPL = 12UA. Caso 3: Homem, 39 anos, com LES desde 1997. Estável em uso de cloroquina, sem atividade durante 3 anos, SLEDAI = 0 em todas as ocasiões e sem variação dos títulos de anti-LPL no período do estudo: 85UA (2001),100UA (2002) e 86UA (2003). Caso 4: Mulher, 58 anos com LES desde 1996. Remissão do LES desde agosto de 2001 e com SLEDAI = 0 no período do estudo. Títulos de anti-LPL sem flutuações significativas: 71UA (2001), 42UA (2002) e 61UA (2003). Caso 5: Mulher, 55 anos com LES desde 1989. Estável desde 2000 em uso de cloroquina, SLEDAI = 0, e títulos de anti-LPL também sem variações: 71UA (1999), 92UA (2001), 71UA (2002) e 90UA (2003). CONCLUSÃO: A avaliação longitudinal dos pacientes selecionados mostrou-se estar associada à flutuação dos títulos de anti-LPL com o SLEDAI, sugerindo ser essa variação um novo marcador de atividade do LES, na ausência de anticorpos anti-dsDNA. Resumo em inglês INTRODUCTION: Systemic lupus erythematosus (SLE) is characterized by periods of clinical flares and remission that are followed by alterations of sera specific autoantibodies such as anti-dsDNA, present in 40% of the cases and strongly associated with renal involvement. Recently, there was a description of two subpopulations of anti-lipoprotein lipase antibodies (anti-LPL) in SLE: with and without anti-dsDNA activity. A possible relationship between these antibodies with (mais) inflammatory activity of SLE was not analyzed. OBJECTIVES: To evaluate longitudinally the association between anti-LPL with lupus activity in patients persistently negatives for anti-dsDNA antibodies. PATIENTS AND METHODS: Five SLE patients with persistently negative anti-dsDNA measured by ELISA and indirect immunofluorescence using crithidia luciliae and high titers of anti-LPL by ELISA (> 5 SD) were selected and followed for at least 2 years. RESULTS: Case 1: A 24-year-old male with SLE since 2001, presented with alveolar hemorrhage, proteinuria, systemic hypertension, malar rash, oral ulcers, polyarthritis, positive ANA, SLEDAI=16 and anti-LPL=144U. He was treated with intravenous (IV) methylprednisolone followed by prednisone and had an excellent response. SLEDAI=0, anti-LPL decreased to 109U. New renal flare in April 2002, SLEDAI=10 and a new increment of anti-LPL (150U). IV Cyclophosphamide and methylprednisolone were started and he achieved remission, SLEDAI=0 and a decrease of anti-LPL (77U) until become negative in 2003. Case 2: A 32-year-old female had SLE since 1997. In September 2001 began cutaneous vasculitis, fever and rash, SLEDAI=10, anti-LPL=80U. In January 2002, she had renal involvement and systemic hypertension, SLEDAI=8 and anti-LPL= 25U. She received corticosteroid and cyclophosphamide and improved. In 2003, she was asymptomatic, SLEDAI=2 and anti-LPL=12U. Case 3: A 39-year-old male has SLE since 1997. He was stable, under chloroquine use, without disease activity for 3 years, SLEDAI=0 in all period studied and no fluctuation of anti-LPL titers: 85U (2001),100U (2002) e 86U (2003). Case 4: A 58-year-old female had SLE since 1996. She was in remission since August 2001 with a SLEDAI=0 during all this study. Anti-LPL titers did not significantly change: 71U (2001), 42U (2002) e 61U (2003). Case 5: A 55-year-old female had SLE since 1989. She was stable since 2000 using chloroquine, SLEDAI=0, and anti-LPL titers without variations: 71U (1999), 92U (2001), 71U (2002) e 90U (2003). CONCLUSION: The longitudinal evaluation of the selected patients showed a positive correlation between the fluctuations of the titers of anti-LPL with the SLEDAI score. These findings suggest that this variation may be a new marker for lupus activity in patients without anti-dsDNA antibodies.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

110

Caracterização de genes diferencialmente expressos na interação entre maçã 'Fuji' e Botryosphaeria dothidea/ Characterization of differently expressed genes during the interaction between 'Fuji' apples and Botryosphaeria dothidea

Corrent, Adriana Regina; Schwarz, Ligia Loss; Oster, Andréia Hansen; Moraes, Marcelo Gravina de; Bender, Renar João
2009-03-01

Resumo em português O objetivo deste estudo foi investigar a interação entre o fungo Botryosphaeria dothidea e maçãs cv. Fuji por meio da técnica de Differential Display RT-PCR. O cDNA de frutos infectados e não infectados pelo fungo foi amplificado com uma combinação de 15 oligonucleotídeos iniciadores. Foram isolados 400 fragmentos de cDNA diferencialmente expressos, dos quais 120 foram sequenciados e comparados com sequências disponíveis no GenBank, por meio do programa BLASTX. (mais) As sequências obtidas foram similares à metalotioninas, profilina alergênica, proteína de resistência e fosfatase. Resumo em inglês The aim of this study was to investigate the interaction between the Botryosphaeria dothidea fungi and 'Fuji' apples using the Differential Display RT-PCR technique. The cDNA of infected and non infected fruits by the fungus was amplified using a combination of 15 primers. Four hundred fragments of differentially expressed cDNA were isolated, and 120 of them were sequenced and compared with available sequences at GenBank database, using BLASTX software. Obtained sequences were similar to methalothionines, an allergenic profiline, a resistance linked protein, and a phosphatase.

Scientific Electronic Library Online (Portuguese)

111

Biologising paternity, moralising maternity : the construction of parenthood in the determination of paternity through the courts in Portugal

Machado, Helena

This article explores how the Portuguese legal system’s efforts to determine paternity of children born outside legal marriage, automatically initiated by the Registry Office when a birth registration does not indicate the father, reveal cultural models which reinforce the naturalisation of the diff...

DRIVER (Portuguese)

112

A whole genome screen for association with multiple sclerosis in portuguese patients

Santos, M.; Pinto-Basto, J.; Rio, M. E.; Valença, Angela; Sá, Alfredo; Dinis, J.; Figueiredo, J.; Bigotte de Almeida, Luís

SERONO (Portugal). British Council/ICCTI. Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT) - grant FRH/BD/9111/2002. Wellcome Trust, Multiple Sclerosis Societies of the United States and Great Britain, Multiple Sclerosis International Federation - GAMES project - grant 057097. Multiple sclerosis (MS) is com...

DRIVER (Portuguese)

113

A portuguese perspective

Machado, Helena; Silva, Susana

Commentary on the Nuffield Report from a Portuguese Perspective (Nuffield Council on Bioethics (2007). The forensic use of bioinformation: ethical issues. Cambridge (18 September) (retrieved from http://www.nuffieldbioethics.org/fileLibrary/pdf/The_forensic_use_of_bioinformation_-_ethical_issues.p...

DRIVER (Portuguese)