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Propiedades químicas y funcionales del almidón nativo y modificado de ñame (dioscorea alata)/ Chemical and functional properties of native and modified yam (dioscorea alata) starch/ Propriedades químicas e funcionais do amido nativo e modificado de inhame (dioscorea alata)

Pacheco de Delahaye, Emperatriz; Techeira, Nora
2009-04-01

Resumen en portugués Modificou-se amido de inhame (Dioscorea alata) mediante tratamentos alcalino e alcoólico-alcalino e se avaliou a composção química e algumas de suas propriedades funcionais, com a finalidade de sugerir sua posível utilização na elaboração de produtos alimentícios. Os resultados obtidos indicaram que a capacidade de absorção de agua (inchamento) e a solubilidade se incrementaram com as modificações realizadas, ao tempo que a estabilidade ao congelamento-degel (mas) o melhorou com cada um dos tratamentos. Os amidos modificados experimentaram uma menor tendência à retrogradação, medida como porcentagem de transmitância, e a viscosidade de cada uma das suspensões de amidos de inhame em estudo se manteve estável durante o período de aquecimento constante ao que foram submetidas para a elaboração das curvas amilográficas. Os amidos de inhame modificados poderiam ter aplicação como espessantes para sopas e estabilizantes en sobremesas congeladas, especialmente os amidos granulares solúveis em água fria (AGSAF), por apresentar uma maior capacidade de solubilizar-se em água à temperatura ambiente. Resumen en español Se modificó almidón de ñame (Dioscorea alata) mediante tratamientos alcalino y alcohólico-alcalino y se evaluó la composición química y algunas de sus propiedades funcionales, con el fin de sugerir su posible utilización en la elaboración de productos alimenticios. Los resultados obtenidos indicaron que la capacidad de absorción de agua (hinchamiento) y la solubilidad se incrementaron con las modificaciones realizadas, al tiempo que la estabilidad al congelamien (mas) to-deshielo mejoró con cada uno de los tratamientos. Los almidones modificados experimentaron una menor tendencia a la retrogradación, medida como porcentaje de transmitancia, y la viscosidad de cada una de las suspensiones de almidones de ñame en estudio se mantuvo estable durante el período de calentamiento constante al cual fueron sometidas para la elaboración de las curvas amilográficas. Los almidones de ñame modificados podrían tener aplicación como espesantes para sopas y estabilizantes en postres congelados, especialmente los almidones granulares solubles en agua fría (AGSAF), por presentar una mayor capacidad de solubilizarse en agua a temperatura ambiente. Resumen en inglés Yam (Dioscorea alata) starch was modified through alkaline and alcoholic-alkaline treatments, with the objective to assay their chemical composition and some of their functional properties, with the aim of studying its possible use as an ingredient of food products manufacture. The results obtained indicate that water absorption capacity (swelling) and solubility were increased with the modification made, while the freeze-thawing stability improved with each one of the tr (mas) eatments. The modified starch had a lower trend to setback, measured as transmittance percentage, and the viscosity of each one of the studies of yam starch suspensions kept stable during the constant warming period to which they were submitted to obtain the amylographic curves. The modified yam starch could be applied as a thickener for soups and a stabilizer in frozen desserts, specially the cold water soluble granular starch (AGSAF), due to a greater capacity to dissolve in water at room temperature.

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Vitrificación como técnica de crioconservación de embriones bovinos/ Vitrification as a technique of bovine embryo cryopreservation

CELESTINOS, M; GATICA, R
2002-01-01

Resumen en español Desde hace más de 40 años se han conservado células y embriones de mamíferos, a temperatura ambiente, en refrigeración y por los diferentes métodos de crioconservación. Estas técnicas han ido evolucionando en procedimientos de congelación más simples, prácticos y menos costosos, uno es la vitrificación de embriones, proceso de solidificación, en el cual se utiliza una solución altamente concentrada que no cristaliza durante el congelamiento, en tanto que su (mas) viscosidad aumenta con el descenso de temperatura hasta la formación de un estado sólido amorfo semejante al vidrio. Por esto, la exposición y las tasas de congelamiento deben ser lo suficientemente rápidas para evitar la toxicidad y la formación de cristales intracelulares que puedan dañar al embrión. Para que los embriones soporten el choque osmótico, deben equilibrarse con una solución crioprotectora de menor concentración antes de exponerse a la solución vitrificante para su posterior congelación. Se ha publicado gran cantidad de técnicas de vitrificación para embriones, utilizando diferentes crioprotectores, concentración, volumen, método de adición, temperaturas, tiempo de exposición, tasa de congelación, descongelación y dilución, para mantener la función, estructura normal y viabilidad del embrión. Estas técnicas también se han experimentado en embriones producidos in vitro como in vivo y en diferentes etapas de desarrollo. El presente trabajo pretende dar una visión general de los métodos de conservación y en particular de la vitrificación de embriones bovinos, así como mencionar los últimos avances y procedimientos para tener una buena base bibliográfica a partir de la cual emprender las diferentes investigaciones Resumen en inglés Over the last 40 years cells and embryos of mammals have been preserved, at room temperature, refrigeration temperature and by different cryoconservation methods. These techniques have evolved into more simple, practical and less expensive freezing procedures. One of these is vitrification, a process of solidification that uses a highly concentrated solution which does not crystallize during freezing; its viscosity increases with the descent of the temperature until the f (mas) ormation of an amorphous solid state similar to glass. For this reason, exposure and freezing rates should be quick enough to avoid toxicity and the formation of intracellular ice, which can cause embryonic damage. In order for the embryos to support the osmotic shock, they should be equilibriated with a less concentrated crioprotectant solution before being exposed to the vitrificant solution for their later freezing. Several vitrification procedures have been published about embryo preservation, using different crioprotectants, concentration, volume, addition method, temperatures, exposition time, freezing rate, thawing procedure and dilution, to maintain the function, normal structure and viability of the embryo. These techniques have also been experimented with in vitro and in vivo produced embryos, at different developmental stages. This paper aims to review the present bovine embryo cryopreservation methods, particulary vitrification, as well as to mention the latest procedures and progress so that new researchers may have an updated literature review to start their works

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Vitrificacion de blastocitos bovinos producidos in vitro con el método Open Pulled Straw (OPS): Primer reporte*/ Succesfull vitrification with the Open Pulled Straw method (OPS) of bovine blastocysts produced in vitro: Preliminary results

Silva, M. E.; Berland, M. A
2004-01-01

Resumen en español El objetivo de este trabajo fue presentar los primeros resultados exitosos de vitrificación de blastocistos bovinos producidos in vitro utilizando la técnica del Open Pulled Straw (OPS) en nuestro país. Para la confección de las OPS, pajuelas plásticas de 0.25 ml fueron estiradas utilizando calor. Los 93 blastocistos seleccionados para la vitrificación fueron depositados individual y secuencialmente en las soluciones de vitrificación 1 y 2 consistentes en TCM199 (2 (mas) 0% SFB) adicionado con Etilénglicol y Dimetilsulfoxido (DMSO), por períodos de un minuto y 20 segundos respectivamente. Durante este último período el embrión fue cargado con una micropipeta, en un volumen de 2 µl, depositándose sobre una placa petri desde la cual fue cargado por capilaridad en la pajuela estirada, para luego depositarla directamente en el nitrógeno líquido. El 89% de los blastocistos congelados fueron recuperados post descongelación, de los cuales 54% se encontraban re-expandidos o eclosionados a las 24 horas de cultivo. Al evaluar los embriones a las 72 horas post descongelación se observó un 29% de embriones eclosionados. Aunque levemente inferiores a resultados reportados en la literatura, los nuestros indican la factibilidad de vitrificar exitosamente blastocistos bovinos producidos in vitro utilizando el método de Open Pulled Straw Resumen en inglés The purpose of this work is to present preliminary produced in vitro using the Open Pulled Straw (OPS) method. Open Pulled Straws were made by pulling 0.25 ml inner and outer diameter were reduced to half of their original and deposited individually in vitrification solutions 1 and dimethyl - sulfoxide (DMSO), for 1 minute and 20 µl containing the embryo pulled into the straw by capillarity into liquid Nitrogen. Eighty three blastocysts were recovered after thawing. Fift (mas) hy four percent of these were re- expanded or hatched after 24 hours of in vitro culture. After 72 hours of in vitro culture 29% of the blastocysts matured. Even though our results are slightly lower to those reported in the literature, they show that it is possible to successfully vitrify bovine blastocysts produced in vitro using the OPS method

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Viabilidad de espermatozoides criopreservados de macha Mesodesma donacium (Mollusca, Bivalvia)/ Viability of cryopreserved spermatozoa of the surf clam Mesodesma donacium (Mollusca, Bivalvia)

Dupré, Enrique; Joo, Roberto
2006-11-01

Resumen en español Se evaluó la viabilidad de los espermatozoides de macha Mesodesma donacium sometidos a diferentes tratamientos de criopreservación mediante su motilidad y éxito de la fecundación con espermatozoides descongelados. En un arreglo factorial se evaluaron 42 protocolos, combinando tres tipos de crioprotectores (DMSO, Metanol y Pro-pilén-glicol), tres concentraciones (0,5 M, 1,0 M y 1,5 M), cuatro tasas de congelación (-5, -10, -15 y -206ºC·min-1) y dos tasas de descong (mas) elación (lenta: 72ºC·min-1 y rápida: 312ºC·min-1). Los mejores resultados de motilidad espermática (16,7%) se obtuvieron con DMSO 1,0 M como crioprotectante, a una tasa de congelación de -15ºC·min-1y descongelación lenta. Mientras que los mejores resultados de fecundación (84,4%) con espermatozoides congelados-descongelados se obtuvieron con DMSO 1,5 M a una tasa de congelación de -15ºC·min-1 y descongelación rápida Resumen en inglés The viability of the surf clam spermatozoa was evaluated using the percentage of fertilization obtained with cryopreserved spermatozoa and different protocols. In total, 42 protocols combined three types of cryoprotectants (DMSO, Methanol, and Prophylen-glycol) at three different concentrations (0.5 M, 1.0 M, and 1.5 M), four freezing rates (-5, -10, -15, and -206ºC·min-1), and two thawing rates (slow: 72ºC·min-1 and fast: 312ºC·min-1). The best sperm motility was o (mas) btained with DMSO frozen at -15ºC·min-1 and with a slow thawing rate. The best fertilization percentages were obtained with DMSO frozen at -15ºC·min-1 but with a fast thawing rate

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Variabilidad molecular de aislamientos de Candida spp. por la técnica de polimorfismos de ADN amplificados aleatoriamente (Random Amplified Polymorphic DNA, RAPD) en mujeres de Armenia, Colombia/ Molecular variation of Candida spp. isolates using Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD), from women in Armenia, Colombia

Ruiz, Alba Cecilia; Calderón, Diana Milena; Gómez, Jorge Enrique
2009-03-01

Resumen en español Objetivos. Caracterizar las especies de Candida que colonizan el conducto vaginal y su relación con sintomatología en las pacientes a quienes se les hace citología vaginal en Armenia (Quindío) y establecer el mejor cebador para la técnica de amplificación aleatoria de ADN polimórfico (Random Amplified Polymorphic DNA, RAPD). Materiales y métodos. Se recolectaron 226 muestras de flujo vaginal de mujeres que asistían a citología rutinaria preventiva y se les reali (mas) zó cultivo en medio de Sabouraud, prueba de tubo germinal y batería de asimilación de carbohidratos. Se probaron tres cebadores para la amplificación aleatoria de ADN polimórfico. Resultados. Se encontró una prevalencia de cultivos positivos en Sabouraud de 31,8% (77 de 226 muestras) con un predominio de Candida albicans, que representó el 71% de las especies cultivadas (55 de 77 cultivos). La frecuencia de síntomas de vaginitis fue mayor en mujeres con cultivo positivo para levadura (93%) que en las que tuvieron cultivo negativo (37%). El mejor método de extracción de ADN fue congelamiento y descongelamiento, y lisis con liticasa. La técnica de amplificación aleatoria de ADN polimórfico fue aplicada a 47 aislamientos, y entre tres cebadores utilizados, el OPA9 fue el que permitió obtener mayores polimorfismos. Los análisis por dendrogramas mostraron 6 nodos predominantes, entre los cuales dos nodos incluyeron sólo aislamientos que producían síntomas (nodo IV y nodo V). En el nodo V se encontró que todos los aislamientos de C. albicans eran del mismo centro de salud. Conclusiones. En conclusión, C. albicans predomina y produce síntomas en mujeres de Armenia y el método de amplificación aleatoria de ADN polimórfico con el cebador OPA9, permitió obtener polimorfismos suficientes para conformar agrupamientos de las cepas de Candida. Resumen en inglés Objectives: To characterize the Candida species in samples of routine vaginal cytology in Armenia (Colombia) and their relationship with symptoms. Also, to select the adequate primer for a random amplified polymorphismc DNA analysis (RAPD) applied to the Candida species to determine the level of genetic relation. Materials and methods: A total of 226 samples of vaginal secretions were obtained in patients that assist for routine preventive vaginal cytology. The samples we (mas) re cultured in Sabouraud and then germ tube assay and carbohydrates assimilation test were performed. Three primers were assayed to determine the best for a reproducible RAPD technique. Results: The prevalence of Sabouraud positive cultures was 31.8% (77 of 226 samples) and Candida albicans was the predominant species, representing 71% (55 de 77 samples). Vaginitis symptoms were more frequent in women with positive Sabouraud cultures (93%) vs. women with negative Sabouraud cultures (37%). The best extraction method for DNA extraction was freezing and thawing cycles followed by enzymatic lyses with lyticase. In 47 isolates of Candida species, the best primer that resulted in significant polymorphisms was the OPA 9. A 95% similarity coefficient was obtained 6 clusters. Clusters IV and V only included C. albicans isolates producing symptoms. In cluster V all the isolates were from the same consultation center. Conclusions: C. albicans was the predominant yeast in Armenia and was related with a greater frequency of symptoms. The RAPD technique with OPA9 primer in Armenia, unravel genetic relations of C. albicans isolates that could be used for epidemiological studies.

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Stabilization of mercury by sulphur concrete: Study of the durability of the materials obtained

López Gómez, Félix Antonio; Pérez, C.; Alguacil, Francisco José; López Delgado, Aurora; Goñi Elizalde, Sara; Guerrero Bustos, Ana María
2009-11-01

Digital.CSIC (Spain)

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Morteros de reparación basados en cal. Ensayos de envejecimiento acelerado

Martínez Ramírez, S.; Puertas, F.; Blanco-Valera, Mª.T.
1995-05-01

Digital.CSIC (Spain)

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Mechanical and durable behaviour of alkaline cement mortars reinforced with polypropylene fibres

Fernández-Jiménez, Ana; Puertas, F.; Amat Rueda, Tomas; Vázquez Moreno, Tomás
2003-12-01

Digital.CSIC (Spain)

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Las calizas microcristalinas como material de construcción: el caso del Gris Pulpis

García del Cura, M.ª Ángeles; Benavente, David; Bernabéu, A.; Fort González, Rafael; La Iglesia, A.; Ordóñez, S.
2005-03-30

Digital.CSIC (Spain)

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Identifying erosive periods by using RUSLE factors in mountain fields of the Central Spanish Pyrenees

López-Vicente, Manuel; Navas Izquierdo, Ana; Machín Gayarre, Javier
2008-03-06

Digital.CSIC (Spain)

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Gene expression analysis of cold and freeze stress in baker's yeast

Rodríguez Vargas, Sonia; Estruch, Francisco; Rández Gil, Francisca
2002-06-01

Digital.CSIC (Spain)

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Evaluación de los cebadores TS3 e ITS4 para la detección de infecciones por Candida spp. en muestras de flujo vaginal y humor acuoso/ Evaluation of ITS3 and ITS4 primers for detection of Candida spp. Candida spp. infections from vaginal samples and aqueous humor

Ramirez, Juan Felipe; de la Torre, Alejandra
2008-06-01

Resumen en español Antecedentes. Los métodos convencionales para a identificación de levaduras del género Candida requieren mucho tiempo, necesitan cantidad importante de la muestra y, en muchos casos, es necesario realizar cultivo. Objetivos. Evaluar un par de cebadores para la identificación de levaduras del género Candida y demostrar su potencial aplicación para el diagnóstico de infecciones intraoculares. Materiales y métodos. Se utilizaron 17 cepas de referencia, 29 aislamiento (mas) s clínicos de flujo vaginal, 7 muestras de humor acuoso y una de humor vítreo. Evaluamos tres métodos para el rompimiento de la pared celular: congelación descongelación, sonicación, y la enzima liticasa. Para la purificación del ácido nucleico, se utilizó en los tres casos el estuche comercial Wizard Genomics; en la reacción de PCR, el estuche comercial Go Taq Green Master Mix y los iniciadores ITS3 e ITS4 a una concentración de 0,5 µM. Resultados. De los tres métodos el que mejor resultados ofreció fue el uso de enzima liticasa más el estuche comercial. Con los iniciadores ITS3 e ITS4 fue posible identificar las levaduras únicamente a nivel de género y no se presentó reacción cruzada con otros microorganismos comúnmente encontrados en diferentes muestras de tejido humano. La sensibilidad fue de 100 fg. Se lograron identificar por PCR todos los aislamientos a partir de flujo vaginal y de una muestra de humor acuso. Para las demás muestras de humor acuoso el diagnóstico fue para otros agentes causales, entre ellos, Toxoplasma sp. Conclusión. Consideramos que ésta es una metodología adecuada, la cual permite identificar levaduras del género Candida con gran sensibilidad y reproducibilidad. Resumen en inglés Background. Conventional methods for Candida identification are time consuming, require high amounts of the sample and in several cases the culture is mandatory. Aims. To evaluate two primers for the identification of Candida and to demonstrate their application for intraocular infections. Materials and methods. 17 Candida reference strains, 29 vaginal samples, 7 samples of aqueous humor and one of vitreous humor were studied. Three methods to lyse the Candida wall were a (mas) nalyzed: freezing-thawing, sonication and the use of lyticase. For nucleic acid purification the Wizard Genomics kit was used; in the PCR the commercial kit Go Taq Green Master Mix and the primers ITS3 and ITS4 were used. Results. The best method for lysis was the enzymatic lysis with lyticase. The primers ITS3 and ITS4 identified all the Candida strains and there were no cross-reaction with other microorganisms. The sensitivity of the PCR was 100 fg. All the samples of vaginal flux and Candida strains were identified and only one sample of aqueous humor was positive for the genus Candida. In the other samples of aqueous humor toxoplasmosis was the definitive diagnosis. Conclusion. PCR amplification for Candida is a sensitive and specific technique for the diagnosis.

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Evaluación de diferentes crioprotectores para la crioconservación de espermatozoides de yamú (Brycon amazonicus)/ Evaluation of different cryoprotectors for cryopreservation of yamú (Brycon amazonicus) spermatozoa

Cruz Casallas, Pablo E; Medina Robles, Víctor M; Velasco Santamaría, Yohana M
2006-06-01

Resumen en español El uso de dimetilsulfoxido (DMSO), etilenglicol (ETG), propilenglicol (PPG) y metanol (MET) para la crioconservación de semen de yamú (Brycon amazonicus - Spix & Agassiz 1829) fue evaluado con el objetivo de determinar la calidad post-descongelación y la fertilidad in vitro del semen. Para este propósito, machos y hembras, sexualmente maduros fueron inducidos a la maduración final de las gónadas por medio de extracto de hipófisis de carpa. El semen obtenido fue eva (mas) luado y diluido (1:4) en una solución a base de yema de huevo (12%) y glucosa (5.5%). Se utilizó cada crioprotector a concentraciones de: 3.75, 5, 7.5, 10, 11.25 y 15% para un total de 24 tratamientos. El semen diluido fue empacado en pajillas de 0.5 mL para ser congelado en vapores de nitrógeno líquido (NL) a -194 °C durante 30 min y luego transferidas y almacenadas hasta por 10 días en un termo de NL para su evaluación. Para las pruebas de fertilidad, las pajillas (n= 6) de cada uno de los tratamientos fueron descongeladas a 35 °C por 60 seg y posteriormente evaluadas. Se encontró que los tratamientos DMSO-5%, ETG-3.75%, PPG-3.75% y MET-3.75% presentaron los mayores porcentajes de movilidad (PM) y tiempos de activación (TA), siendo DMSO-5% el más alto (PM 76 ± 2.4; TA 88.2 ± 6.1). De otro lado, los tratamientos PPG-3.75% y MET-3.75% mostraron los mayores porcentajes de fertilidad (50 ± 1.4 y 47.8 ± 1.4, respectivamente), pero fueron inferiores (p Resumen en inglés The effect of dimethyl sulphoxide (DMSO), ethylene glycol (ETG), propylene glycol (PPG) and methanol (MET) in yamú (Brycon amazonicus - Spix & Agassiz, 1829) semen cryopreservation was evaluated with the aim of determining the post-thawing quality and in vitro fertility. For this purpose, sexually mature yamú females and males were induced to promote ovulation and spermation with carp pituitary extract. The semen obtained was evaluated and diluted 1:4 in a solution with (mas) 12% egg yolk and 5.5% glucose. Different concentrations (3.75, 5, 7.5, 10, 11.25 and 15%) for each one of the 4 cryoprotectants were used for a total of 24 treatments. The diluted semen was frozen into 0.5 mL straws by liquid nitrogen vapours (LN) during 30 minutes and then transferred to a container with LN until be assayed. The straws (n= 6) corresponding to each treatment were thawed at 35 °C for 60 seconds and evaluated to select the best concentration for each cryoprotector for the fertility test. 5% DMSO, 3.75% ET, 3.75% PPG and 3.75% MET treatments presented the highest motility percentages (MP) and activation time (AT) being 5% DMSO the best (MP 76 ± 2.4; AT 88.2 ± 6.1). On the other hand, 3.75% PPG and 3.75% MET treatments showed the highest fertility percentages (50 ± 1.4 and 47.8 ± 1.4, respectively); however, these percentages were significantly lower (p

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Estudio del desarrollo embrionario del sábalo (Prochilodus lineatus)/ Study of the embrionary development in sábalo (Prochilodus lineatus)

Botta, P; Sciara, A; Arranz, S; Murgas, LDS; Pereira, GJM; Oberlender, G
2010-01-01

Resumen en español El almacenamiento de espermatozoides de peces por medio de la criopreservación es muy utilizado hoy en día. Si bien se sabe que el proceso de congelamiento/descongelamiento genera la fragmentación del ADN del espermatozoide, no se conocen las consecuencias que esto tiene en el desarrollo embrionario. Actualmente hay un gran interés en el desarrollo de métodos de fecundación in vitro para la especie Prochilodus lineatus utilizando semen criopreservado. En este trabaj (mas) o estudiamos el desarrollo embrionario de esta especie, a fin de sentar las bases para la observación de anormalidades en el desarrollo de embriones obtenidos a partir de espermatozoides crioconservados. Los huevos producidos por esta especie son translúcidos y poseen un gran espacio perivitelino; son del tipo telolecítico y presentan una división meroblástica durante los primeros estadíos del desarrollo. Si bien el desarrollo embrionario de Prochilodus lineatus (sábalo) se llevó a cabo en menor tiempo en comparación con Danio rerio, las etapas que atravesó el embrión son muy similares. Durante el estudio se observaron los períodos de Cigoto, Clivaje, Blástula, Gástrula, Segmentación y Eclosión de la larva de sábalo. De esta manera se logró registrar los diferentes estadíos de su desarrollo, principalmente aquellos posteriores a la transición de la blástula media (TBM), a partir del cual el embrión comienza a transcribir su propio genoma Resumen en inglés Currently, the storage of fish spermatozoa through cryopreservation is widely used. Although it is of common knowledge that the process of freezing / thawing generates DNA fragmentation of spermatozoa, the consequences of this process on embryonary development are unknown. There is great interest in developing methods for in vitro fertilization for the species Prochilodus lineatus using cryopreserved semen. In this paper we study the embryonic development of this fish, to (mas) lay the groundwork for the observation of abnormalities in the development of embryos derived from criopreserved spermatozoa. The eggs produced by this species are translucent and have a large perivitelline space, are of the telolecitic type, and presented meroblastic division during the early stages of development. Although the embrionary development of Prochilodus lineatus (Sábalo) took place in less time compared with Danio rerio (Zebrafish) the embryo goes through very similar stages. During the study it was possible to observe the periods of zygote, cleavage, blastula, gastrula, segmentation and hatching of the larvae of Sábalo. The different stages of development were successfully recorded, especially those after the transition of blastula media (TBM), when the embryo begins to transcribe its own genome

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Effect of the pH on the absorption spectrum of the isolated D1-D2-cytochrome b559 complex of photosystem II

Yruela Guerrero, Inmaculada; Tomás Corruchaga, Raquel; Alfonso Lozano, Miguel; Picorel Castaño, Rafael
1999-06-01

Digital.CSIC (Spain)

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Effect of Transgene Concentration, Flanking Matrix Attachment Regions, and RecA-Coating on the Efficiency of Mouse Transgenesis Mediated by Intracytoplasmic Sperm Injection

Moreira, Pedro N.; Pérez-Crespo, Miriam; Ramírez Ortiz, Miguel Ángel; Pozueta, Julio; Montoliu, Lluís; Gutiérrez-Adán, Alfonso
2006-10-11

Digital.CSIC (Spain)

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Efecto del volumen de empaque sobre la tasa de congelación-descongelación y la fertilidad de semen crioconservado de yamú (Brycon amazonicus)/ Effects of packaged volume on freezing and thawing rates and the fertility of cryopreserved sperm of yamú (Brycon amazonicus)

Medina-Robles, V M; Velasco-Santamaría, Y M; Cruz-Casallas, P E
2007-01-01

Resumen en español El objetivo fue establecer las condiciones de congelación-descongelación de semen de yamú (Brycon amazonicus) empacado en pajillas de diferentes volúmenes y su efecto sobre la movilidad espermática y fertilidad postdescongelación. La inducción a la maduración final de las gónadas fue realizada con extracto de hipófisis de carpa. El semen obtenido fue evaluado y diluido (1:4) en una solución de 5,5% glucosa, 12% yema de huevo y 10% dimetil sulfóxido, empacado e (mas) n pajillas de 0,5, 1,8, 2,5 o 4,0 mi y congelado en vapores de nitrógeno. La descongelación fue realizada en baño de agua a 35°C, 60°C u 80°C durante diferentes tiempos. Todas las pajillas mostraron una tasa total de congelación similar (entre 7,5 a 12,9°C min-1). A medida que se utilizó una mayor temperatura, la tasa total de descongelación aumentó. Las pajillas de 4,0 mi descongeladas a 35°C tuvieron la mayor movilidad y tiempo de activación posdescongelación (47,0 ± 1,6% y 60,2 ± 2,4 seg). La fertilidad obtenida con semen congelado en todos los volúmenes de empaque fue significativamente menor (P Resumen en inglés The aim of this study was to evaluate the freezing-thawing conditions of yamú (Brycon amazonicus) sperm packaged in straws of different volume and their effect on the spermatic motility and fertility post-thawing. The induction to gonadal final maturation was made with carp pituitary extract. The sperm obtained was evaluated and diluted (1:4) in a solution with 5.5% glucose, 12% egg yolk and 10% dimethyl sulfoxide, packaged in 0.5, 1.8, 2.5 or 4.0 ml straws and frozen in (mas) nitrogen vapors. The thawing was carried out in a 35°C, 60°Cor 80°C water bath during different times. All straws showed a similar overall freezing rate (7.5 to 12.9°C min-1). On the other hand, the overall thawing rate was faster at a higher water bath temperature. The 4.0 ml straws thawed at 35°C showed the highest motility and activation time post-thaw (47.0 ± 1.6% and 60.2 ± 2.4 sec). The fertility obtained with cryopreserved sperm in all straw sizes was significantly lower (P

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Efecto del horno de microondas sobre el crecimiento y sobrevivencia de Escherichia coli O157:H7 inoculada en tortas de carne de res/ Effect of microwave oven over the growth and survival of Escherichia coli O157:H7 inoculated in bovine minced meat samples.

Quesada, Oscar; Arias, María Laura; Chaves, Carolina
2003-03-01

Resumen en español RESUMEN. En los últimos años, el uso del horno de microondas dentro de la industria alimentaria ha ganado popularidad. Entre sus usos se incluye el descongelar, secar y cocinar alimentos, mas la inactivación de microorganismos que pueda o no ejercer este tipo de tratamiento es tema de discusión mundial. Por otro lado, la Escherichia coli O157:H7 representa un patógeno emergente, de distribución mundial y asociado a alimentos. Su resistencia a ambientes adversos ha s (mas) ido ampliamente discutida. El propósito de este estudio fue determinar el efecto de diferentes tiempos e intensidades de cocimiento del horno de microondas sobre la sobrevivencia de esta bacteria en tortas de carne de res. Las tortas de carne fueron inoculadas con una población alta (10(7)-10(9) UFC/mL) o baja (10(5)-10(7) UFC/mL) de E. coli O157:H7, mantenidas en congelación por 3 días a -4ºC y posteriormente descongeladas en un horno Whirlpool según su peso. Fueron sometidas a niveles de potencia de 70%, 80%, 90% y 100% por períodos de 30, 60, 90 y 120 segundos. Se determinó en cada muestra la tasa de sobrevivencia de la bacteria inoculada de acuerdo a la metodología descrita en Vanderzant & Splittstoesser. Según los resultados obtenidos, la tasa de destrucción de las bacterias analizadas fue significativa (p Resumen en inglés SUMMARY. The use of microwave ovens in food industry is a growing trend. It is used for thawing, drying and cooking food, but the microorganism’s inactivation that this treatment may exert or not is still a subject of worldwide discussion. At the same time, Escherichia coli O157:H7 now presents itself as an emerging pathogen, distributed worldwide and associated with food. Its resistance to adverse environments has been widely discussed. The purpose of this work was to d (mas) etermine the effect of different times of exposure and cooking intensities of microwave oven on the survival of this bacterium inoculated into minced meat samples. These were inoculated with a high (10(7)-10(9) CFU/mL) or low (10(7)-10(7) CFU/mL) population of E. coli O157:H7, frozen for 3 days at -4ºC and thawed in a Whirlpool microwave oven according to their weight. They were radiated at levels of 70%, 80%, 90% and 100% for periods of 30, 60, 90 and 120 seconds. In each sample the rate of survival of the bacteria was determined according to the methodology described by Vanderzant & Splittstoesser. The results obtained showed that the rate of destruction of the bacteria analyzed was significant (p

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Efecto de un surfactante sobre la integridad de espermatozoides ovinos crioconservados

HELLEMANN, C.; JARA, C.
1997-01-01

Resumen en español Con el objetivo de comprobar el efecto de la adición de un tensido comercial (Equex STM® a diluyentes tris y citrato de Na en la sobrevivencia de semen ovino, se realizaron 4 ensayos con diseño factorial de crioconservación de eyaculados de 2 carneros de raza Austral y un carnero Border Leicester, procesados separadamente. Fue común para todos los ensayos la dilución monofásica rápida a temperatura ambiente, en diluyentes con 20% (v/v) de yema de huevo, divididos (mas) en fracciones sin y con 0.5% (v/v) de Equex STM, el empaque en minitubos de 0.25 ml, períodos de adaptación a +5°C de 3 a 4 h, la curva de congelación en vapor de nitrógeno a 10 cm sobre la fase líquida de aproximadamente 5°C/min y la posterior descongelación en agua a 40°C por 15 s. Los criterios de evaluación del semen descongelado fueron el índice de motilidad (IM) y la integridad del borde apical de los acrosomas (AN). Los resultados se sometieron a análisis de varianza, test de Duncan y test de "t" (TWOSAM) del paquete STATGRAF 5.1, asumiendo p Resumen en inglés In order to test the effect of the addition of the commercial surfactant Equex STM to TRIS and Na-Citrate extenders on the survival of ram semen, four trials using factorial designs were conducted freezing separate ejaculates collected from 2 Austral and l Border Leicester rams. Common for all trials was a monophasic dilution at room temperature, with 20% egg-yolk containing extenders split in fractions with 0.5% and without surfactant, packing of extended semen in 0.25 M (mas) initüb-straws, an adaptation period at 5°C for 3-4 h, a freezing rate of about 5°C/min performed 10 cm above level of liquid nitrogen, and thawing of straws for 15 seconds in a 40°C water bath. Quality criteria for thawed semen were motility index (MI) and normal intact acrosomes (NA). With the use of STATGRAF 5.1, results were submitted to ANOVA and Duncan test, complemented with "t"-test (TWOSAM), assuming P

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Efecto de la criopreservación sobre la integridad de la membrana plasmática y acrosomal de espermatozoides de toros/ Effect of Cryopreservation on Integrity of Plasmatic and Acrosomal Membrane of Bulls Sperm

Rubio-Guillén, Jorge L; Quintero-Moreno, Armando A; González Villalobos, Decio M
2009-08-01

Resumen en español La integridad de la membrana plasmática (MP) y acrosomal (MA) han sido dos de los parámetros de valoración seminal más estudiados por su rol preponderante como límite celular y por ser responsable de hacer efectivas las interacciones entre células, tanto en términos de integridad morfológica, como funcional. El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de la criopreservación sobre el porcentaje de espermatozoides vivos (VIT), acrosomas dañados (DAR), y l (mas) a integridad estructural y funcional de la MP y MA de espermatozoides provenientes de 5 eyaculados frescos y 5 pajuelas descongeladas de 4 toros mediante frotis teñidos con eosina-nigrosina. La integridad funcional de estas membranas fue evaluada mediante los tests osmóticos (HOST y ORT). Los datos obtenidos fueron analizados con el procedimiento GLM (SAS®) y cuando se observaron diferencias se cuantificaron los efectos mediante el LSMEANS. Todos los valores de calidad espermática estudiados fueron afectados significativamente por la criopreservación (VIT, DAR, ORT y HOST). El proceso de congelación-descongelación causó un marcado efecto detrimental sobre la integridad estructural y funcional de la MP y MA de los espermatozoides evaluados (P Resumen en inglés Plasmatic and acrosomal membrane integrity has been used as valuable information for determining sperm quality, because is important to know the morphological and functional role as cellular delimitation and in effective cell interactions. The aim of this study was to determine cryopreservation effects on sperm percentage of vitality, number of damaged acrosomes (DAR), the structural and functional sperm plasma membrane integrity in 5 fresh ejaculates and 5 thawed strauws (mas) of 5 bulls by using the eosin-nigrosin stain. The functional integrity of these membranes were evaluated by osmotic tests (HOST and ORT). The data was analysed by GLM procedure, and when differences were detected, LSMEANS was used to quantify the effects. Significant differences were found on seminal quiality parameters (VIT, DAR, ORT and HOST) between fresh and thawed sperm. Freezing-thawing procedure had detrimental effect on the integrity structural and functional of MP and MA in the spermatozoa evaluated (P

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Desarrollo de nuevos modelos de tejas de hormigón y de sus acabados superficiales

Amo Sevilla, Juan del; Laloma Escalera, Ludovico; Marín Andrés, Félix; Sánchez de Rojas, María Isabel
2005-08-01

Digital.CSIC (Spain)

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Criopreservación del nemátodo Beddingia (Deladenus) siricidicola, controlador biológico de la avispa del pino/ Cryopreservation of the nematode Beddingia (Deladenus) siricidicola, biological control agent of sirex wood wasp

GERDING G, MACARENA; FRANCE I, ANDRES
2005-08-01

Resumen en español El nemátodo Beddingia (Deladenus) siricidicola, el más efectivo controlador biológico de la avispa del pino Sirex noctilio, fue introducido al país desde Brasil. Con el fin de mantener en el tiempo las características originales del nemátodo, se desarrolló un protocolo de criopreservación. Los mayores niveles de supervivencia fueron logrados al incubar los nemátodos en glicerol al 5% que fue concentrado hasta alcanzar el 60%, antes de almacenarlos en nitrógeno l (mas) íquido. La viabilidad se evaluó 24 horas después, descongelando los criotubos por inmersión en agua a 37°C y luego depositando el criotubo abierto en solución Ringer. La supervivencia promedio después de almacenaje fue de 73% Resumen en inglés The nematode Beddingia (Deladenus) siricidicola was introduced from Brazil, since it is the most effective biological control agent for the wood wasp, Sirex noctilio. In order to maintain its original characteristics through time, a protocol for the cryopreservation of this nematode was developed. The highest viability levels were obtained by incubating the nematodes, prior to immersion in liquid nitrogen, in 5% glycerol for several days until the suspension reached 60% g (mas) lycerol. Viability was assessed 24 hours later by thawing the cryotubes in 37°C tap water and immersing the opened cryotube in Ringer’s solution. The mean survival after storage was 73%

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Criopreservación de espermatozoides de anchoveta peruana (Engraulis ringens)/ Cryopreservation of Peruvian anchovy (Engraulis ringens) sperm

Catcoparco, Christian; Dupré, Enrique; Espinoza, Carlos
2010-04-01

Resumen en español El presente trabajo muestra una metodología práctica y de bajo costo para criopreservar espermatozoides de Engraulis ringens, con la finalidad de optimizar las técnicas de su reproducción en cautiverio. La investigación fue dividida en tres etapas; la primera consistió en evaluar la toxicidad de cuatro crioprotectores; dimetilsulfóxido (ME2SO), etanol (ET), propilenglicol (PG) y glicerol (GL) a tres concentraciones molares diferentes (0,5 M; 1,0 M y 1,5 M) sobre la (mas) motilidad espermática. Los porcentajes de motilidad de espermatozoides incubados en ME2SO fueron significativamente mayores al de los observados con los otros tres crioprotectores. En la segunda etapa se determinó la tasa de congelamiento óptima, utilizando el crioprotector con el que se obtuvieron los mejores resultados de motilidad (ME2SO). En este caso, los mayores porcentajes de motilidad post-descongelamiento obtenidos fueron con ME2SO a 1,5 M a tasas de congelamiento de -20 hasta -40ºC min-1 (61,3 ± 7,6% y 53,8 ± 4,9% respectivamente). Por último, se evaluó el efecto de la adición de un crioaditivo no permeable en la solución crioprotectora (vitelo de huevo de gallina, VHG), para optimizar la motilidad espermática post-descongelamiento; sin embargo, los resultados no variaron significativamente con los controles sin VHG Resumen en inglés The present work shows a practical and of cheap methodology for Engraulis ringens sperm cryopreservation, with the purpose to optimize its reproduction techniques in captivity. The investigation was divided in three stages. The first one consisted to evaluate toxicity of four cryoprotectants; dimethylsulfoxide (ME2SO), ethanol (ET), propylene glycol (PG), glycerol (GL) to three molars concentrations (0.5 M; 1.0 M and 1.5 M) on spermatic motility. Motility percentages of s (mas) perms incubated in ME2SO were significantly bigger than that observed in others three cryoprotectants. In the second stage, the optimal freezing rates were determinate, using ME2SO only. In this case, the biggest motility percentages were obtained with 1.5 M ME2SO with freezing rates of -20 to -40 ºC min-1 (61.3 ± 7.6% and 53.8 ± 4.9% respectively). Finally, the effect of addition of not permeable cryoprotectant in cryoprotective solution (egg hen yolk, VHG) was evaluated to optimize the post-thawing spermatic motility; nevertheless, the results did not change significantly respect to control without VHG

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Criocirugía (Tercera Parte): Revisión de la literatura y nuestra experiencia (II)/ Cryotherapy III, Bibliographic review: Our experience (II)

Escudero Barrilero, Ángel; Arias Fúnez, Fernando; Rodríguez-Patrón Rodríguez, Rafael; García González, Ricardo
2005-12-01

Resumen en español OBJETIVOS: La criocirugía es una técnica verdaderamente mini-invasiva, eficaz para tratar el adenocarcinoma de próstata con riesgo quirúrgico escaso, nula mortalidad per y postoperatoria y sin apenas morbilidad. Ya se ha constatado que se puede aplicar a enfermos de alto riesgo quirúrgico. No precisa sangre ni UVI y es factible en pacientes con desórdenes de la coagulación y en quienes no consienten en recibir transfusiones. Los resultados -valorando niveles sangu� (mas) �neos de PSA y biopsia negativa- se consolidan con el paso del tiempo. No causa interferencia sobre la eficacia de otras técnicas utilizables cuando no es efectiva. Sus fracasos se pueden recuperar además de con una segunda criocirugía, con prostatectomía radical; muy poco investigado con radioterapia externa y por supuesto mediante supresión androgénica. La crioterapia se puede aplicar con posibilidades de éxito en enfermos con cáncer extracapsular (T3) y la citotoxicidad del frío se ejerce eficazmente sobre: células pobremente diferenciadas y Gleason de 7 a 10; células resistentes o cáncer recidivado tras la radioterapia y el tratamiento previo con hormonoterapia no interfiere su efecto. Hay datos suficientes que apoyan las indicaciones que exponemos a continuación. 1.- Sería el tratamiento idóneo para realizar de 1ª intención. a) En pacientes con riesgo alto y medio de infiltración extracapsular. Son pocos los urólogos que indican la Prostatectomía radical en este grupo. Hay argumentos suficientes para anteponer la congelación controlada a la asociación braqui-radioterapia externa. Si consideramos persistencia de cáncer en la biopsia, elevación del PSA, complicaciones y peligrosidad de las mismas, se refieren muy buenos resultados. ¿Por qué ensayar la radiación y rescatar sus fracasos con crioterapia? Cuando la congelación se aplica como primera opción la tasa de éxitos mejora con respecto a la referida en cánceres resistentes o recidivados tras la radiación. Es evidente que las complicaciones serias son más graves y más frecuentes en pacientes previamente radiados y que no tienen fácil solución. b) En enfermos con cáncer limitado a la glándula con riesgo bajo de extensión extracapsular patologías múltiples y/o cuya edad biológica aparente ser superior a 70 años. c) En pacientes de bajísimo riesgo -PSA Resumen en inglés OBJECTIVES: To perform a bibliographic review of the main features of cryotherapy as a therapeutic option in the managemente of prostate cancer and to report our initial experience. METHODS: We employed the Endocare Fast-Trac system (Medipro) with 2,4 mm needles implanted in a single maneouvre without rack or transrectal US transducersupport. Two cycles of freezing -thawing were employed, with apex backward movement when necessary. Freezing cycle duration was between 7-10 (mas) minutes or more. The Onik maneouvre - injection of saline into the Denonvillier’s space-diminishes the risk of rectal injury and fistula allowing reaching posterior limits of the icaball beyond the prostatic capsule. RESULTS: We treated 20 patients. Follow-up wasbetween 30-36 months. 58% of the patients had unilateral prostate cancer, 42% bilateral. In accordance to the classic definition 9 patients were classified as low risk of extraprostatic disease, 6 medium risk and 5 high risk; using number of positive cores as the criterion for risk 5, 6 and 9 were low, medium and high risk respectively. Per protocol prostate biopsies were performed in 18 patients 6, 12 and 24 months after treatment. Twopatients underwent a second treatment due to persistence of cancer cells in the 6-month biopsy (11%). 3-month PSA nadirs after a total of 21 cryo treatments administered were

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Condiciones optimas de manipulación para la cuantificación de fibronectina en saliva/ Optimal assay conditions for quantifying fibronectin in saliva

Llena Puy, Mª Carmen; Montañana Llorens, Consuelo; Forner Navarro, Leopoldo
2004-07-01

Resumen en español Introducción: La fibronectina (Fn) es una glucoproteína presente en múltiples fluidos y tejidos orgánicos, tanto en condiciones fisiológicas como patológicas. También en la saliva puede detectarse aunque en muy pequeñas cantidades y frecuentemente en cadenas fragmentadas, induce agregación bacteriana y sus niveles se reducen cuando aumentan los niveles de bacterias cariogénicas o periodontopatógenas. La capacidad infectiva de la saliva de los pacientes infectad (mas) os por el virus de la inmunodificiencia humana (VIH) se ha relacionado con los niveles de esta proteína. En algunas enfermedades crónicas de la mucosa oral como es el liquen plano, la concentración de Fn salivar se encuentra reducida. También su cuantificación varía en presencia de algunos tumores como el carcinoma oral de células escamosas, aunque no puede considerarse un factor específico. Objetivo: Debido a la baja concentración de Fn en la saliva y a su labilidad en la forma soluble, las condiciones de recogida y conservación de las muestras son extremadamente importantes, por ello nos proponemos en el presente trabajo estandarizar dichas condiciones con el fin de poder cuantificarla de manera óptima. Material y método: Se determinó la concentración de Fn en saliva humana de 20 personas sanas de edades comprendidas entre 28 y 54 años mediante técnica de ELISA, comparando la concentración de la proteína en muestras frescas, conservadas 24 h a 4ºC, o congeladas a - 40ºC durante diferentes periodos de tiempo. Resultados y conclusiones: Tras comparar diferentes formas de conservación de las muestras de saliva, observamos que las condiciones óptimas son: recoger las muestras en tubos de vidrio, cuantificarlas inmediatamente tras su recogida o como máximo 24 horas después, conservándolas a 4ºC. La congelación y posterior descongelación para su cuantificación induce pérdidas de hasta el 60 % de la proteína. Resumen en inglés Introduction: Fibronectin (Fn) is a glycoprotein that is present in many body fluids and tissues in both physiological and pathological conditions. It can also be detected in the saliva, although only in very small quantities and frequently in broken chains. It induces bacterial aggregation and its levels fall when those of cariogenic or periodontal pathogenic bacteria rise. The infective capacity of the saliva of patients infected by human immunodeficiency virus (HIV) ha (mas) s been linked to the levels of this protein. In some chronic conditions of the oral mucosa, such as oral lichen planus, the concentration of salivary fibro-nectin is lower than usual. Fibronectin quantity also varies in the presence of some tumours, such as oral squamous cell carcinoma, although it cannot be considered a specific factor. Aims: Due to the low Fn concentration in saliva and its lability in the soluble form, sample collection and conservation conditions are extremely important. The aim of this study is therefore to standardise these conditions so that the Fn can be quantified in an optimum manner. Materials and methods: The Fn concentration in human saliva was determined in 20 healthy subjects aged between 28 and 54 by means of the ELISA technique and the concentration of the protein in fresh samples kept at 4ºC for 24 hours was compared with that of frozen samples kept at -40ºC for different periods of time. Results and Conclusions: After comparing different ways of conserving the saliva samples, we found that the optimum conditions were to collect the samples in glass tubes and to quantify them immediately after collection or conserve them at 4ºC and quantify them within a maximum of 24 hours. Freezing and later thawing for quantification induced losses of up to 60% of the protein.

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Badland dynamics in the Central Pyrenees: temporal and spatial patterns of weathering processes

Nadal-Romero, E.; Regüés-Muñoz, D.; Martí Bono, Carlos Enrique; Serrano Muela, M. P.
2007-05-01

Digital.CSIC (Spain)

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Alteraciones en la integridad del acrosoma y de la teca perinuclear en semen criopreservado de verraco/ Alterations in the integrity of the acrosome and perinuclear theca in cryopreserved boar spermatozoa

Barrientos Morales, Manuel; Juárez Mosqueda, María De L; Trujillo Ortega, María E; Montiel Palacios, Felipe
2009-01-01

Resumen en español El objetivo del estudio fue investigar el efecto de la criopreservación sobre la integridad del acrosoma y de la subestructura de la teca perinuclear (PTS) del espermatozoide de verraco. Se utilizó semen proveniente de seis verracos. El semen se colectó, se diluyó y se determinó la motilidad y concentración espermática, incluyendo en el estudio sólo los eyaculados con motilidad ≥70%. El semen diluido se dividió en dos muestras: una para evaluarse en fresco (mas) y otra para evaluarse después de la congelación-descongelación. Ambos tipos de muestras se utilizaron para evaluar la viabilidad espermática y la integridad del acrosoma mediante microscopía de luz usando la técnica de triple tinción y para evaluar la integridad de la PTS mediante microscopía electrónica. El semen congelado-descongelado tuvo mayor proporción (P Resumen en inglés The objective of this study was to investigate the effect of cryopreservation on the integrity of the acrosome and the perinuclear theca substructure (PTS) of boar spermatozoa. Semen from six boars was used. The semen was collected, diluted, and sperm motility and concentration determined. Only ejaculates showing ≥70% motility were used in this study. Diluted semen was divided in two samples: one to be evaluated fresh, and other to be evaluated after freezing-thawin (mas) g. Fresh and frozen-thawed semen samples were used to assess sperm viability and acrosome integrity by light microscopy using the triple staining technique and to evaluate the PTS integrity by electron microscopy. The frozen-thawed semen had a greater proportion (P

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