Sample records for ESPERMATOZOIDES (spermatozoa)
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Congelamiento de espermatozoides de Argopecten pupuratus Congelamiento de espermatozoides del ostión del norte Argopecten purpuratus mediante congelador mecánico/ Freezing of spermatozoa of the scallop Argopecten purpuratus using a mechanical freezing system

Dupré, Enrique; Espinoza, Carlos
2004-11-01

Resumen en español El congelamiento de espermatozoides es una técnica utilizada en acuicultura que permite almacenar los excedentes que fueron obtenidos durante la época reproductiva, para utilizarlos posteriormente. El proceso de criopreservación, requiere disminuir la temperatura gradualmente y de manera controlada para minimizar los daños ocasionados por el choque osmótico o por formación de cristales de hielo, lo cual es difícil lograr en terreno donde no se dispone de un equipo (mas) automático para realizarlo. Este estudio presenta un dispositivo manual portátil que permite descender gradualmente la temperatura, permitiendo repetir en forma exacta cada uno de los protocolos cada vez que se requiera. El equipo consta de un termo Dewar para nitrógeno líquido, un sistema de poleas graduadas, una placa porta-muestras de acrílico y un termómetro para bajas temperaturas. Para verificar su eficiencia, se procedió a criopreservar trozos de la parte masculina de la gónada de Argopecten purpuratus a diferentes tasas de congelamiento (1,1; 2,2; 4,6; 6,5; 8,8; 12,9; 19,2; 32,2 y 96,5 C°min-1). Se utilizó una solución crioprotectora compuesta por leche descremada liofilizada, ME2SO y sucrosa a una tasa de descongelamiento de 573°C·min-1. La tasa óptima de congelamiento fue de 8,8° C·min-1, con la cual se obtuvo 51,3 ± 6,6% de espermatozoides móviles. El congelador mecánico mostró ser eficiente para la criopreservación de espermatozoides de A. purpuratus a diferentes tasas de congelamiento, ya que permitió regular el descenso de las muestras en los vapores de nitrógeno líquido a diferentes velocidades

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Viabilidad de espermatozoides criopreservados de macha Mesodesma donacium (Mollusca, Bivalvia)/ Viability of cryopreserved spermatozoa of the surf clam Mesodesma donacium (Mollusca, Bivalvia)

Dupré, Enrique; Joo, Roberto
2006-11-01

Resumen en español Se evaluó la viabilidad de los espermatozoides de macha Mesodesma donacium sometidos a diferentes tratamientos de criopreservación mediante su motilidad y éxito de la fecundación con espermatozoides descongelados. En un arreglo factorial se evaluaron 42 protocolos, combinando tres tipos de crioprotectores (DMSO, Metanol y Pro-pilén-glicol), tres concentraciones (0,5 M, 1,0 M y 1,5 M), cuatro tasas de congelación (-5, -10, -15 y -206ºC·min-1) y dos tasas de descong (mas) elación (lenta: 72ºC·min-1 y rápida: 312ºC·min-1). Los mejores resultados de motilidad espermática (16,7%) se obtuvieron con DMSO 1,0 M como crioprotectante, a una tasa de congelación de -15ºC·min-1y descongelación lenta. Mientras que los mejores resultados de fecundación (84,4%) con espermatozoides congelados-descongelados se obtuvieron con DMSO 1,5 M a una tasa de congelación de -15ºC·min-1 y descongelación rápida Resumen en inglés The viability of the surf clam spermatozoa was evaluated using the percentage of fertilization obtained with cryopreserved spermatozoa and different protocols. In total, 42 protocols combined three types of cryoprotectants (DMSO, Methanol, and Prophylen-glycol) at three different concentrations (0.5 M, 1.0 M, and 1.5 M), four freezing rates (-5, -10, -15, and -206ºC·min-1), and two thawing rates (slow: 72ºC·min-1 and fast: 312ºC·min-1). The best sperm motility was o (mas) btained with DMSO frozen at -15ºC·min-1 and with a slow thawing rate. The best fertilization percentages were obtained with DMSO frozen at -15ºC·min-1 but with a fast thawing rate

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SEPARACION DE ESPERMATOZOIDES "Y" DE EYACULADO DE CONEJO POR MEDIO DE GRADIENTES DE DENSIDAD DE ALBÚMINA SÉRICA HUMANA/ SEPARATION OF "Y" SPERMATOZOA IN RABBIT SEMEN BY DIFFERENT DENSITY GRADIENTS OF HUMAN SERUM ALBUMIN

Hernández, P.J.E; Fernández, R.F; Reyes, C.J; Cerezo, P.G; Echegaray, J.L; Mendoza, B
2008-04-01

Resumen en español Se obtuvieron 33 eyaculados de conejos Nueva Zelanda blancos para realizar la separación de espermatozoides "Y" por medio de diferentes gradientes de densidad (10, 15 y 20%) de Albúmina Sérica Humana (HSA). Las características evaluadas en fresco fueron: volumen, porcentaje de motilidad progresiva, espermatozoides vivos, morfología normal y concentración, siendo los valores de: 1.19 mL, 82.72%, 90.90%, 89.96% y 773.63X10(6), respectivamente. El semen fue diluido 1:1 (mas) en un medio de citrato de sodio y glucosa, para posteriormente colocarlo en tubos que contenían gradientes de concentraciones de albúmina al 20%, 15% y 10%, colocándose a una temperatura de 37.5°C. Una vez realizado lo anterior se retiró cada una de las fracciones con intervalo de 10 minutos, determinando en cada fracción el porcentaje de motilidad, espermatozoides vivos y concentración espermática. Se observó una disminución importante de la motilidad del semen fresco (82.72%) en comparación a la motilidad progresiva de la capa de HSA al 20% que fue de 35.45%. Conforme los espermatozoides alcanzan las capas de mayor densidad el porcentaje de vivos disminuye siendo de 88.39, 86.21 y 83.06% para el 10, 15 y 20% de HSA respectivamente, observándose lo mismo con relación a la concentración espermática (504.24, 376.06 y 211.81X10(6)/ml). De un total de 30 partos después de la inseminación artificial con espermatozoides obtenidos de la capa con 20% de HSA, nacieron 187 gazapos siendo el 72.72% machos y 27.27% hembras. Los resultados indican que mediante gradientes de densidad de HSA es posible realizar la selección de espermatozoides "Y" en semen de conejo y consecuentemente producir más machos. Resumen en inglés Thirty-three ejaculations of white New Zealand rabbits were obtained to perform the separation of "Y" spermatozoa by different density gradients (10, 15 and 20%) of Human Serum Albumin (HSA). The characteristics evaluated in fresh semen were: volume, progressive motility percentage, live spermatozoa, normal morphology and concentration, being these values: 1.19 ml, 82.72%, 90.90%, 89.96% and 773.63X10(8) respectively. Semen was diluted 1:1 in a medium of sodium citrate an (mas) d glucose; then, 1ml of diluted semen was added in tubes containing gradients of albumin at 20%, 15% and 10%, at a temperature of 37.5ºC. Latter, each of the factions was retired within intervals of 10 minutes each, determining motility percentage, live spermatozoa and spermatic concentration in each fraction. An important decrease of fresh semen motility was observed (82.72%) compared to the progressive motility in the HSA layer at 20%, which was 35.45%. As spermatozoa reach the layers of higher density, the percentage of the live ones decreases being 88.39, 86.21 and 83.06 for the 10, 15 and 20% of HAS respectively, observing the same related to spermatic concentration (504.24, 376.06 and 211.81X10(6)/ml). From 30 births after artificial insemination with spermatozoa obtained from the layer with 20% of HSA, 187 rabbits were born being the 72.72% males and 27.27 females. The results indicate that it is possible to perform the selection of "Y" spermatozoa in rabbit semen and consequently produce more males, by the use of density gradients of HSA.

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Almacenamiento de espermatozoides en la vagina de la lagartija vivípara Sceloporus torquatus (Sauria: Prhynosomatidae)/ Sperm storage in the vagina of the viviparous lizard Sceloporus torquatus (Sauria: Prhynosomatidae)

MARTÍNEZ-TORRES, Martín
2009-12-01

Resumen en español Las hembras de muchas especies de lagartijas tienen la capacidad de almacenar espermatozoides en un sistema de túbulos especiales presentes en la vagina. Sin embargo, en otras especies los espermatozoides se almacenan en el infundíbulo. Se utilizó una técnica sencilla y rápida para determinar sí la vagina de Sceloporus torquatus tiene la capacidad de almacenar espermatozoides. En las hembras de esta especie, los espermatozoides son retenidos al menos 167 días en un (mas) sistema de túbulos especiales localizados en la vagina. La cantidad de espermatozoides presentes en los lavados vaginales disminuyó gradualmente a partir de diciembre y su desaparición ocurrió en la preñez tardía. Los espermatozoides ascienden al útero e infundíbulo antes de que ocurra la ovulación, sin embargo, en estos órganos no existen estructuras especiales para almacenar espermatozoides. Resumen en inglés Females of many lizard species are able to store sperm in a special system of tubules present in the vagina. However, in other species sperm storage occurs in the infundibulum. A quick and simple technique to determine if the vagina of Sceloporus torquatus has the capacity to store sperm was used. In this species the spermatozoa are retained at least during 167 days after mating in a special system of tubules located in the vagina. The amount of spermatozoa observed throu (mas) gh vaginal flushing was reduced gradually from December on and the spermatozoa disappeared in late pregnancy. The spermatozoa reached the uterus and infundibulum before ovulation started; however, in these organs there are no special structures for sperm storage.

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Transgénesis mediada por espermatozoides en la especie porcina: efecto de la presencia de ADN exógeno sobre la calidad seminal y evaluación de la producción in vivo de embriones transgénicos/ Sperm mediated gene transfer in pigs: Effect of exogenous DNA presence in seminal quality and evaluation of in vivo transgenic embryo production

García-Vázquez, Francisco Alberto; Ruiz, Salvador; Grullón, Luis Alberto; de Ondiz, Aitor; Gutiérrez-Adán, Alfonso; Gadea, Joaquín
2010-02-01

Resumen en español Una alternativa biotecnológica para la producción de animales transgénicos es la transgénesis mediada por espermatozoides (SMGT), basada en la habilidad de las células espermáticas de unir e interiorizar ADN exógeno. En este estudio se plantearon dos objetivos principales: 1) evaluar el efecto de la presencia de ADN exógeno sobre la calidad seminal y 2) evaluar la eficiencia en la producción de embriones transgénicos porcinos in vivo mediante inseminación intra (mas) uterina quirúrgica con espermatozoides incubados con el transgén. Para alcanzar estos objetivos, los espermatozoides (libres de plasma seminal) fueron incubados en presencia del transgén EGFP (proteína verde fluorescente) durante 2 h a 16°C (en una relación de 10(8) cels/mL y 5 µg ADN/mL). Se valoró la motilidad, motilidad progresiva e integridad de membrana de los espermatozoides incubados, en presencia o ausencia del transgén. Los resultados mostraron que la presencia del ADN no afectó a ninguno de los parámetros seminales estudiados. Con muestras seminales incubadas con el transgén se llevaron a cabo inseminaciones intrauterinas mediante laparotomía en 4 hembras prepúberes. A los 6-7 días tras la inseminación se recolectaron los embriones, para evaluar la tasa de fecundación y la expresión de la proteína verde fluorescente EGFP en los mismos. El número medio de cuerpos lúteos por cerda fue de 10,50 ± 2,90 con una tasa de recolección de 11,90%. Se recolectó un total de 5 embriones presentando todos ellos un estado normal de desarrollo y una alta calidad (dos de ellos presentaban más de 400 células por embrión). Cuando fue analizada la expresión mediante microscopia de fluorescencia, ninguno de ellos expresaba la proteína EGFP. Este resultado, bajo las condiciones experimentales del presente estudio, podría indicar que el transgén se una en su mayoría a espermatozoides con baja viabilidad por lo que la probabilidad de que los espermatozoides vivos unan el ADN y sean capaces de fecundar en comparación con espermatozoides sin el transgén es realmente baja. Resumen en inglés An alternative technology for producing transgenic animals is sperm mediated gene transfer (SMGT), based on the ability of sperm cells to bind and internalize exogenous DNA. The aims of this work were: 1) evaluate the effects of the presence of exogenous DNA in the seminal quality and 2) evaluate the efficiency of transgenic embryos production by surgery artificial insemination using sperm mediated gene transfer technique. Fresh spermatozoa (removed seminal plasma) were i (mas) ncubated with DNA (EGFP) at 16°C for 2 h (10(8) cells/mL and 5 µg DNA/mL). At first motility, progressive motility and viability were evaluated in spermatozoa incubated with or without exogenous DNA. The results showed that the presence of the DNA did not affect any of the studied sperm parameters (motility, progressive motility and viability). On the other hand insemination was carried out in 4 gilts by laparotomy in utero tubaric junction. Six-seven days after insemination blastocysts were collected and fertilization rate and transgene expression were determined. The mean number of corpora lutea/gilt was 10.50 ± 2.90 with a mean recovery rate of 11.90%. After the surgery, a total of 5 embryos were recovered and the percentage of normally developed embryos was 100% and with a high quality (two of them had more than 400 cells). When the blastocysts recovered after 6-7 days post-insemination were analyzed by fluorescence microscopy, it was revealed that none of them expressed protein EGFP. These results show the possibility that exogenous DNA bound to the sperm with low viability and only a low percentage to viable sperm, so the probability that live sperm bind the DNA and are able to fertilize in comparison with live sperm without the transgene are really low.

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Almacenamiento en frío de espermatozoides de trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss): Efectos en la motilidad, superóxido intracelular, integridad de la membrana plasmática y potencial de membrana mitocondrial/ Cold storage of sperm of rainbow trout (oncorhynchus mykiss): Effect on motility, intracellular superoxide, plasma membrane integrity and mitochondrial membrane potential

Berríos, O; Valdebenito, I; Treulén, F; Ubilla, A
2010-01-01

Resumen en español A diferencia de lo que ocurre en mamíferos, en teleósteos la mayoría de los estudios que evalúan la calidad del semen almacenado están orientados a la exposición de los espermatozoides a algunas especies reactivas de oxígeno (ROS), a la incorporación de antioxidantes en la dieta o a la aplicación de éstos en el plasma seminal. No se encuentran trabajos disponibles que traten la presencia del radical superóxido (O2._), ni la función que éste cumple al interior (mas) del espermatozoide cuando se encuentran almacenados. En la presente investigación se evaluó el efecto del almacenamiento en el O2._, motilidad, integridad de la membrana plasmática y potencial de membrana mitocondrial (ΔΨMit) en espermatozoides de trucha arcoiris (oncorhynchus mykiss). Para ello se extrajo el semen, el cual fue almacenado durante 12 días a 4 ºC. Cada 4 días se evaluó motilidad, ΔΨMit, integridad de la membrana plasmática y se detectó O2._ intracelular en los espermatozoides. Se encontró un 82,59% de células con tinción positiva para O2._ el día de extracción de la muestra, mientras que la motilidad, ΔΨMit y la integridad de la membrana plasmática, solo mostraron deterioro después del octavo día de almacenamiento. Únicamente el ΔΨMit se correlaciona negativamente con O2._ a partir del octavo día de almacenamiento (r = -0,56 P Resumen en inglés In teleostei, as opposed to what happens in mammals, most of the studies that evaluate the quality storages of semen are oriented toward the exposure of spermatozoa to some reactive oxygen species (ROS), the utilization of antioxidants in the diet, or the incorporation of these in seminal plasma. There is no available the literature covering the presence of superoxide ions (O2._), or the function of these on the interior of the spermatozoa that have been stored. In this s (mas) tudy, we evaluated the effect of storage on intracellular O2._, motility, plasmatic membrane integrity, and mitochondrial membrane potential (ΔΨMit) of spermatozoa of rainbow trout (oncorhynchus mykiss). Semen was extracted and put into storage for 12 days at 4 ºC. Spermatozoa motility, (ΔΨMit), plasmatic membrane integrity were evaluated every 4 days, and intracellular O2._ was detected. It was found that 82.59% of the cells were positive for the staining of O2._ on the day of sample extraction, while sperm motility, ΔΨMit and plasmatic membrane integrity only showed deterioration after the eighth day of storage. Only ΔΨMit is correlated negatively with O2._ starting from the eighth day of storage (r = -0.56 P

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Movilidad individual de los espermatozoides epididimarios de toros postmortem obtenidos mediante lavado retrógrado/ Individual motility of epidydimal spermatozoa, obtained by retrogadous flushing from post-mortem zebu bull testicles

Albers Alvarez, María I; Barrios Arismendi, Diego R
2006-09-01

Resumen en español El objetivo de este estudio fue evaluar la movilidad individual de los espermatozoides presentes en la cola del epidídimo, obtenida del matadero mediante lavado retrógrado de testículos de toros cebú postmortem. Los testículos fueron recolectados al azar (n=90) y transportados bajo dos diferentes temperaturas, siguiendo dos diferentes protocolos: Protocolo 1 (T: 35ºC) y Protocolo 2 (T: 25ºC), durante el período Abril-Julio 2003. El material experimental fue transp (mas) ortado según el protocolo elegido al azar, desde el sitio de recolección hasta el laboratorio en un lapso comprendido entre 30 y 60 minutos. Se realizó histopatología para seleccionar los testículos que tuvieran 70% o más de tejido funcional para cada protocolo (Protocolo 1: n=13; y Protocolo 2: n=20). Una vez realizada la selección, se evaluó la movilidad individual de los espermatozoides recolectados de las colas epididimarias en los testículos seleccionados. Esta recolección se realizó por lavado retrógrado con Tris-yema-glicerol, a través del conducto deferente. Para cada Protocolo se hicieron dos lecturas de la movilidad individual espermática (MI1 y MI2), con intervalo de 1 hora entre cada lectura.  Los datos se analizaron mediante estadística descriptiva y se realizó una prueba de t para comparar dos muestras independientes. Los resultados obtenidos indican que no hubo diferencia significativa (P Resumen en inglés The objective of this study was to evaluate the individual motility of the spermatozoa of the epididymal tail, obtained by retrogradous flushing, from testicles of post mortem bulls collected from a slaughterhouse. The testicles (n=90) were randomly collected and transported under two different temperatures, following two different protocols: Protocol 1 (35ºC) and Protocol 2 (25ºC), during the April-July 2003 period. The testicles were transported from the slaughterhous (mas) e to the Laboratory, in a range of time between 30 and 60 minutes. A histopathological study was conducted to all testicles to select those with 70% or more of functional tissue. So, the final number of testicles for the study was reduced: for Protocol 1 to 13 testicles and for Protocol 2 to 20 testicles. The retrogradous flushing was done with Tris-egg yolk-glycerol medium, through the deferent duct. Two readings for motility were done for each protocol (M1 1 and MI 2) one hour apart. The data was analyzed by descriptive statistic and t test to compare two independents samples. There was no significant difference (P

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Evaluación de la reacción acrosomal en espermatozoides humanos inducida por los monosacáridos manosa y N-acetilglucosamina/ Evaluation of the role of the monosaccharides, mannose and N-acetylglucosamine in the induction of the acrosome reaction in human spermatozoa

Cardona-Maya, W.D.; Cadavid, A.P.
2005-08-01

Resumen en español Objetivo: El objetivo de esta investigación fue evaluar el papel de los monosacáridos, manosa y Nacetilglucosamina en la inducción de la reacción acrosomal en espermatozoides humanos. Método: Cada individuo donó una muestra de semen, la cual fue sometida al proceso de capacitación usando albúmina sérica bovina, posterior a lo cual se evaluó el porcentaje de espermatozoides que presentaban reacción acrosomal al estimularlos con manosa y N-acetilglucosamina, usan (mas) do microscopía de fluorescencia y citometría de flujo. Resultados: Los resultados obtenidos en las 10 muestras evaluadas mediante citometría de flujo mostraron que sólo el ionóforo de calcio A23187 indujo reacción acrosomal (p Resumen en inglés Objective: The aim of this investigation was to evaluate the role of the monosaccharides, mannose and N-acetylglucosamine in the induction of the acrosome reaction in human spermatozoa. Methods: Each individual gave a semen sample, the samples were capacitated using bovien serum albumin; the analysis of the mannose and N-acetylglucosamine induced acrosome reaction was evaluated for fluorescence microscopy and flow cytometry. Results: The results obtained in the acrosomal (mas) reaction in the 10 samples evaluated by flow cytometry showed that only calcium ionophore A23187 induced acrosomal reaction (p

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FECUNDACION ASISTIDA EMPLEANDO ESPERMATOZOIDES FRESCOS Y CRIOPRESERVADOS-DESCONGELADOS OBTENIDOS MEDIANTE BIOPSIA TESTICULAR (TESE)

Donoso P, Patricio; Enríquez R, Rodrigo; González S, Patricio; Salinas S, René; Triantafilo V, Yasson; Roblero S, Luis; Carrasco F, Isabel; Duque A, Gonzalo
2003-01-01

Resumen en español Se realiza un análisis retrospectivo de los casos de pacientes azoospérmicos obstructivos y no obstructivos en los cuales se recuperó espermatozoides mediante TESE con el objetivo de comparar los resultados de fecundación asistida utilizando espermatozoides testiculares frescos y criopreservados-descongelados. De un total de 18 ciclos realizados en 13 pacientes, 7 correspondieron a microinyección con transferencia inmediata a la trompa (SOFT) y 11 a ICSI con cultivo (mas) y transferencia uterina. En 4 pacientes que fueron sometidas a SOFT se empleó espermatozoides frescos resultando en 2 embarazos y en 3 pacientes espermios congelados-descongelados obteniéndose un embarazo. Con respecto a los ciclos de ICSI con transferencia uterina, 9 se practicaron con espermios frescos obteniendo 3 embarazos y 2 con espermatozoides congelados lográndose una gestión. La tasa de fertilización se calculó considerando sólo aquellos ciclos con transferencia uterina siendo de un 78% para los espermios frescos y de un 57,14% para los congelados. Las tasas de embarazo por ciclo fueron de 38,46% y 40% para los espermios frescos y congelados respectivamente. Se concluye que la utilización de espermios testiculares criopreservados-descongelados para ICSI en pacientes azoospérmicos demuestra resultados comparables a los obtenidos con espermios testiculares frescos constituyendo una herramienta invaluable en el manejo de esta patología Resumen en inglés We performed a retrospective study in obstructive and non-obstructive azoospermic patients in which spermatozooa had been recovered through testicular biopsy (TESE). The main objective was to compare the results of assisted reproductive technique using fresh testicular spermatozoa and frozen-thawed testicular spermatozoa. From a total of 18 cycles in 13 patients, 7 were done with sperm-injected oocyte fallopian transfer (SOFT) and 11 with ICSI and uterine embryo transfer. (mas) Fresh spermatozoa were used in 4 patients in the SOFT group and frozen-thawed spermatozoa in 3 patients resulting in 3 and 1 clinical pregnancy respectively. In the ICSI group, 9 cycles used fresh spermatozoa obtaining three prergnancies and two frozen-thawed achieving 1 pregnancy. The fertilization rate was calculed considering only the cycles with uterine embryo transfer resulting in 78% for fresh sperm and 57.14% for frozen-thawed. The pregnancy rate per cycle was 38.46% and 40% for fresh and frozen-thawed sperm respectively. We conclude that the use of frozen thawed testicular sperm for ICSI in azoospermic patients shows comparable results to fresh testicular sperm being an iinvaluable tool for the management of this pathology

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Aumento del daño en el ADN y estrés oxidativo en espermatozoides de pacientes con oligozoospermia idiopática y antecedentes de criptorquidismo/ Extent of sperm DNA damage in spermatozoa from men examined for infertility. Relationship with oxidative stress

Smith G, Rosita; Kaune G, Heidy; Parodi Ch, Daniela; Madariaga A, Marcia; Morales D, Ignacio; Ríos S, Rafael; Castro G, Andrea
2007-03-01

Resumen en inglés Background: Cryptorchidism and oligozoospermia are clinical conditions closely associated with impaired fertility. Oxidative stress and related sperm DNA damage have been identified as significant causes of male infertility. Aim: To determine the extent of sperm nuclear DNA damage in patients affected with idiopathic oligozoospermia or undescended testes and to examine its relationship with oxidative stress. Patients and methods: We studied 20 patients with idiopathic oli (mas) gozoospermia and 18 with undescended testes (who previously underwent orchiopexy) and 25 normozoospermic healthy controls. All subjects underwent semen analysis. Sperm DNA damage was evaluated by the sperm chromatin structure assay/flow cytometry (SCSA-FCM) and by the dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL) assay. Levels of reactive oxygen species (ROS) and total antioxidant capacity (TAC) were assessed by a chemiluminescence assay. Results: DFI (percentage of sperm with denatured DNA) values and percentage of TUNEL positive cells were significantly greater in patients with oligozoospermia (DFI: 28.8±5.6; TUNEL+: 26.9±3.0) or cryptorchidism (DFI: 26.4±10.1; TUNEL+: 29.1±3.9), compared with controls (DFI: 7.1±0.9; TUNEL+: 14.2±1.2). Similarly, both groups of patients had significantly higher (p

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La historia natural del aclaramiento de espermatozoides en el semen tras la vasectomía/ The natural history of sperm clearance after vasectomy

Gómez de Vicente, J.M.; Romero Cagigal, I.; Blanco, C.; Pastor, J.; Moreno Santurino, A.; Santos Arrontes, D.; Miravalles, E.; Berenguer Sánchez, A.
2004-04-01

Resumen en español OBJETIVO: Estudiar el tiempo necesario para obtener un seminograma negativo tras la vasectomía. MATERIAL Y MÉTODO: Revisamos 239 vasectomías consecutivas durante un año. Todas ellas fueron realizadas de forma ambulatoria. El tiempo de seguimiento fue de 41-853 días (media 144, mediana 104). El primer seminograma fue solicitado entre 1 y 6 meses tras la intervención. A los pacientes que presentaron espermatozoides en la primera muestra de semen, se les solicitó una (mas) nueva muestra cada dos meses hasta que el seminograma fuese negativo. La probabilidad de azoospermia fue estudiada mediante curvas de Kaplan-Meier. RESULTADOS: Al final del periodo de seguimiento, 31 pacientes (13%) seguían teniendo espermatozoides en el seminograma. A pesar de ello, 10 pacientes (4,2%) dejaron de acudir a la consulta. El tiempo requerido para obtener un seminograma negativo osciló entre 58 y 362 días (media 133, mediana 99). La probabilidad de quedar azoospérmico a los 200 y 260 días tras la vasectomía, fue del 80 y 90% respectivamente. Se realizaron un total de 328 seminogramas (rango 1-4, media 1,37, mediana 1). CONCLUSIONES: Se necesita un mínimo de 200 días (6,6 meses) para que el 80% de nuestros pacientes queden azoospérmicos. Solicitar el primer seminograma 7 meses tras la vasectomía es rentable, reduciendo el número de visitas médicas innecesarias e incrementando la rentabilidad de esta prueba. Resumen en inglés OBJECTIVE: To study the time required to obtain a negative sperm analysis after vasectomy. MATERIAL AND METHODS: We reviewed 239 consecutive vasectomies performed between september 1998 and september 1999. All of them were done in an ambulatory basis. Follow up interval was 41-853 days (mean 144, median 104). The first semen analysis was requested between 1 and 6 months after the surgical procedure. If the sample still showed spermatozoa, then a new one was requested ever (mas) y two months. Probability of becoming azoospermic was studied with Kaplan-Meier curves. RESULTS: Persistent spermatozoa could be found in 31 patients (13%) at the end of follow-up. Despite having a positive semen analysis, 10 patients (4.2%) discontinued medical visits. Time required to obtain a negative sperm count ranged from 58 to 362 days (mean 133, median 99). The probability of being azoospermic 200 and 260 days after vasectomy was 80-90% respectively. A total of 328 semen analysis were requested (range 1-4, mean 1.37, median 1) CONCLUSIONS: A minimum of 200 days (6.6 months) are needed to clear all the spermatozoa in semen after vasectomy in 80% of our patients. Requesting the first semen sample 7 months after vasectomy is cost-effective, reducing unnecesary medical visits and increasing the rentability of this test.

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Evaluación de la unión espermatozoide-ADN exógeno en espermatozoides porcinos eyaculados y epididimarios/ Evaluation of binding sperm-exogenous DNA in ejaculate and epididimary porcine spermatozoa

García-Vázquez, FA; Gutiérrez-Adán, A; Gadea, J
2009-01-01

Resumen en español La transgénesis es una potente herramienta biotecnológica para la generación de animales modificados genéticamente con aplicaciones en diversas áreas como veterinaria, biomedicina y agricultura. En 1989 se describe un nuevo método para la producción de animales transgénicos, la transgénesis mediada por espermatozoides (SMGT). Este método está basado en la habilidad intrínseca de las células espermáticas para unir ADN exógeno y permitir su transferencia al i (mas) nterior de los ovocitos. El objetivo de este estudio fue comparar la capacidad de transferencia de ADN exógeno que presenta el espermatozoide eyaculado libre de plasma seminal vs epididimario, así como la viabilidad y cinética de unión mediante la citometría de flujo. Los resultados que obtuvimos mostraron que los espermatozoides epididimarios presentan una capacidad similar a los eyaculados y centrifugados tanto en el grado de unión al ADN (12,63 ± 1,23% vs 10,94 ± 1,05%, P = 0,31) como en la viabilidad (espermatozoides no viables 14,64 ± 0,94% vs 13,42 ± 0,61%, P = 0,23) a lo largo del tiempo de incubación. La mayor parte de dicha unión tiene lugar en los espermatozoides no viables para ambos tipos de espermatozoides (10,53 ± 1,01% vs 9,89 ± 0,97%, P = 0,98). En relación a la cinética de unión, observamos que para ambos grupos experimentales el mayor porcentaje de unión con el transgén ocurre en los primeros 15 minutos de coincubación, a partir del cual la unión se mantiene más o menos constante hasta los 120 minutos. Con este estudio hemos demostrado que tanto espermatozoides epididimarios como eyaculados son capaces de interactuar con el ADN exógeno, por lo que se podría utilizar la SMGT combinada con técnicas de reproducción asistida como la ICSI para la obtención de embriones y lechones transgénicos Resumen en inglés Transgenic biotechnology is a powerful tool for the generation of genetically modified animals with applications in various fields such as veterinary, agriculture and biomedicine. Sperm mediated gene transfer (SMGT) is an interesting tool for animal transgenesis consisting on the intrinsic ability of the spermatic cells to bind and internalize exogenous DNA and allow their transfer into oocytes after fertilization, to become part of the genome of the new embryo. The semin (mas) al plasma plays an important role acting as a natural barrier and protecting the spermatozoa from exogenous molecules that could compromise their integrity. So, the epididymal spermatozoa are a valuable model to explore the possible effect of seminal plasma components. The objective of this study was to evaluate the interaction among sperm and transgene using Epididymal (EP) vs Ejaculated (EJ) sperm without seminal plasma. Linealized plasmid (GFP) (5.7 kb) labelled with fluorescein was added (1x10(8) spermatozoa/ml + 5µg DNA/ml) and incubated at 16 ºC. DNA binding and viability were measured simultaneously by flow cytometry during 120 minutes of incubation. The results showed that EP spermatozoa present a similar DNA-binding ability (12.63 ± 1.23% vs 10.94 ± 1.05%, P = 0.31) and viability throughout the incubation (14.64 ± 0.94% vs 13.42 ± 0.61%, P = 0.23) than EJ. We only detected a greater percentage of living DNA-bound spermatozoa in EP compared to EJ (2.10 ± 0.33% vs 1.05 ± 0.14%, P

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Efecto de un surfactante sobre la integridad de espermatozoides ovinos crioconservados

HELLEMANN, C.; JARA, C.
1997-01-01

Resumen en español Con el objetivo de comprobar el efecto de la adición de un tensido comercial (Equex STM® a diluyentes tris y citrato de Na en la sobrevivencia de semen ovino, se realizaron 4 ensayos con diseño factorial de crioconservación de eyaculados de 2 carneros de raza Austral y un carnero Border Leicester, procesados separadamente. Fue común para todos los ensayos la dilución monofásica rápida a temperatura ambiente, en diluyentes con 20% (v/v) de yema de huevo, divididos (mas) en fracciones sin y con 0.5% (v/v) de Equex STM, el empaque en minitubos de 0.25 ml, períodos de adaptación a +5°C de 3 a 4 h, la curva de congelación en vapor de nitrógeno a 10 cm sobre la fase líquida de aproximadamente 5°C/min y la posterior descongelación en agua a 40°C por 15 s. Los criterios de evaluación del semen descongelado fueron el índice de motilidad (IM) y la integridad del borde apical de los acrosomas (AN). Los resultados se sometieron a análisis de varianza, test de Duncan y test de "t" (TWOSAM) del paquete STATGRAF 5.1, asumiendo p Resumen en inglés In order to test the effect of the addition of the commercial surfactant Equex STM to TRIS and Na-Citrate extenders on the survival of ram semen, four trials using factorial designs were conducted freezing separate ejaculates collected from 2 Austral and l Border Leicester rams. Common for all trials was a monophasic dilution at room temperature, with 20% egg-yolk containing extenders split in fractions with 0.5% and without surfactant, packing of extended semen in 0.25 M (mas) initüb-straws, an adaptation period at 5°C for 3-4 h, a freezing rate of about 5°C/min performed 10 cm above level of liquid nitrogen, and thawing of straws for 15 seconds in a 40°C water bath. Quality criteria for thawed semen were motility index (MI) and normal intact acrosomes (NA). With the use of STATGRAF 5.1, results were submitted to ANOVA and Duncan test, complemented with "t"-test (TWOSAM), assuming P

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Efecto de la heparina en la capacidad fecundante in vitro de espermatozoides caprinos/ Effect of heparin on the in vitro fertilizing ability of goat spermatozoa as assessed by heterologous solubilized zona pellucidae

COX, J.F.; FERNANDEZ, P.; SARAVIA, F.; BRIONES, M.; SANTA MARIA, A.
1997-01-01

Resumen en español El presente estudio está destinado a establecer la etapa del proceso de fecundación en que la heparina ejerce el efecto estimulatorio de la fecundación en caprinos. Oocitos bovinos fueron madurados en medio 199 y alternativamente utilizados para la producción de zonas pelúcidas solubilizadas o para estudios de fecundación. Las zonas pelúcidas, colectadas eliminando mecánicamente al oocito, fueron solubilizadas en ácido acético, liofilizadas y almacenadas a -20� (mas) � C, hasta su reconstitución. Los espermatozoides fueron colectados con vagina artificial, lavados y capacitados por incubación en medio Talp con suero y heparina. En el Experimento 1, los espermatozoides fueron suspendidos en Talp más heparina, Talp más heparina y zonas pelúcidas o en condiciones no capacitantes y fueron incubados por 90 min a 39° C y 5% de CO2 en aire. En el Experimento 2, los espermatozoides agrupados como en el experimento anterior fueron coincubados por 18 h con oocitos. En el Experimento 3, los espermatozoides fueron suspendidos en plasma seminal y Talp con y sin heparina e incubados por 90 min a los 0, 45 y 90 min, muestras de suspensión fueron expuestas a zonas solubilizadas e incubadas por otros 30 min. En los experimentos 1 y 3, el daño acrosomal fue evaluado usando la tinción PI/PSA y en el Experimento 2, la fecundación fue verificada por la presencia de pronúcleos y cola espermática en el oocito. Los resultados en el Experimento 1 muestran que a los 90 min de incubación el daño acrosomal aumenta en los espermios tratados con zonas en relación a los controles (P< 0.001). En el Experimento 2. sólo hubo fecundación en los grupos espermáticos incubados en condiciones capacitantes. En el Experimento 3, los resultados muestran que el daño acrosomal aumenta ya a los 45 min de incubación (P<0.01) Resumen en inglés Heparin has been shown to improve the fertilizing ability of goat spermatozoa in a dose-dependent manner. The present study assessed the mechanism involved in the stimulatory effect by using solubilized zona pellucidae from bovines. Bovine cumulus-oocyte complexes were matured in 199 plus serum and insuline. Thereafter, oocytes were denuded from granulosa cells and used either to obtain zona pellucidae or for fertilization. Free zonae were collected by mechanical means, (mas) solubilized in heated acetic acid, liofilized and stored at -20° C until their reconstitution in Talp plus serum. In Experiment 1, spermatozoa were suspended either in non-capacitated conditions or in Talp plus heparin and Talp plus heparin and zonae, and incubated for 90 min at 39° C in 5% CO2 in air. In Experiment 2, spermatozoa were grouped as before and co-incubated with matured oocytes for 18 hr to assess their fertilizing ability. In Experiment 3, spermatozoa were suspended either in seminal plasma, Talp plus heparin or Talp without heparin for 90 min. At 0, 45 and 90 min, semen samples were exposed to solubilized zonae and were further incubated for 30 min. Acrosome disruption in Experiment 1 and 3 was assessed by staining spermatozoa with PI/PSA. Fertilization in Experiment 2 was verified by the presence of pronuclei and sperm tail. The results in Experiment 1 showed that the acrosome disruption rate increased above the control groups after 90 min of incubation only in zonae-treated spermatozoa (P<0.001). In Experiment 2, fertilization was seen only when spermatozoa were previously incubated in conditions known to capacitate them. In Experiment 3, the results showed that the acrosome disruption rate first increased when spermatozoa were exposed to zonae after 45 min of incubation (P<0.01). The cumulative results suggest that heparin improves fertilization by stimulating sperm capacitation. The effect is expressed after 45 min of sperm incubation

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Efecto de la centrifugación sobre la membrana plasmática y el ADN de espermatozoides bovinos/ Effect of centrifugation on plasma membrane and DNA of bovine spermatozoa/ Efeito da centrifugação sobre a membrana plasmática e o DNA de espermatozóides bovinos

Urrego, Rodrigo; Ríos, Andrea; Olivera Ángel, Martha; Camargo, Omar
2008-03-01

Resumen en portugués O objetivo de este estudo foi determinar se a integridade da membrana plasmática e o DNA dos espermatozóides podem ser afetados pela centrifugação realizada no processo de lavado e seleção. Os espermatozóides foram submetidos a diferentes tempos de centrifugação (10, 30 e 45 min); foi utilizado um controle negativo com espermatozóides não centrifugados e um controle positivo com espermatozóides submetidos a estresse oxidativo com peróxido de hidrogênio (H2O2 (mas) ) (200 µM). Para avaliar a integridade da membrana foi utilizado o teste hipoosmótica (HOST) e para avaliar a fragmentação do DNA Fo utilizado o ensaio cometa: A análise estatística se realizou mediante o teste de Fisher. A centrifugação durante 10, 30 e 45 min, apresentou um efeito estatisticamente significativo sobre o dano no DNA, em relação aos espermatozóides não centrifugados (p0.05) na reação positiva à prova HOST, o qual ocorreu ao comparar os não centrifugados e os centrifugados por 45 min (p Resumen en español El objetivo de este estudio fue determinar si la integridad de la membrana plasmática y el ADN de los espermatozoides pueden ser afectados por la centrifugación realizada en el proceso de lavado y selección. Los espermatozoides fueron sometidos a diferentes tiempos de centrifugación (10, 30 y 45 min); se utilizó un control negativo con espermatozoides no centrifugados y un control positivo con espermatozoides sometidos a estrés oxidativo con peroxido de hidrógeno ( (mas) H2O2) (200 µM). Para evaluar la integridad de la membrana se utilizó la prueba hipoosmótica (HOST) y para evaluar la fragmentación del ADN se utilizó el ensayo cometa: El análisis estadístico se realizó mediante la prueba de Fisher. La centrifugación durante 10, 30 y 45 min, presentó un efecto estadísticamente significativo sobre el daño en el ADN, respecto de los espermatozoides no centrifugados (p0.05) en la reacción positiva a la prueba HOST, lo cual sí sucedió (p Resumen en inglés The aim of this study was to evaluate the effects of different times of centrifugation on plasma membrane integrity and DNA of bovine sperm cells, by means of the hyposmotic test (HOST) and the comet assay, respectively. The sperm cells were centrifuged at 700 x g for 10, 30 or 45 min. No-centrifuged thawed semen served as negative control whereas hydrogen peroxide (H2O2) (200 mM) treated sperm cells were used as a positive control. The results indicate that while the int (mas) egrity of the plasma membrane was not affected by centrifugation, bovine sperm DNA was damaged independently of centrifugation times. Significant differences between negative control and treatments were found (p

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Capacidad fecundante espermática luego de la recuperación de espermatozoides mediante la técnica de swim-up/ Spermatic fertilization capacity after swim-up spermatozoa recovery technique

Reina Bouvet, Beatriz; Vicenta Paparella, Cecilia; Nestor Feldman, Rodolfo; María Almará, Adriana; Nora Gatti, Vanda; Amalia Solis, Edita
2005-12-01

Resumen en español OBJETIVO: Evaluar en pacientes infértiles, la calidad espermática pre y post swim up y compararla con una población de hombres fértiles. MÉTODOS: De 55 pacientes que asistieron al Servicio de Reproducción del Hospital Centenario de Rosario a los que se efectuó espermograma y estudios funcionales espermáticos según normas OMS (1999), se seleccionaron 30 muestras de semen con volumen mayor de 1.0 ml, concentración de espermatozoides mayor de 5.000.000/ml y que no (mas) presentaban hiperviscosidad. Se compararon los resultados obtenidos de: movilidad progresiva (MP), morfología (M), condensación de la cromatina (CC) e integridad de la cromatina (IC), en el semen fresco sin tratar (G2) y luego del swim-up (G3), con los valores obtenidos en muestras de semen fresco de 15 hombres fértiles (G1). Se utilizó microscopio óptico para estudiar la movilidad espermática progresiva, tinción Hematoxilina-Verde Brillante para analizar la morfología, azul de anilina para evaluar la condensación de la cromatina y el fluorocromo naranja de acridina para analizar la integridad de la cromatina. La técnica de recuperación espermática utilizada fue el swim-up, que se realizó en medio HTF, incubando en tubo Falcon a 45 ° en estufa de 37 °C gaseada (atmósfera de CO2 5%) durante 1 hora. Luego se tomaron de la capa superior los espermatozoides que sobrenadaron, en los que se efectuaron las prácticas post swim-up. Se aplicó la prueba t - Student a los valores de los parámetros MP, M, CC e IC en los 3 grupos de pacientes, observándose diferencia significativa para los cuatro parámetros al comparar G1 vs. G2 y G2 vs. G3 (p0.1), lo cual indica que los parámetros estudiados MP, M, CC e IC, en los espermatozoides recuperados del swim-up, son semejantes a la población de hombres fértiles. RESULTADOS: Estos resultados muestran que mediante swim-up se pueden recuperar gametas con capacidad fecundante potencial semejante a la población fértil, para aplicar en técnicas de reproducción asistida de baja complejidad, como la inseminación intrauterina, donde la selección natural es aún viable. Resumen en inglés OBJECTIVES: To investigate sperm quality before and after swim up in infertile patients, and to compare it with a fertile men population. METHODS: Semen samples from 55 patients consulting at the infertility services of the Hospitals "Centenario" in Rosario and "Eva Perón" in Gro Baigorria were collected and analyzed accordingly with the WHO guidelines. 30 sperm samples with a volume higher than 1.0 ml, and spermatozoid concentration higher than 5.000.000/ml, not present (mas) ing hyperviscosity were selected. Outcome variables including progressive mobility (PM), morphology (M), chromatin condensation (CC) and chromatin integrity (CI), were compared in fresh semen samples, between patients without previous treatment (G2) and after swim up (G3) and 15 fertile men (G1). Sperm morphology was evaluated by brilliant green hematoxyllin stain;progressive mobility with a subjective method accordingly to WHO (1999); chromatin condensation with aniline blue test; and chromatin integrity with acridine orange as fluorocrom. Swim up technique was based on Berger et al. (1985) with mHTF, heatingthe samples in a Falcon tube in a 45º angle in a 37ºC gas heater for one hour (5% C02 atmosphere). Following incubation 0.5 ml of the overlay containing sperm cells that swam up from the pellet were removed to process the recoveredspermatozoids. Student’s t test was applied to compare PM, M, CC, and CI between the four groups. A significant difference was found between G1 vs G3 and G2 vs G3 (p 0.1). It showed that PM, M, CC and CI parameters in the recovered spermatozoids after swim up were similar to fertile population. CONCLUSIONS: Our results indicate that through the swim up procedure gametes with fertile ability similar to normal fertile population can be recovered to be applied in low complexity in vitro fertilization techniques such as intrauterine insemination, where the natural selection is still viable.

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Influencia del proceso analítico en la aparición y desaparición de los espermatozoides del semen tras la vasectomía/ Influence of the analytical process in the appearance and disappearance of the spermatozoa after vasectomy

Cháfer Rudilla, M.; Navarro Casado, L.; Belilty Araque, M.; Andrés Fernández, C.; Quintanilla Mata, M.
2007-03-01

Resumen en español Objetivo: Evaluar si el proceso analítico puede justificar que en algunos pacientes se observen espermatozoides residuales en algunos de sus espermiogramas para el control de la vasectomía, pero no en todos. Material y métodos: Se revisaron los controles de las vasectomías realizadas desde enero de 2002 a diciembre de 2004. Nuestro protocolo consiste en una adaptación a nuestro medio de las recomendaciones de la Sociedad Británica de Andrología para el control de l (mas) a vasectomía y de la Organización Mundial de la Salud para el análisis seminal. Resultados: Durante los 3 años del estudio se ha intervenido a 984 pacientes de vasectomía y se recibieron una media de 2 muestras por paciente. En relación a la calidad de la fase preanalítica, 134 pacientes (9,4%) refirieron no haber recogido todo el eyaculado; los volúmenes de semen fueron inferiores a 2.0 mL en 269 especímenes (18,8%) y existían dudas de que los eyaculados fueran completos; en 11 casos, las condiciones preanalíticas fueron incorrectas: contenedores mal etiquetados, derramados o inadecuados. Con respecto a la fase analítica, en 432 eyaculados (30,5%) se encontraron alteraciones de la consistencia; 62 especímenes (4,3%) contenían abundantes células y obstruían la visualización microscópica. En cuanto a la fase postanalítica, 153 pacientes (20,9%) obtuvieron informes con resultados alternativos de azoospermia y de presencia de espermatozoides residuales. Conclusiones: Se produce un elevado porcentaje de incidencias en la fase preanalítica y la analítica en los controles de los pacientes vasectomizados. Estas condiciones inadecuadas pueden afectar los resultados y justificar que los espermatozoides residuales se observen o no en los eyaculados de algunos pacientes. Recomendamos realizar un mínimo de dos espermiogramas por paciente para asegurar su correcta evaluación. Proponemos informar los resultados negativos como un recuento inferior al límite de detección de nuestra técnica de manera similar a otras magnitudes del laboratorio para minimizar el efecto de la fluctuación de los recuentos en estos niveles tan bajos. Resumen en inglés Objectives: To evaluate if the analytical process might justify that in some patients rare non motile sperm might be seen in some but not all their post-vasectomy semen samples. Patients and methods: Post vasectomy ejaculates received in our Center from january 2002 to december 2004 were reviewed. We used our own guidelines for post vasectomy semen assessment based upon those of the British Andrology Society for the evaluation of post vasectomy semen samples and the World (mas) Health Organization guidelines for semen analysis. Results: During the 3 years of follow up, 984 patients underwent vasectomy. We received 1.430 semen samples, 2 samples per patient on average. Regarding the pre analytical phase, 134 samples (9.4%) were not completely collected; ejaculate volumes of less than 2 mL were delivered by 269 patients (18.8%); in these cases, we were not sure whether the whole ejaculates were submitted; pre analytical conditions of 11 samples (0.8%) were inappropriate: incorrectly labeled, spilled, provided into inadequate containers... Regarding the analytical phase, 432 ejaculates (30.5%) were extremely viscous and sperm detection might have been affected; 62 semen samples (4.3%) contained many cells which obstructed the visualization of the entire microscopy field. Regarding the post analytical phase, 153 patients (20.9%) had alternative negative/positive results with rare non motile sperm. Conclusion: An elevated percentage of incidences involving both the pre analytical and the analytical phase were observed during post-vasectomy seminal analysis. Inadequate conditions may affect the results and justify that spermatozoa may be seen in some but not all the ejaculates of the same patient. We recommend that two semen samples per patient are required to ensure that he is correctly evaluated. We propose to report a negative result as a spermatozoa count bellow the detection limit of our analytical procedure similar to other laboratory magnitudes to minimize the effect of fluctuations in such a low count of rare non motile sperm.

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Evaluación de diferentes crioprotectores para la crioconservación de espermatozoides de yamú (Brycon amazonicus)/ Evaluation of different cryoprotectors for cryopreservation of yamú (Brycon amazonicus) spermatozoa

Cruz Casallas, Pablo E; Medina Robles, Víctor M; Velasco Santamaría, Yohana M
2006-06-01

Resumen en español El uso de dimetilsulfoxido (DMSO), etilenglicol (ETG), propilenglicol (PPG) y metanol (MET) para la crioconservación de semen de yamú (Brycon amazonicus - Spix & Agassiz 1829) fue evaluado con el objetivo de determinar la calidad post-descongelación y la fertilidad in vitro del semen. Para este propósito, machos y hembras, sexualmente maduros fueron inducidos a la maduración final de las gónadas por medio de extracto de hipófisis de carpa. El semen obtenido fue eva (mas) luado y diluido (1:4) en una solución a base de yema de huevo (12%) y glucosa (5.5%). Se utilizó cada crioprotector a concentraciones de: 3.75, 5, 7.5, 10, 11.25 y 15% para un total de 24 tratamientos. El semen diluido fue empacado en pajillas de 0.5 mL para ser congelado en vapores de nitrógeno líquido (NL) a -194 °C durante 30 min y luego transferidas y almacenadas hasta por 10 días en un termo de NL para su evaluación. Para las pruebas de fertilidad, las pajillas (n= 6) de cada uno de los tratamientos fueron descongeladas a 35 °C por 60 seg y posteriormente evaluadas. Se encontró que los tratamientos DMSO-5%, ETG-3.75%, PPG-3.75% y MET-3.75% presentaron los mayores porcentajes de movilidad (PM) y tiempos de activación (TA), siendo DMSO-5% el más alto (PM 76 ± 2.4; TA 88.2 ± 6.1). De otro lado, los tratamientos PPG-3.75% y MET-3.75% mostraron los mayores porcentajes de fertilidad (50 ± 1.4 y 47.8 ± 1.4, respectivamente), pero fueron inferiores (p Resumen en inglés The effect of dimethyl sulphoxide (DMSO), ethylene glycol (ETG), propylene glycol (PPG) and methanol (MET) in yamú (Brycon amazonicus - Spix & Agassiz, 1829) semen cryopreservation was evaluated with the aim of determining the post-thawing quality and in vitro fertility. For this purpose, sexually mature yamú females and males were induced to promote ovulation and spermation with carp pituitary extract. The semen obtained was evaluated and diluted 1:4 in a solution with (mas) 12% egg yolk and 5.5% glucose. Different concentrations (3.75, 5, 7.5, 10, 11.25 and 15%) for each one of the 4 cryoprotectants were used for a total of 24 treatments. The diluted semen was frozen into 0.5 mL straws by liquid nitrogen vapours (LN) during 30 minutes and then transferred to a container with LN until be assayed. The straws (n= 6) corresponding to each treatment were thawed at 35 °C for 60 seconds and evaluated to select the best concentration for each cryoprotector for the fertility test. 5% DMSO, 3.75% ET, 3.75% PPG and 3.75% MET treatments presented the highest motility percentages (MP) and activation time (AT) being 5% DMSO the best (MP 76 ± 2.4; AT 88.2 ± 6.1). On the other hand, 3.75% PPG and 3.75% MET treatments showed the highest fertility percentages (50 ± 1.4 and 47.8 ± 1.4, respectively); however, these percentages were significantly lower (p

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Caracterización funcional y localización del receptor GM-CSF en espermatozoides bovinos/ Functional characterization and localization of GM-CSF receptor in bovine spermatozoa

VILANOVA, L. T.; RAUCH, M. C.; ZAMBRANO, A.; BRITO, M.; WERNER, E.; CONCHA, I. I.
2003-12-01

Resumen en español El Factor Estimulador de Colonias de Macrófagos y Granulocitos (GM-CSF) es una citoquina pleiotrópica que tiene como principal función regular la proliferación y diferenciación celular de los precursores de células mieloides, así como también estimular el funcionamiento de granulocitos mononucleares maduros y fagocitos. Su receptor es una glicoproteína compuesta por dos subunidades, a y ß, que se expresan en células mieloides precursoras y maduras, así como ta (mas) mbién en otras células no hematopoyéticas. Nosotros hemos demostrado recientemente que los espermatozoides bovinos expresan receptores de GM-CSF funcionales que señalizan un aumento del transporte de glucosa y vitamina C. En este estudio se determinó la presencia de este receptor en espermatozoides epididimarios y eyaculados, localizándose la subunidad a en la región acrosómica y en la cola de los espermatozoides, y la subunidad ß en la cola espermática. Mediante análisis computarizado del movimiento espermático se encontró que el GM-CSF aumenta el patrón de movimiento espermático en la mayoría de las variables seminales estudiadas en espermatozoides capacitados en presencia de fructosa. Estos hallazgos sugieren que GM-CSF es una molécula clave para el mejor entendimiento de la fisiología espermática Resumen en inglés The granulocyte-macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) is a pleiotropic cytokine with the main function of regulating the proliferation and differentiation of myeloid precursor cells as well as to stimulate the functioning of mature mononuclear granulocytes and phagocytes. Its receptor is a glycoprotein formed by two subunits, a and ß, and it is expressed in precursor and mature myeloid cells, as well as in some nonhematopoietic cells. We have recently demonstrate (mas) d that bull spermatozoa express functional GM-CSF receptors that signal an increased glucose and vitamin C uptake. The presence of GM-CSF receptor in epididymal and ejaculated spermatozoa was determined in this study and the a subunit was found in the acrosome and tail of the spermatozoa whilst the ß subunit was restricted to the tail. Computer assisted sperm analysis (CASA) demonstrated that the addition of GM-CSF to capacitated sperm in the presence of fructose increased the patterns of sperm motility in the majority of the variables analysed. Altogether, these findings suggest that GM-CSF is a key molecule to the better understanding of sperm physiology

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Efecto de la criopreservación sobre la integridad de la membrana plasmática y acrosomal de espermatozoides de toros/ Effect of Cryopreservation on Integrity of Plasmatic and Acrosomal Membrane of Bulls Sperm

Rubio-Guillén, Jorge L; Quintero-Moreno, Armando A; González Villalobos, Decio M
2009-08-01

Resumen en español La integridad de la membrana plasmática (MP) y acrosomal (MA) han sido dos de los parámetros de valoración seminal más estudiados por su rol preponderante como límite celular y por ser responsable de hacer efectivas las interacciones entre células, tanto en términos de integridad morfológica, como funcional. El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de la criopreservación sobre el porcentaje de espermatozoides vivos (VIT), acrosomas dañados (DAR), y l (mas) a integridad estructural y funcional de la MP y MA de espermatozoides provenientes de 5 eyaculados frescos y 5 pajuelas descongeladas de 4 toros mediante frotis teñidos con eosina-nigrosina. La integridad funcional de estas membranas fue evaluada mediante los tests osmóticos (HOST y ORT). Los datos obtenidos fueron analizados con el procedimiento GLM (SAS®) y cuando se observaron diferencias se cuantificaron los efectos mediante el LSMEANS. Todos los valores de calidad espermática estudiados fueron afectados significativamente por la criopreservación (VIT, DAR, ORT y HOST). El proceso de congelación-descongelación causó un marcado efecto detrimental sobre la integridad estructural y funcional de la MP y MA de los espermatozoides evaluados (P Resumen en inglés Plasmatic and acrosomal membrane integrity has been used as valuable information for determining sperm quality, because is important to know the morphological and functional role as cellular delimitation and in effective cell interactions. The aim of this study was to determine cryopreservation effects on sperm percentage of vitality, number of damaged acrosomes (DAR), the structural and functional sperm plasma membrane integrity in 5 fresh ejaculates and 5 thawed strauws (mas) of 5 bulls by using the eosin-nigrosin stain. The functional integrity of these membranes were evaluated by osmotic tests (HOST and ORT). The data was analysed by GLM procedure, and when differences were detected, LSMEANS was used to quantify the effects. Significant differences were found on seminal quiality parameters (VIT, DAR, ORT and HOST) between fresh and thawed sperm. Freezing-thawing procedure had detrimental effect on the integrity structural and functional of MP and MA in the spermatozoa evaluated (P

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Efecto del levonorgestrel como anticonceptivo oral de emergencia en la ovulación, el endometrio y los espermatozoides/ Effect of levonorgestrel in the ovulation, endometrium, and spermatozoa for emergency oral contraception

Suárez, Víctor J.; Zavala, Renzo; Ureta, Juan Manuel; Hijar, Gisely; Lucero, Jorge; Pachas, Paul
2010-06-01

Resumen en español Existe amplia controversia acerca del mecanismo de acción del levonorgestrel como anticonceptivo oral de emergencia; numerosas organizaciones, tanto científicas como de la sociedad civil, muestran su disconformidad con su uso, debido a su posible acción como inductor de aborto. Con el objetivo de evaluar la evidencia científica disponible sobre los mecanismos de acción del levonorgestrel utilizado como anticonceptivo oral de emergencia (AOE), se realizó una revisió (mas) n sistemática en las bases de datos Medline y Cochrane Library donde se encontró 444 artículos; después de revisar los resúmenes, se seleccionó 22 artículos, los cuales fueron evaluados a texto completo. Se encontró que el principal mecanismo de acción del levonorgestrel, a las dosis recomendadas como AOE, es la inhibición o retraso de la ovulación; no afecta a los espermatozoides en su capacidad de migración ni de penetración al óvulo. No se ha demostrado alteraciones morfológicas ni moleculares en el endometrio que puedan interferir con la implantación del huevo fecundado. No existe evidencia científica actual disponible que sustente que el uso de levonorgestrel como AOE sea abortivo. Resumen en inglés There is wide controversy about the mechanism of action of the levonorgestrel used for emergency oral contraception, and many organizations, both scientific as well as from the civil society, show their discrepancy with its use, due to its possible action as an abortion- inducer. In order to evaluate the scientific evidence available on the mechanisms of action of the levonorgestrel used for emergency oral contraception (EOC), a systematic revision was performed in the Me (mas) dline and Cochrane library databases. We found 444 articles. After reviewing the abstracts, we selected 22 articles, whose complete texts were evaluated. We found that the main mechanism of action of the levonorgestrel, given at the doses recommended for EOC, is the inhibition or retardation of the ovulation, it doesn’t affect the spermatozoa in their migration or egg-penetration capacities. No morphological or molecular alterations in the endometrium that could interfere with the implantation of the fertilized egg have been demonstrated. There is no actual scientific evidence available supporting that the use of levonorgestrel for EOC is abortive.

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Evaluación de la calidad del espermatozoide humano: comparación entre la integridad del ADN espermático y variables del semen/ Evaluation of the quality of the human spermatozoon: comparison between spermatic DNA integrity and semen variables

Cruz, Ibis; Colmenares, Melisa; Berrueta-Carrillo, Leidith; Gomez-Perez, Roald; Montes, Henry; Berrueta, Lisbeth; Salmen, Siham; Osuna, Jesús Alfonso
2010-03-01

Resumen en español El análisis del semen no tiene valor predictivo absoluto de fertilidad, pero informa sobre el potencial de fertilidad del varón, el cual está relacionado con la calidad de sus espermatozoides y de otras variables del semen. Se ha comprobado que los valores del semen pueden mostrar gran variabilidad en un mismo individuo. Esto explica por que un hombre cuyas variables no son absolutamente normales, puede lograr un embarazo en su pareja. Dentro de los parámetros tradici (mas) onalmente utilizados en la evaluación clínica de la fertilidad masculina se encuentran: la concentración, la movilidad y la morfología espermática; además de medir estas variables, nuevos procedimientos han sido incorporados para evaluar la capacidad funcional de los espermatozoides, uno de los que ha alcanzado particular importancia en la última década es la medida de la integridad del ADN nuclear. La fragmentación del ADN consiste en interrupciones en las cadenas simples o dobles del ADN que ocurre frecuentemente en la muestra de pacientes no fértiles. Se ha llevado a cabo un estudio clínico, en muestras de semen provenientes de pacientes que acudieron al laboratorio de Andrología de la Universidad de los Andes, colectadas entre marzo del 2007 y marzo del 2009, a fin de establecer comparaciones entre los parámetros convencionales y la medición de la integridad de la cromatina espermática, mediante citometría de flujo. Los resultados obtenidos mostraron correlaciones evidentes entre los parámetros convencionales y la integridad del ADN espermático y aportan datos de gran utilidad en el estudio clínico integral de la infertilidad masculina. Resumen en inglés Semen analysis does not have an absolute predictive value on fertility, however it is a reflection of male fertility potential, which is related to its spermatozoa quality and other semen variables. Great variability in human semen parameters has been demonstrated within a single individual, an observation that could explain why a male with low semen quality can successfully fertilize an egg. Although conventional semen analysis, such as sperm concentration, motility and (mas) morphology, provide important information about the clinical status of male fertility, new procedures to predict the sperm functional capability have been developed in the last decade, such as analysis of nuclear DNA integrity, which have improved considerably the clinical diagnosis of male infertility, and increased the knowledge about spermatozoa function. DNA fragmentation consist in interruptions, both in single and double DNA strains, that frequently occur in sperm samples from infertile patients. We have conducted a clinical study in semen samples from patients who have attended the Andrology laboratory of the University of Los Andes, between March 2007 and March 2009. The aim of this study was to compare sperm DNA integrity, analyzed by flow cytometry, with traditional semen parameters. Our results show remarkable correlations between conventional human semen variables and sperm chromatin integrity, contributing to asses an integral evaluation of sperm quality allowing the analysis of its fertilizing potential in clinical studies.

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Genotoxic assessment of aqueous extract of Rhizophora mangle L. (mangle rojo) by spermatozoa head assay/ Evaluación genotóxica del extracto acuoso de Rhizophora mangle L. (mangle rojo) mediante el ensayo de la cabeza del espermatozoide

Carnesoltas Lázaro, Deyanira; Izquierdo López, Yanisey; Frías Vázquez, Ana Iris; Domínguez Odio, Anibal; González, Jorge Ernesto; Sánchez, Luz María; García Delgado, Neivys
2010-03-01

Resumen en español INTRODUCCIÓN: el extracto acuoso de Rhizophora mangle L. (mangle rojo), se ha usado tradicionalmente en Cuba por su amplio espectro de propiedades curativas: como astringente, hemostático, febrífugo y antifúngico. Los estudios previos de caracterización química del extracto acuoso liofilizado de la corteza de la planta revelaron que los taninos son los componentes principales, aunque también se ha descrito la presencia de otros compuestos como las epicatequinas, el (mas) ácido clorogénico, ácido gálico y ácido elágico, así como galotaninos. OBJETIVO: el presente estudio fue diseñado para determinar si alguno de los componentes del extracto tiene la capacidad para producir efectos genotóxicos en células germinales de ratones Cenp:NMRI utilizando el ensayo de anormalidades de la cabeza del espermatozoide. MÉTODOS: el extracto liofilizado fue administrado por vía oral (500, 1 000 y 2 000 mg de material vegetal/kg) en 3 series del protocolo clásico de Wyrobeck y Bruce, en intervalos de 24 h por 5 d consecutivos. RESULTADOS: en la serie I los animales fueron sacrificados el dia 4 después de iniciada la administración. En la serie II los animales fueron sacrificados el día 21, mientras que en la serie III fueron sacrificados el día 35. CONCLUSIONES: no se observó efecto citotóxico en las 3 series y en todas las dosis probadas, y solamente la dosis mayor del extracto en la serie I provocó un ligero efecto genotóxico al incrementar el porcentaje de espermatozoides anormales. Resumen en inglés INTRODUCTION: the aqueous extract bark of Rhizophora mangle L. (red mangrove) has traditionally been used in Cuban folk medicine due to its wide array of curative properties: astringent, haemostatic, febrifuge and antifungal. Previous chemical characterization studies of the liophylized aqueous extract bark, revealed that tannins are the main components, although the presence of other compounds such as epicatechin, catechin, clorogenic, gallic and ellagic acids, as well a (mas) s galotannins have been also described. OBJECTIVE: this work was designed to determine if any components of the extracts has the ability to produce genotoxic effects in germ cells of Cenp:NMRI mouse models using the abnormal shape of spermatozoa test. METHODS: the lyophilized aqueous extract bark was given by oral gavages (500, 1000 and 2000 mg of total solids /kg bw) in three series of the classical protocol of Wyrobeck and Bruce, in intervals of 24 hrs for 5 days. RESULTS: in series I, the animals were sacrificed on day 4 after starting the administration. In series II the animals were sacrificed on day 21 while in series III the day of sacrificed was the 35th. CONCLUSIONS: no cytotoxic effect was observed in the 3 series and in all doses proved and only the highest dose of the extract in the series I provoked a slight genotoxic effect when increase the percentage in the number of abnormal spermatozoa.

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Fisiología de la activación del espermatozoide en peces de agua dulce/ Spermatozoa activation physiology in freshwater fish

Tabares, Carlos J; Tarazona, Ariel M; Olivera Ángel, Martha
2005-08-01

Resumen en español El principal objetivo de esta revisión fue el estudio de los mecanismos que regulan la movilidad espermática en peces de agua dulce, dada su importancia en el desarrollo de biotecnologías para la conservación de sus gametos, los cuales una vez producidos en el testículo, se capacitan en el conducto espermático donde permanecen inmóviles por factores como el balance iónico, la osmolaridad, el pH o algunas proteínas. En el momento de la liberación de los espermato (mas) zoides al medio acuoso, estos son activados por un periodo de tiempo muy corto. En teleósteos de agua dulce, el choque hiposmótico induce cambios de potencial de membrana que conducen a la regulación de canales iónicos de K+ y de Ca2+, seguida por un flujo iónico que desencadena la cascada de activación. Muchas investigaciones se han enfocado en el estudio de la osmolaridad, el balance iónico, el pH y factores dependientes de AMPc y Ca2+; asociados con la activación de la movilidad espermática. De esta forma, los mecanismos fisiológicos de la activación han ganado interés para comprender los procesos por los cuales el espermatozoide adquiere la hipermovilidad para alcanzar el oocito y penetrar el micrópilo antes del cierre del mismo. Resumen en inglés This review pretended to study the regulation of spermatozoa motility in freshwater fish, improving biotechnology development focused on gametes preservation, which are produced into the testes. Spermatozoa gets capacitation and stays non- motil due to different factors such as ionic balance, osmolality, pH, and some proteins. After release to the freshwater, the teleost spermatozoa get activated during a very short period, due to hiposmotic shock, producing membrane pote (mas) ntial changes, allow regulation of K+ and Ca2+ channels, followed by an ionic flow that trigger the activation. During the last years, investigations focused on the osmolality, ionic balance, pH and AMPc and Ca2+ dependent factors; associated to spermatozoa motility activation. In this way, understanding spermatozoa hipermotility process to reach and enter the egg´s micropile before closing, has increased interest in the physiological activation mechanisms

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Valoración morfométrica de la cabeza del espermatozoide del cerdo doméstico según su edad/ Morphometric Evaluation of Sperm Head of Domestic Pig According their Age

Quintero-Moreno, Armando; González-Villalobos, Decio; López-Brea, José Julián; C. Esteso, Milagros; Fernández-Santos, María Rocío; Carvalho-Crociata, José L.; Mejía-Silva, Willian; León-Atencio, Gonzalo
2009-04-01

Resumen en español Se utilizó el Análisis Automatizado de la Morfometría Espermática (ASMA) con el fin de determinar las dimensiones de la cabeza del espermatozoide (DCE) en semen de cerdos domésticos según la edad, además de agrupar las medidas obtenidas en subpoblaciones espermáticas (SP). Se evaluaron 36 muestras de semen fresco y diluido de 20 cerdos los cuales se clasificaron en dos categorías. A: menores de 18 meses de edad y B: mayores de 18 meses de edad. Las DCE (Largo, µ (mas) m/ Ancho, µm/ Área, µm² y Perímetro, µm) se analizaron en frotis teñidos con Hemacolor® mediante Sperm-Class Analyser® (SCA) y los valores obtenidos guardados en una base de datos. El procedimiento GLM fue utilizado para evaluar el efecto de la edad del cerdo sobre las DCE y el análisis de agrupamiento (FASTCLUS) para identificar las SP. Los espermatozoides provenientes de cerdos mayores de 18 meses de edad presentaron mayor longitud (8,84 vs. 8,95 µm) que los cerdos menores de 18 meses de edad, sin embargo, las medias correspondientes al ancho (4,44 vs. 4,32 µm), área (33,33 vs. 32,39 µm²) y perímetro (27,65 vs. 26,3 µm) fueron más pequeñas en los cerdos de mayor edad. Dos SP fueron obtenidas con el fin de ratificar las diferencias observadas entre las 2 categorías de edades evaluadas (P Resumen en inglés Assisted Sperm Morphometry Analysis (ASMA) was used to determine the sperm head dimensions (DCE) of boar by age, and then the data set clustered in sperm subpopulations (SP). To this purpose were evaluated 36 fresh and diluted semen samples of 20 Dalland domestic pigs, which were classified in 2 categories: under 18 months old and over 18 months old. The DCE (Length, µm/ Width, µm/, Area, µm²/ and Perimeter, µm) were analyzed in slides stained by Hemacolor® by the S (mas) perm-Class Analyser® (SCA), and the mean measurements recorded. A GLM procedure was performed to evaluate the effects of boar age on sperm head dimensions and clustering analysis (FASTCLUS procedure) to separate in SP. Spermatozoa collected from older boar (over 18 months old) had head length larger (8.84 vs. 8.95 µm) than younger boar (under 18 months old), however, the width (4.44 vs. 4.32 µm), area (33.33 vs. 32.39 µm²) and perimeter (27.65 to 26.3 µm) were smaller in older boar than younger boar. Two SP were clustered in this trial to ratify the differences between younger and older pigs. The mean values of each DCE among the SP were significantly different (P

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¿Existe asociación entre la morfología normal del espermatozoide y su cinética de desplazamiento?/ Is there an association between sperm normal morphology and their kinetic displacement?

Munuce, M.J; Cardona-Maya, W; Berta, CL
2006-06-01

Resumen en español Objetivo: Evaluar si existe asociación entre el % de formas normales y la cinética de desplazamiento en espermatozoides humanos. Material y métodos: Se analizaron en forma retrospectiva los espermogramas de 203 pacientes evaluados mediante la ayuda de un sistema computarizado de análisis de movimiento. La evaluación de la morfología se realizó en forma micrométrica según el criterio estricto. Sólo se incluyeron los pacientes que presentaron >20 x 106 esp/ml y >5 (mas) 0% de motilidad progresiva. Los datos de 168 pacientes fueron divididos según el % de formas normales iniciales en tres grupos a) 14% (n=57) y se compararon los datos obtenidos. Con el objeto de seleccionar espermatozoides móviles, 35 muestras fueron tratadas con un gradiente discontinuo, evaluándose tanto el % de formas normales como los parámetros de movilidad basales y luego de la selección. Resultados: El análisis cinético mostró que tanto la concentración, el % de espermatozoides móviles y rápidos (>25 µm/s), así como la velocidad media (VAP) y el desplazamiento de la cabeza (LHD) se vieron incrementados con la cantidad de espermatozoides morfológicamente normales presentando los valores más bajos en el grupo 14%, (p Resumen en inglés Objective: To evaluate if there exist an association between the % of normal forms and the kinetic characteristics in human spermatozoa Material and Methods: A retrospective study was performed to analyze semen samples of 203 patients by Computer Assisted Semen Analysis. Sperm morphology was evaluated by the aid of a micrometric objective according to strict criteria. Only the patients presenting >20 x 106 sperm/ml and > 50% of progressive motility were included. Data fro (mas) m 168 patients were divided according to the % of normal forms in three groups a) 14% (n=57). Data collected among groups were compared. In order to select a motile sperm population 35 samples were treated by a discontinuous gradient and the % of normal forms as well as motility parameters evaluated before and after selection. Results: The kinetic analysis showed that sperm concentration, the % of motile and rapid spermatozoa (>25 µm/s) as well as the average path velocity (VAP) and the lateral head displacement (LHD) were increased in association with the % of normal spermatozoa presenting the lowest values in the group 14% group, (p

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Evaluación de la reacción acrosomal inducida por el ionóforo de calcio: una aproximación mas real de la capacidad fecundante del espermatozoide/ Evaluation of the calcium ionophore induced acrosome reaction: a more realistic approach to the fecundant capacity of th spermatozoid

Cardona Maya, Wálter Darío; Olivera Ángel, Martha; Cadavid, Ángela Patricia
2006-06-01

Resumen en español Objetivo: Evaluar la reacción acrosomal inducida por el ionóforo de calcio en espermatozoides de un grupo de individuos con fertilidad desconocida. Método: Cada individuo donó una muestra de semen la cual fue evaluada para determinar la cantidad de espermatozoides que presentaban reacción acrosomal al estimularlos con el ionóforo de calcio después de la capacitación espermática. Se utilizó la lectina Pisum sativum aglutinina (microscopía de fluorescencia) y el (mas) anticuerpo anti-CD46 (citometría de flujo). Resultados: Cinco de los seis individuos presentaron un aumento en el número de espermatozoides reaccionados al estimularlos con ionóforo de calcio comparado con el porcentaje de espermatozoides que presentaron reacción acrosomal espontánea tanto por microscopía de fluorescencia (7.4 +/- 2.4 vs 22.5 +/- 10.1), como por citometría de flujo (8.5 +/- 2.8 vs 25.4 +/- 6.0); en el otro individuo los valores de la reacción acrosomal con el ionóforo de calcio fueron similares a los de la reacción espontánea. Conclusiones: Ambas técnicas son útiles para evaluar in vitro la capacidad de los espermatozoides para sufrir la reacción acrosomal posterior a la capacitación, sin necesidad de que exista fusión entre el espermatozoide y el oocito, pero la citometría de flujo es mas objetiva y permite visualizar un mayor número de células. De otro lado, aunque el individuo que no respondió al estímulo con el ionóforo de calcio tiene fertilidad desconocida, los resultados obtenidos permiten proponer que la evaluación de la reacción acrosomal podría ser una herramienta útil en el estudio de los hombres que consultan por infertilidad. Resumen en inglés Objectives: The aim of this investigation was to evaluate the acrosome reaction by fluorescence microscopy and the .ow citometry in a group of men with unknown fertility. Methods: Each individual gave a semen sample for the analysis of the calcium ionophore-induced acrosome reaction after the capacitation process, using lectin Pisum sativum aglutinina (fluorescence microscopy) and antibody anti-CD46 (flow citometry). Results: Five of out six individuals increased the numb (mas) er of the sperm with calcium ionophore-induced acrosome reaction versus the percentage of spontaneous acrosome reaction, using fluorescence microscopy (7.4 +/- 2.4 vs 22.5 +/- 10.1) and .ow citometry (8.5 +/- 2.8 vs 25.4 +/- 6.0); On the other hand, the other individual the values of the acrosomal reaction with calcium ionophore A23187 were similar to those of the spontaneous reaction. Conclusions: Both techniques are useful to evaluate the in vitro capacity of the spermatozoa to undergo acrosomal reaction, after the capacitation, without fusion between the sperm and the egg, but the .ow citometry is more objective and allow the detection of a higher cell numbers of cells. On the other hand, although the individual that did not respond to the stimulus with calcium ionophore has unknown fertility, the obtained results allow to propose that the evaluation of the acrosomal reaction could be a useful tool in the study of the men who consult for infertility.

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Uso de la prueba hipoosmótica en la evaluación de la fertilidad potencial de semen canino fresco y congelado/ Evaluation of fresh and frozen canine semen by the hypoosmotic swelling test

SANCHEZ, A.; RUBILAR, J.; GATICA, R.
2002-01-01

Resumen en español Se estudió la integridad de la membrana espermática en espermatozoides caninos en semen fresco y en semen congelado/descongelado, mediante la prueba hipoosmótica y las correlaciones de dicha prueba con algunos parámetros de evaluación usados de rutina en el estudio de semen de perro, usando 20 eyaculados. El semen se obtuvo por manipulación digital. A través de un espermiograma convencional se obtuvo un volumen promedio 1.9 ± 0.9 ml (1ª y 2ª fracciones), 83.8% d (mas) e motilidad progresiva, 92.0% de espermatozoides vivos, y 83.5% de espermatozoides normales. La concentración espermática fue de 325 x 10(6) espermatozoides por ml. Se realizó la prueba hipoosmótica para evaluar la funcionalidad de la membrana espermática empleando una solución hipoosmótica de 55 mOsm/l, obteniéndose un 87.9 ± 8.1% de espermatozoides con colas curvadas en el semen fresco. Diez y ocho de veinte eyaculados fueron congelados en un diluyente en base a TRIS-Fructosa - ácido cítrico, 20% yema de huevo y 8% de glicerol, diluyendo hasta alcanzar una concentración promedio de 150 x 10(6) espermatozoides por ml. El semen diluido fue envasado en pajuelas de 0.25 ml. Posteriormente las muestras fueron sometidas a un período de adaptación a 5ºC por 2 horas, para luego ser congeladas en vapor de nitrógeno líquido por 8 minutos, antes de ser sumergidos directamente en el nitrógeno líquido. La descongelación de las pajuelas fue hecha en agua a 40ºC por 15 segundos, y el semen congelado/descongelado fue evaluado en base a su motilidad progresiva y respuesta a la prueba hipoosmótica, dando como resultados 47.4 + 17.6% de motilidad y un porcentaje promedio de espermatozoides con colas curvadas de 53.7 + 13%. La correlación obtenida para las variables de motilidad progresiva y respuesta a la prueba canino. Además, es importante destacar que este trabajo constituiría uno de los primeros en su tipo a nivel nacional, particularmente en lo referido a la criopreservación de semen de perro Resumen en inglés Twenty ejaculates from 5 adult dogs were collected by digital manipulation, in order to study the functional capacity of spermatozoal membranes in fresh and frozen/thawed semen. The average volume obtained was 1.9 ± 0.87 ml (1 and 2 fractions). The progressive motility, live and normal sperm were 83.3%, 92.0% and 83.5%, respectively. The average concentration was 325 x 10(6) sperm per ml. Semen samples were exposed to an hypoosmotic solution (55 mOsm/L) observing 87.9% o (mas) f spermatozoa with curved tails. After evaluation, 18 ejaculates were extended with a TRIS-fructose-citric acid diluent containing 20% egg yolk and 8% glycerol, added to the semen to obtain 150 x 10(6) spermatozoa per ml. The samples were packaged in 0,25 ml straws and kept for 2 hours at 5ºC for equilibration and then frozen in liquid N2 vapour for 8 min. before submirge them into liquid N2. The samples were stored in liquid N2 for 2 to 9 weeks. Straws were thawed in water bath at 40ºC for 15 sec. and evaluated. The progressive motility was 47.4 ± 17.6% and spermatozoa with curved tails reached 53.7%. The correlation obtained in frozen/thawed semen between progressive motility and HOST was significant r = 0.88 and higher (p

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La azoospermia no debería ofrecerse como resultado de la vasectomía/ Azoospermia should not be given as the result of vasectomy

Rajmil, Osvaldo; Fernández, Marlin; Rojas-Cruz, César; Sevilla, Carlota; Musquera, Mireia; Ruiz-Castañe, Eduardo
2007-02-01

Resumen en español Objetivo: La vasectomía es un método quirúrgico de contracepción masculina. Se ofrece la azoospermia como resultado, sin que siempre sea posible obtenerla y ello puede ocasionar posibles repercusiones legales. El propósito de este estudio es conocer el número de seminogramas necesarios para conseguir la azoospermia después de la intervención. Métodos: Análisis retrospectivo de hombres a los cuales se les realizó la vasectomía durante un período de 15 meses y (mas) con un seguimiento posterior de 2 años. Se realizaron seminogramas consecutivos, más de cinco, con intervalos de 2 a 3 meses en cada uno de los que se obtenía persistencia de espermatozoides. Resultados: Se intervinieron 618 hombres,106 fueron descartados por no aportar muestras de semen (17%) y 2 (0.39%) por presentar espermatozoides móviles, considerándose fallo de la técnica. 510 siguieron el control completo. 316 (61.9 %) resultaron azoospérmicos en el primer seminograma, 74 (14.5%) en el segundo, 27 (5.2%) en el tercero, 6 (1.2 %) en el cuarto y 1 (0.2%) en el quinto seminograma. Los 86 (16.8%) restantes siguieron presentando espermatozoides en el eyaculado más allá del quinto exámen seminal. Los espermatozoides persistentes fueron todos inmóviles e inferiores a 100,000/ml. No se reportaron casos de embarazos en los dos años de seguimiento. Conclusiones: El número de análisis post quirúrgico puede ser mayor de cinco. La presencia de espermatozoides inmóviles en el eyaculado despues de la vasectomía es frecuente, incluso despues de largos períodos posteriores a la cirugía. Recuentos espermáticos iguales o inferiores a 100,000/ml e inmóviles deberían considerarse aceptables como objetivo del método. Se debería informar acerca de la posible persistencia de espermatozoides inmóviles en el semen. En el consentimiento no debería constar la azoospermia como resultado de la intervención ya que es frecuente encontrar espermatozoides inmóviles y ser igualmente aceptable. Al igual que otros, se debe ofrecer la vasectomía como otros métodos contraceptivos eficaz, pero con posibilidad de fallos. Resumen en inglés Objectives: Vasectomy is a surgical method of male contraception. Azoospermia is offered as result of the technique and this is not always attained, resulting in legal matters. The purpose of this study is to know the number of semen samples needed to discharge a patient after intervention. To identify sperm count on semen analysis at time of discharge. Methods: Retrospective study of men who underwent vasectomy in a 15-month period with a 2 year follow up. Consecutive se (mas) men analyses up to 5 samples were measured at 2 to 3 months interval in all men who had persistence of spermatozoa. Results: 618 men were intervened, 106 did not bring semen to the laboratory (17 %), 2 (0.39%) presented motile sperm and were considered a failure of the technique and excluded. 510 men completed controls. 316 (61.9%) were azoospermic in the first sperm analysis, 74 (14, 5%) in the second, 27 (5, 2%) in the third, 6 (1, 2%) in the fourth and one (0, 2%) in the fifth analysis. The remaining 86 men (16.8%) had persistence of immotile sperm in the ejaculate and were less than 100,000/ml. No pregnancy was reported during 2 years follow up or after. Conclusions: Five or more semen analysis can be made after the surgery. Persistence of immotile sperm in the ejaculate is frequent and may exist for a long period afterwards. Immotile sperm count of 100.000/ml or less should be accepted as result of the procedure. The patient should be informed about the fact that persistent immotile sperm can be found in his semen. In the informed consent azoospermia should not be a concern as it is frequent to find immotile sperm in the ejaculate and this is an acceptable issue. As with other contraceptive methods, vasectomy should be offered as a safe method although clearly stating that the possibilities of failure do exist.

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Efecto de diferentes crioprotectores sobre la motilidad espermática de la macha Mesodesma donacium (Mollusca, Bivalvia)/ Effect of different cryoprotectants on the sperm motility of the surf-clam Mesodesma donacium (Mollusca, Bivalvia)

Joo, Roberto; Dupré, Enrique
2002-01-01

Resumen en español Se evaluó el efecto producido por diferentes crioprotectores en diferentes concentraciones y tiempos de incubación sobre la motilidad espermática post-tratamiento de espermatozoides de macha. Los crioprotectores utilizados fueron DMSO, metanol y propilén-glicol, en concentraciones de 0,5 M, 1,0 M y 1,5 M. y tiempos de incubación de 5, 10 y 15 min. Espermatozoides extraídos de la gónada y diluidos en agua de mar se mezclaron en proporción 1:1 con cada crioprotector (mas) . Después de cada incubación se evaluó la toxicidad producida por cada crioprotector mediante la evaluación de la motilidad espermática, diferenciándola en tres tipos (M1, M2 y M3). Se observó que los espermatozoides se activan sólo al tomar contacto con agua de mar, aumentando su movimiento flagelar hasta los 15 min y luego comienza a disminuir hasta los 95 min. El mayor porcentaje de motilidad 3 (44,3%) se obtuvo en espermatozoides incubados en DMSO 1 M por 5 min, lo cual sugiere que este crioprotector genera la menor toxicidad. Esto se debería al menor tamaño de las moléculas de los otros crioprotectores, las cuales pudieran estar atravesando las membranas plasmáticas con mayor facilidad provocando una más rápida y excesiva deshidratación de la célula, que provocaría un excesivo arrugamiento de la membrana y su rompimiento, lo cual no ocurre con el DMSO, o debido a que las moléculas de menor tamaño del propilén-glicol y metanol podrían afectar directamente las estructuras del flagelo Resumen en inglés Toxicity of DMSO, methanol and prophylene glycol at 0.5 M, 1.0 M and 1.5 M at 5, 10 and 15 min of incubation time are analyzed. The spermatozoa removed from the gonad where diluted in 5ºC seawater and later mixed in proportion 1:1 with the corresponding cryoprotectants. The toxicity generated by the cryoprotectants, after the incubation were evaluated by sperm motility. Three type of motility were differentiated (M1, M2 y M3). The fresh spermatozoa were activated at (mas) contact with seawater increasing flagellar movement until 15 min and them diminished until to 95 min. After the incubation of the sperm in each one cryoprotectant, the highest recovery of forward motility (type 3) was 44.3% at DMSO 1.0 M incubated during 5 min, which suggest that DMSO produce the low toxicity. Though the molecules of the other cryoprotectant are smaller and could easier penetrate into de cell, they can cause a faster dehydration and thereby destruction of the membranes by shrinking or could be affecting directly the flagellar structures

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Estructura Testicular y Calidad Seminal en Ratones Seleccionados por Peso/ Testicular Structure and Semen Quality in Mice Lines Selected for Weight

Bernardi, Sandra; Brogliatti, Guillermo; Oyarzabal, María Inés
2010-09-01

Resumen en español La capacidad reproductiva femenina se modificócomo consecuencia de la selección de peso realizada en un par de líneas de selección divergente durante 50 generaciones (s: bajo peso; s’: alto peso), originadas a partir de una población testigo (t) de ratones CF1 y criadas en la Facultad de Ciencias Veterinarias (UNR). Se probó la existencia de diferencias reproductivas atribuibles al genotipo paterno observadas en el tamaño de camada al nacimiento y en los días tra (mas) nscurridos desde el ingreso a servicio hasta la parición. Con el propósito de explicar las diferencias se comparó la estructura testicular - peso testicular (PTEST), diámetro del túbulo seminífero (DTS), altura de su epitelio (AES) - y la calidad seminal - número de espermatozoides (NE), porcentaje de células anormales (AN), motilidad y desplazamiento de las células espermáticas (Parámetros CASA) -, en machos adultos de 10 a 14 semanas de edad. Se estimó el promedio del DTS y AES en 100 túbulos seminíferos por individuo. El semen se obtuvo de la porción caudal de los epidídimos y de los conductos deferentes. El recuento de espermatozoides se realizó en cámara de Neubauer hemocitométrica y el porcentaje de células anormales se calculó sobre 100 espermatozoides por extendido. Los parámetros de motilidad se determinaron con analizador computarizado de semen Ceros 12.1. La selección por peso diferenciósignificativamente a las líneas en el mismo sentido de la selección practicada para PTEST, AES y NE. Los machos de la línea más pesada (s’) presentaron PTEST y AES mayores y tuvieron un mayor número de espermatozoides al compararlos con los de las líneas s y t (p Resumen en inglés Reproductive female capacity was affected by the genetic selection performed in a pair of lines of two-way selection of body weight for 50 generations (s: downward selection; s’: upward selection). These lines were originated from a control CF1 mice population (t) at the Faculty of Veterinary Sciences (UNR). The existence of reproductive differences attributed to the male genotype in the litter size and in the interval from the service beginning to first parturition was (mas) proven. With the aim of explaining them, the testicular structure - testicular weight (PTEST), vas deferens diameter (DTS), epithelium height (AES) - and the semen quality - spermatozoa number (NE), abnormal cell percentage (AN), motility and movement of spermatic cells (CASA parameters) were compared, in adult males between 10 and 14 weeks of age. The means of the DTS and AES were estimated for 100 seminiferous tubules per individual. Semen was obtained from the caudal portion of the epididymides and vasa deferentia. Sperm count was performed in Neubauer hemocytometer and abnormal cell percentage was estimated over 100 spermatozoa per sample. Motility parameters were determined with a Ceros 12.1 semen computerized analyzer. Body weight selection occasioned significant differences between lines in the same way of the selection performed for PTEST, AES and NE. Males of the heaviest line (s’) show heavier testicles, higher seminiferous epithelium and, consequently, a higher number of spermatozoa when compared with s and t males (p

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EFFECT OF SOME IONS ON SPERM ACTIVATION IN Brycon henni (EIGENMANN 1913)/ Efecto de algunos iones sobre la activación espermática en Brycon henni (Eigenmann 1913)

TABARES, JAVIER; RUÍZ, TATIANA; ARBOLEDA, LUCY; OLIVERA, MARTHA
2007-06-01

Resumen en español Los espermatozoides en los carácidos se mantienen inmóviles en plasma seminal, activándose cuando se liberan en el agua. El objetivo de este estudio fue conocer algunos de los mecanismos que inducen la activación espermática (porcentaje de espermatozoides que adquieren movilidad y el tiempo que dura la misma). El efecto de las soluciones isosmóticas, se analizó considerando las combinaciones de los iones Ca2+, K+, Mg2+ y Na+, y el efecto de algunos bloqueadores de (mas) canales iónicos. Se evaluó el porcentaje y duración de la movilidad, así como el potencial de la membrana plasmática. La motilidad espermática fue mayor cuando el semen se incubó en las soluciones que contenían + (p Resumen en inglés Spermatozoa in Characid fish remain immobile in seminal plasma and are activated when freed into water where the ionic balance seems to be the main factor starting the activation process. This process was the target of the present study with emphasis on the activation of motility and on motility maintenance over time. The effect of isosmotic solutions was analyzed taking into account the possible combinations of the following ions, Ca2+, K+, Mg2+ and Na+ as well as the ef (mas) fect of channel blocking agents. The parameters measured were cells with motility (%), duration of motility (s), plasma membrane potential, and the effect of channel blockers on activation time and on motility. There was an increased motility when the semen was incubated in solutions containing K+ (p

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Evaluación del ADN espermático de llamas utilizando azul de toluidina/ Evaluation of llama sperm dna using toluidine blue

Carretero, M.I; Giuliano, S.M; Casaretto, C.I; Gambarotta, M.C; Neild, D.M
2009-06-01

Resumen en español El colorante azul de toluidina (AT) se une al ADN permitiendo diferenciar espermatozoides de acuerdo al grado de condensación de la cromatina. Los objetivos de este trabajo fueron: poner a punto una técnica que evalúe la condensación de la cromatina espermática de llama, determinar los patrones de condensación para la especie mediante la tinción con AT y determinar si es posible utilizar ditíotreitol (DTT) como control positivo de la tinción. Se ensayaron 2 tiemp (mas) os de fijación de las muestras con etanol 96 º (2 y 30 minutos) y 3 tiempos de incubación con DTT al 1% (30 seg, 1,5 min y 3 min). Los patrones de coloración observados fueron: coloración celeste (negativos, sin alteración en la condensación normal de la cromatina), violeta claro (intermedios, algún grado de descondensación), violeta oscuro (positivos, alto grado de descondensación). No se observaron diferencias significativas entre los tiempos de fijación tanto en las muestras con y sin DTT. En conclusión, se logró simplificar la técnica de AT y determinar los diferentes patrones en espermatozoides de llama. Se comprobó que la incubación con DTT se puede utilizar como control positivo de la técnica y para evaluar la susceptibilidad de cada individuo a la descondensación in vitro. Resumen en inglés Toluidine blue stain (TB) binds to DNA, allowing differentiation of spermatozoa according to the degree of chromatin condensation. The objectives of this study were to adapt a technique for evaluating sperm chromatin in llamas, determine chromatin condensation patterns in llamas using TB and determine if it is possible to use dithiothreitol (DTT) as a positive control for the stain. Two fixation times with ethanol 96° (2 and 30 minutes) and 3 incubation times with 1% DTT (mas) (30 s, 1.5 min and 3 min) were studied. Staining patterns observed were: light blue (negative, without alteration in the normal chromatin condensation), light violet (intermediate, some degree of decondensation), dark violet (positive, high degree of decondensation). No significant differences were observed between fixation times, either in samples with or without DTT. To conclude, it was possible to simplify the TB stain and determine the different patterns in llama spermatozoa. It was proved that incubation with DTT can be used as a positive control for the stain and to evaluate individual susceptibility to decondensation in vitro.

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Capacitación espermática inducida por la conservación de semen de carnero diluido, refrigerado o congelado/ Sperm capacitation induced by conservation of diluted, refrigerated, or frozen ram semen

Rodríguez-Almeida, Felipe A.; Ávila Cota, Carlos O.; Anchondo Garay, Alfredo; Sánchez-Ramírez, Blanca; Jiménez Castro, Jorge A.
2008-06-01

Resumen en español La refrigeración y criopreservación de los espermatozoides reducen o interrumpen su actividad metabólica y alargan su viabilidad, pero la capacitación espermática (CE) inducida en el semen de carnero puede reducir la fertildad. Para determinar el grado de inducción de la CE y el efecto en la motilidad progresiva (MP), se evaluaron muestras de semen fresco [baño maría a 36 °C por 3 (F3) y 6 h (F6)]; refrigerado [5 °C por 3 (R3), 6 (R6) y 24 h (R24)]; y congelado (mas) [(CON) en N líquido]. Cinco eyaculados de cada uno de tres carneros jóvenes y tres adultos por raza (Pelibuey y Blackbelly), se diluyeron en solución citrato-yema y se dividieron en tres alícuotas. Se determinaron los porcentajes de MP y de espermatozoides capacitados con acrosoma intacto (patrón B) y reacción acrosomal (patrón RA), estos dos últimos por duplicado con el ensayo de la clortetraciclina. El modelo estadístico para evaluar MP incluyó efectos fijos de tipo-tiempo de preservación (PRE), raza, edad, y sus interacciones; y aleatorios de carnero y su interacción con PRE dentro de raza y edad. Para los patrones B y RA el modelo incluyó además los efectos aleatorios de eyaculado y eyaculado por PRE dentro de carnero, raza y edad. Las medias para el patrón B fueron 23.9, 30.8, 32.8, 42.5, 44.5 y 36.6 % (E.E.=2.3; p Resumen en inglés Refrigeration and cryopreservation of spermatozoa reduce or interrupt their metabolic activity and prolong their viability, but sperm capacitation (CE) induced in ram semen may reduce its fertility. In order to determine the degree of CE induction and the effect on progressive motility (MP) fresh semen samples were assessed [double boiler water bath at 36 °C for 3 (F3) and 6 h (F6)]; refrigerated [5 °C for 3 (R3), 6 (R6), and 24 h (R24)]; and frozen [(CON) in liquid N]. (mas) Five ejaculates of each of three young rams and three adults per breed (Pelibuey and Blackbelly) were diluted in citrate-yolk extender and divided proportionally in three aliquots. Percentages of MP and of capacitated spermatozoa with intact acrosome (B pattern) and acrosomal reaction (RA pattern) were determined, the two latter in duplicate with chlortetracycline assay. The statistical model for evaluating MP included fix effects of type-time preservation (PRE), breed, age, and their interactions; and random effects of ram and its interaction with PRE within breed and age. For B and RA patterns, the model included also the random effects of ejaculate and ejaculate by PRE within ram, breed and age. The means for B pattern were 23.9, 30.8, 32.8, 42.5, 44.5, and 36.6 % (E.E.=2.3; p

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Estudio del desarrollo embrionario del sábalo (Prochilodus lineatus)/ Study of the embrionary development in sábalo (Prochilodus lineatus)

Botta, P; Sciara, A; Arranz, S; Murgas, LDS; Pereira, GJM; Oberlender, G
2010-01-01

Resumen en español El almacenamiento de espermatozoides de peces por medio de la criopreservación es muy utilizado hoy en día. Si bien se sabe que el proceso de congelamiento/descongelamiento genera la fragmentación del ADN del espermatozoide, no se conocen las consecuencias que esto tiene en el desarrollo embrionario. Actualmente hay un gran interés en el desarrollo de métodos de fecundación in vitro para la especie Prochilodus lineatus utilizando semen criopreservado. En este trabaj (mas) o estudiamos el desarrollo embrionario de esta especie, a fin de sentar las bases para la observación de anormalidades en el desarrollo de embriones obtenidos a partir de espermatozoides crioconservados. Los huevos producidos por esta especie son translúcidos y poseen un gran espacio perivitelino; son del tipo telolecítico y presentan una división meroblástica durante los primeros estadíos del desarrollo. Si bien el desarrollo embrionario de Prochilodus lineatus (sábalo) se llevó a cabo en menor tiempo en comparación con Danio rerio, las etapas que atravesó el embrión son muy similares. Durante el estudio se observaron los períodos de Cigoto, Clivaje, Blástula, Gástrula, Segmentación y Eclosión de la larva de sábalo. De esta manera se logró registrar los diferentes estadíos de su desarrollo, principalmente aquellos posteriores a la transición de la blástula media (TBM), a partir del cual el embrión comienza a transcribir su propio genoma Resumen en inglés Currently, the storage of fish spermatozoa through cryopreservation is widely used. Although it is of common knowledge that the process of freezing / thawing generates DNA fragmentation of spermatozoa, the consequences of this process on embryonary development are unknown. There is great interest in developing methods for in vitro fertilization for the species Prochilodus lineatus using cryopreserved semen. In this paper we study the embryonic development of this fish, to (mas) lay the groundwork for the observation of abnormalities in the development of embryos derived from criopreserved spermatozoa. The eggs produced by this species are translucent and have a large perivitelline space, are of the telolecitic type, and presented meroblastic division during the early stages of development. Although the embrionary development of Prochilodus lineatus (Sábalo) took place in less time compared with Danio rerio (Zebrafish) the embryo goes through very similar stages. During the study it was possible to observe the periods of zygote, cleavage, blastula, gastrula, segmentation and hatching of the larvae of Sábalo. The different stages of development were successfully recorded, especially those after the transition of blastula media (TBM), when the embryo begins to transcribe its own genome

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Evidencia de transmisión autosómica dominante a través de la línea materna en un caso de discinesia ciliar primaria/ Evidence for autosomal dominant inheritance through the maternal line in a case of primary ciliary diskinesia

Álvarez González, J.; Busto Castañón, L.; Nistal Serrano, M.
2006-08-01

Resumen en español Se presenta evidencia de un caso atípico de discinesia ciliar primaria en el que la transmisión genética, en lugar de la clásica autosómica recesiva, parece ser de tipo autosómico dominante transmitida a través de la línea materna. Se trata de un caso de dos hermanos de 29 y 30 años de edad casados y sin hijos, con historia de infertilidad, sinusitis frecuentes e infecciones respiratorias recurrentes. Madre y hermana presentan broncopatía crónica no filiada. Pa (mas) dre sano sin afectación pulmonar o sinusal. En el examen físico, en ambos hermanos, la hermana, y la madre, sólo destaca la presencia de roncus en la auscultación pulmonar. Bioquímica ordinaria normal, incluyendo pruebas de función pulmonar, hepática y renal. El estudio ultraestructural del flagelo espermático por microscopía electrónica indica que los dos hermanos tienen la misma anomalía. En la mayoría de las secciones transversales se encuentra ausencia de ambos brazos de dineína. El filamento de nexina está presente, así como las fibras radiales y el par central. En espermatozoides aislados, coincidiendo con la ausencia de los brazos de dineína, hay también pérdida del par central. No se encontraron anomalías en la vaina fibrosa, ni pérdida de las fibras densas. La pieza intermedia en aproximadamente el 50% de los espermatozoides mostraba una disminución en el número de mitocondrias y de mitocondrias extras no alineadas. Otros hallazgos fueron la presencia de microtúbulos extra periféricos al axonema. Resumen en inglés An atypical case of primary ciliary dyskinesia is presented in which the inheritance, rather than the classical autosomal recessive, appears to be transmitted as an autosomal dominant trait through the maternal line. The case involves two brothers of 29 and 30 years of age, married without children, with a history of infertility, frequent episodes of sinusitis, and recurrent pulmonary infections. Their mother and sister have chronic bronchopathy of unknown etiology. Their (mas) father is healthy without pulmonary problems or sinusitis. At physical exam, both brothers, sister and mother presented with bronchial rhonchi at lung auscultation. Blood analysis and pulmonary function, liver and renal tests were all normal. The ultraestructual study of the sperm flagellum by electron microscopy revealed that both brothers have the same anomaly. Namely, in the majority of the cross-sections, both dynein arms are missing. The nexin filament was present, as well as the radial spokes and the central pair of microtubules. In some sperm, besides the absence of dynein arms, there was also absence of the central pair of microtubules. Neither anomalies of the fibrous sheath nor of the dense fibers were found. In approximately 50% of the spermatozoa, the midpiece had a decreased number of mitochondria and extra non- aligned mitochondria. Other findings included extra peripheral microtubules in the axoneme.

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Morfología Testicular del Yaque Leiarius marmoratus (Pisces: Siluridae) en Estadio de Madurez Reproductiva/ Testicular Morphology of Yaque Leiarius marmoratus(Pisces: Siluridae) in Maturity Reproductive Stage

Mira López, Tatiana M; Medina-Robles, Víctor M; Cruz-Casallas, Pablo E
2010-06-01

Resumen en español El conocimiento de la morfología y fisiología del testículo, permite generar bases para el entendimiento del comportamiento reproductivo de las especies, ya que diferencias anatómicas están relacionadas con el desempeño reproductivo. Con el fin de contribuir al conocimiento biológico y reproductivo del yaque Leiarius marmoratus, fueron analizadas las características anatómicas, morfológicas y funcionales del testículo en animales durante el estado de madurez re (mas) productiva. En L. marmoratus los testículos están ubicados ventralmente a la vejiga gaseosa y presentan numerosas y largas digitaciones que terminan en un conducto espermático. Microscópicamente se encontró que el testículo es espermatogonial irrestricto de tipo tubular, donde la porción anterior presenta actividad espermatogénica, que disminuye en la porción media y desaparece en la región distal, dando paso a tejido glandular con actividad secretora, que actúa como vesícula seminal. Al interior de cada túbulo testicular, se observan cistos que contienen células espermáticas en el mismo estadio de desarrollo. Basados en las características microscópicas, fueron identificados espermatocitos, espermátides y gran cantidad de espermatozoides libres en el lumen. También fueron identificadas células glandulares, tejido muscular liso y tejido epitelial. En el ducto espermático (región media y distal), se encontró abundante secreción acidofílica que en algunas regiones estaba acompañada de espermatozoides libres Resumen en inglés Knowledge of the morphology and physiology of the testis, leads to generate bases for understanding the reproductive behavior of species, because the anatomical differences are related to reproductive performance. To contribute to biologic and reproductive knowledge of Yaque Leiarius marmoratus, anatomic, morphologic and functional characteristics of the testis in animals in a state of reproductive maturity were analyzed. In L. marmoratus, the testicles are located ventra (mas) lly to the gas bladder and have many long finger-like structures that finish in spermatic duct. Microscopically it was found that the testis is espermatogonial unrestricted and tubular type, where the anterior portion presented spermatogenic activity, which diminishes in the medium portion and disappears in the caudal portion, leading to tissue with glandular secretory activity serving as a seminal vesicle. Inside each tubule of the testis, there are cysts containing sperm cells within the same stage of development. Based on microscopic features, were identified spermatocytes, spermatids and a large amount of free sperm into the lumen. Glandular cells were also identified, as well as smooth muscle tissue and epithelial tissue. In the spermatic duct (medium and distal portion), acidophilous secretion was abundant and in some regions were accompanied by free spermatozoa

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Análisis de los parámetros del eyaculado en la rata Wistar de laboratorio: descripción de la técnica/ Analysis of the parameters of the ejaculate in the laboratory Wistar rat: technical description

Lucio, Rosa Angélica; Tlachi, José Luis; López, Aurora Adriana; Zempoalteca, René; Velázquez-Moctezuma, Javier
2009-12-01

Resumen en español Se ha cuantificado en el eyaculado de la rata de laboratorio, el número de espermatozoides, peso y tamaño del tapón seminal, y en muestras obtenidas de epidídimo, la viabilidad, movilidad y concentración espermáticas. Los valores de referencia para el eyaculado de la rata no se han determinado quizá por la dificultad para obtenerlo directamente del macho. No obstante, puede obtenerse una aproximación al analizar el eyaculado recolectado de una hembra recién insem (mas) inada. El objetivo de este estudio fue evaluar y proponer los valores de los parámetros macroscópicos y microscópicos del semen y tapón seminal obtenidos de la hembra. El análisis del semen de ratas Wistar se realizó adecuando los métodos usados para otras especies. Después de una serie eyaculatoria, se obtuvo el semen contenido en los cuernos uterinos y el tapón seminal de la vagina. En más de 100 eyaculados, 94.54% fueron blanquecinos, con 2.35 ± 0.06 mm de viscosidad y 8.13 ± 0.02 de pH. La concentración espermática fue de 16.3 ± 0.59 millones de espermatozoides por mL, 0.72 ± 0.01 de índice de movilidad, 64.4 ± 0.7% de viabilidad y 99.11 ± 0.20% de morfología normal. Del 99% de los tapones seminales, 92.7% fueron endurecidos, pesaron 115.63 ± 1.54 mg, midieron 12.41 ± 0.13 y 5.31 ± 0.05 mm de largo y ancho, respectivamente, y de volumen 87.70 ± 1.74 mm³. En conclusión, el método utilizado para obtener y evaluar los parámetros del eyaculado es confiable, por ello se sugiere que los resultados obtenidos podrían considerarse como valores indicativos para el semen y tapón seminal de la rata Wistar. Resumen en inglés The number of spermatozoa, weight and size of the seminal plug has been quantified in the ejaculate of the laboratory rat and sperm viability, sperm mobility and sperm concentration in samples obtained from the epididymis. The reference values for the rat ejaculate have not been determined maybe due to the difficulty to obtain it directly from the male. Nevertheless, an approach can be obtained analyzing the ejaculate collected from the inseminated female. The objective o (mas) f this study was to evaluate and propose the values of the macroscospic and microscopic parameters of the semen and seminal plug obtained from the female. The seminal analysis of the Wistar rats was performed adapting the methods used for other species. After one ejaculatory series, semen contained in the uterine horns was obtained, as well as the seminal plug from the vagina. In more than one hundred ejaculates, 94.54% were off-white with 2.35 ± 0.06 mm of viscosity and 8.13 ± 0.02 of pH. The sperm concentration was 16.3 ± 0.59 millions of spermatozoa per mL, 0.72 ± 0.01 mobility index, 64.4 ± 0.7% viability and 99.11 ± 0.20% normal morphology. From 99% of seminal plugs, 92.7% were hardened, they weighed 115.63 ± 1.54 mg, measured 12.41 ± 0.13 and 5.31 ± 0.05 mm of length and width respectively, and volume 87.70 ± 1.74 mm3 . In conclusion, the used method to obtain and to evaluate the parameters of the ejaculate is reliable, for that reason, it is suggested that the results obtained could be considered as indicative values for semen and seminal plug for the Wistar rat.

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Utilizaciónde lectina Pisum sativum y yoduro de propidio para la evaluaciónrápida de integridad de acrosoma en espermatozoidescaprinos/ Use of propidium ioide and Pisumsativum for fast assessment of acrosome integrity in goat spermatozoa

COX, J.F; FERNANDEZ, P.; SARAVIA, F.; SANTA MARIA, A.
1998-01-01

Resumen en español La lectina Pisum sativum (PSA)ha sido usada exitosamente como marcador de glicoconjugados localizadosen la membrana acrosomal interna, pero debido a las variaciones en los constituyentes de membranas existentes entre especies, su utilización requiere una validación preliminar. Este estudio compara los resultados obtenidos en la tinción acrosomal con una combinación de yoduro de propidio (PI) y PSA con la tinción Rosa de Bengala que se utiliza corrientemente como est� (mas) �ndar, y además compara la interpretación de los resultados obtenidos con la tinciónPI/PSA por dos evaluadores independientes. En el experimento 1, semen de chivos fue colectado por vagina artificial, lavado del plasma seminal y teñido comparativamente con PI/PSA y con Rosa de Bengala, inicialmente en forma directa después de la colección y posteriormente luego de preparar fracciones con diferente proporción de espermatozoides vivos y muertos. En el experimento 2, semen de diferentes chivos congelado a -196° C en el diluyente a base de Tris, citrato y yema de huevo, fue descongelado a 37° C por 30 seg ó a 65° C por 5 seg y los espermatozoides fueron teñidos con PI/PSA. La interpretación de los resultados de integridad de acrosoma fue realizada por dos evaluadores independientes. Para comparar los resultados los porcentajes fueron transformados y las medias y correlaciones fueron calculadas por medio del paquete estadísticoSystat®. Los resultados muestran que la tinción PI/PSA y Rosa de Bengala da resultados similares y positivamente correlacionados (r = 0.99) y que la interpretación de los evaluadores también fue positivamente correlacionada (r = 0.98). De acuerdo a lo anterior,se concluye que la tinción PI/PSA es útil para la evaluación rápida de integridad de acrosoma en caprinos Resumen en inglés Lectins are used for studies in mammalian sperm surface and organelles because of their ability to specifically link sugar residua. Fluoresce in labeled Pisum sativum (PSA) has been used successfully in several mammalian spermatozoa, as a marker of the inner acrosomal membrane but, because of interspecific variations in membrane constituents, its use requires a preliminary validation. This study compared the results obtained by staining goat spermatozoa with a combination (mas) of propidium ioide (PI) and PSA vs those of Bengal Red. Also the interpretation of the results achieved were compared with the results obtained by two external technicians. In Experiment 1, goat spermatozoa collected by artificial vagina were washed once, immediately after collection, and stained with PI/PSA and Bengal Rose. Then, to prepare sperm groups with different proportions of live and dead sperm, spermatozoa were fractionated and one fraction was damaged by freezing at -196° C without cryoprotectans. In Experiment 2, semen from different males was frozen in a Tris-base d extender, and thawed either at 37° C for 30 sec or at 65° C for 5 sec, and then stained with PI/PSA. Two independent technicians assessed the results of both series of experiments. Percentage transformations, media comparison and correlation were obtained by using the Systat®computing package. The results showed that PI/PSA and Bengal Rose gave similar and positively correlated results and that both technicians gave similar interpretations (r = 0.98). It can be concluded that PI/PSA is a useful staining for fast assessment of goat spermatozoa

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Papel del estrés oxidativo en la infertilidad masculina

Alba Zayas, Lázaro E; Monzón Benítez, Giselle; Peláez Yánez, Luís A; Quintero Pérez, Yusleidy
2000-12-01

Resumen en español Resulta incuestionable la participación del estrés oxidativo en la patogenia de la infertilidad masculina. Una buena parte de los pacientes que sufren de este padecimiento presentan niveles elevados de especies reactivas del oxígeno, cuya presencia en el semen constituye un reflejo del desbalance entre su producción por los elementos celulares y su degradación por los sistemas antioxidantes. Como consecuencia de este desequilibrio, los lipoperóxidos generados dan al (mas) traste con la capacidad fertilizante de los espermatozoides. La determinación de indicadores de daño oxidativo y defensa antioxidante proporciona una información muy útil sobre la calidad de la espermatogénesis y resulta de gran valor para el diagnóstico de la infertilidad que involucra al estrés oxidativo y en la selección de los pacientes para la terapia antioxidante Resumen en inglés The participation of the oxidative stress in the pathogeny of male infertility in unquestionable. A considerable number of the patients suffering from this affection have elevated levels of reactive oxygen species, whose presence in semen is a reflex of the unbalance between their production by the cellular elements and their degradation by the antioxidant systems. As a result of this unbalance, the generated lipoperoxides spoil the fertilizing capacity of the spermatozoa (mas) . The determination of indicators of oxidative damage and antioxidant defense gives a very useful information on the quality of spermatogenesis and it is also of great value for the diagnosis of the infertility involving the oxidative stress and the selection of patients for antioxidant therapy

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Obtención de cachorros mediante inseminación artificial con semen canino refrigerado.: Primera descripción en Chile/ Puppies obtained using artificial insemination with chilled extended semen.: First report in Chile

Sánchez, A.; Rubilar, J.
2001-01-01

Resumen en español Empleando una pareja de perros Siberian Husky, se describe, por primera vez en Chile, una inseminación artificial empleando semen canino refrigerado. El semen fue obtenido por manipulación digital y diluido con leche semidescremada UHT con antibióticos en relación 1:4 y refrigerado a 5ºC. Se practicaron 3 inseminaciones a partir del tercer día del estro, el cual fue determinado mediante exámenes de citología vaginal, considerándose inicio del estro cuando las (mas) células superficiales constituían sobre el 80% del total de células vaginales en los frotis. Se inseminó con dosis refrigeradas por 24 y 48 horas y con una concentración promedio de 600 millones de espermatozoides totales. El diagnóstico de gestación, mediante ecógrafo de tiempo real, se realizó 28 días después de la última inseminación y la perra parió 4 cachorros vivos 61 días Resumen en inglés Using a couple of Husky Siberian, it is described for the first time in Chile a kind of artificial insemination using cooled canine semen. The semen was obtained by digital manipulation and was diluted with UHT semi-skimmed milk and antibiotics in relation 1:4 and cooled at 5ºC. There inseminations were carried out on the third day of the oestrus which was determined through vaginal cytology, considering the beginning of the oestrus when the superficial cells constit (mas) uted over the 80% of the total vaginal cells in the vaginal smear. Inseminated was carried out using cooled doses for 24 and 48 hours and with an average concentration of 600 x 10(6) spermatozoa. The pregnancy diagnosis, through a real time ultrasonography, was done 28 days after the last insemination and the bitch gave birth to 4 normal puppies 61 days after last insemination

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Utilidad y necesidad del andrólogo en las unidades de reproducción asistida/ Usefulness and necesity of the andrologist in Assisted Reproductions Units

Galmés Belmonte, I.
2004-05-01

Resumen en español En el presente trabajo se recoge la experiencia del autor relacionada con el estudio y tratamiento de la patología del varón en el seno de una unidad de reproducción asistida. Se hace una revisión de los protocolos de estudio, las causas de la esterilidad masculina, los posibles tratamientos etiológicos, la participación del andrólogo en la recuperación quirúrgica de espermatozoides y la valoración o "screening" previa a cualquier ciclo de FIV o FIV-ICSI. Como c (mas) onclusiones, podemos afirmar que aplicando un adecuado protocolo de estudio es posible llegar al diagnóstico etiológico de la esterilidad masculina en un 78,8% de los casos, e instaurar un tratamiento específico en casi la mitad de los varones (47,8%). Los resultados conseguidos con dichos tratamientos, haciendo una selección previa de los casos a tratar, pueden igualar e incluso superar a los ofrecidos por las técnicas de reproducción asistida. Los mejores resultados, en porcentaje de embarazos, se han conseguido con las vaso-vasostomías y con la cirugía desobstructiva de los conductos eyaculadores. Por otra parte, también resulta aconsejable el estudio de posibles alteraciones genéticas y factores de mal pronóstico en aquellos varones cuyas parejas vayan a someterse a ciclos de FIV-ICSI. Resumen en inglés In this issue we make a review of our experience in the management of the sterile men: protocols used for the study of men’s sterility, causes and specific treatments, surgical recovery of spermatozoa and screening before IVF or IVF-ICSI. We concluded that with an adequate protocol, it’s possible to establish the aetiology of men’s infertility in a 78.8% of the cases and it’s also possible to initiate a specific treatment in almost a 47.8% of men. Results of specific (mas) treatment, with a previous selection of patients, could be better than those of assisted reproduction techniques. Best results are obtained in cases of vaso-vasostomy (vasectomy reversal) and obstruction of ejaculatory duct. It’s also needed a study of genetics causes and bad prognostic circumstances in those men whose partner is going on with an IVF or IVF-ICSI cycle.

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Síndrome frágil X/ Fragile X syndrome

Lugones Botell, Miguel; Miyar Pieiga, Emilia; Ramírez Bermúdez, Marieta; Martínez La Fuente, Ana M.
2006-09-01

Resumen en español Se realizó una revisión del síndrome frágil X como primera causa de retraso mental hereditario, el cual aparece tanto en hombres como mujeres, aunque afecta más severamente a varones. Se insiste en que a pesar de ser uno de los trastornos hereditarios más frecuentes, resulta desconocido para la población en general y la mayoría de los profesionales relacionados con la salud y la educación, los que poseen datos parciales e incompletos acerca del síndrome. La anom (mas) alía es debida a una mutación genética del ADN que afecta tanto a las células sexuales (óvulos y espermatozoides) como a los otros tipos de células de nuestro organismo. Este trastorno ocasiona una clase de mutación poco habitual: una secuencia reiterada de tres letras del código del ADN, llamada repetición de triplete. La mayor parte de los síntomas de este síndrome vienen determinados por la afectación de las neuronas. Se analizaron también los aspectos relacionados con la mutación, el fenotipo, así como el diagnóstico, en el que se destacan las características más frecuentes, y el tratamiento, con énfasis en el asesoramiento genético al resto de los miembros de la familia afectada y en la prevención secundaria, la que se logra mediante la interrupción del embarazo. Resumen en inglés A review of fragile X syndrome as the first cause of hereditary mental retardation was made. It affects men and women, but men are more severely affected. It is stressed that in spite of being one of the most common hereditary disorders, it is not known by the population in general and most of the professionals related to health and education have partial or incomplete data of the syndrome. This abnormality is due to a genetic mutation of the DNA affecting the sexual cell (mas) s (ova and spermatozoa) and other types of cells of our organism. It causes a rare mutation: a reiterated sequence of 3 letters of the DNA code, called triplet repetition . The greatest number of the symptoms of this syndrome are determined by the affectation of neurons. There were analyzed the aspects related to the mutation and the phenotype, as well as the diagnosis, where the most frequent characteristics are stressed, and the treatment, which makes emphasis on the genetic counseling to the rest of the members of the affected family and on the secondary prevention that is attained by abortion.

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Variables seminales en llama (Lama glama) */ Semen variables in llama (Lama glama)

VON BAER, L.; HELLEMANN, C.
1998-01-01

Resumen en español El objetivo del trabajo fue el ensayo de una técnica de colección de semen de llamas (Lama glama) con vagina artificial y el registro de variables seminales, tendiente a estudiar parámetros indicadores de la fertilidad potencial del macho. De 18 machos en edad reproductiva de un criadero se seleccionaron 11, de los cuales se obtuvieron 72 eyaculados. Descartados 31 eyaculados por azoospermia o akinozoospermia y 15 en que no se obtuvieron todos los registros, quedaron 2 (mas) 6 eyaculados cuyas variables se sometieron a estadística descriptiva. Las medias obtenidas fueron: volumen 3.5 ml, pH 8.6; concentración 84.7 x 103/mm3; espermatozoides normales 32.5%; cabezas desprendidas 6.4%; cabezas malformadas 6.5%; piezas intermedias malformadas 39.9%; flagelos flectados 8.8%; flagelos enrollados 5.3%; motilidad de semen nativo (MOT1) 25.5% y de semen diluido (MOT2) 32.6%. La correlación de la variable "espermios normales" con MOT1 (r = .39) y MOT2 (r = .46) fue en ambos casos significativa (p<0.05). En cambio, con la variable "piezas intermedias malformadas", que por su magnitud hacía esperar una correlación negativa con la motilidad, no se encontró significancia. Considerando que los machos utilizados en el ensayo tenían antecedentes de fertilidad normal, permite suponer que las piezas intermedias engrosadas, alteraciones de la espiral mitocondrial y las gotas citoplasmáticas proximales profusamente observadas, sean de importancia menor para la fertilidad Resumen en inglés A semen collection technique with artificial vagina was tested and seminal variables recorded in order to establish possible fertility predictor parameters in male llamas. From 11 of 18 males 72 ejaculates were collected. Seminal variables of 26 ejaculates were submitted to descriptive statistics, after rejection of 31 due to azoospermia or akinozoospermia and 15 in account of missing values. The recorded means were: volume 3.5 ml, pH 8.6, sperm concentration 84.7 x 103/ (mas) mm3, normal spermatozoa 32.5%, free heads 6.4%, abnormal heads 6.5%, abnormal midpieces 39.9%, bent tails 8.8%, curled tails 5.3%, motility of native (MOT1) 25.5% and extended semen (MOT2) 32.6%. Spearman correlation of variable "normal sperm" to MOT1 (r = .39) and MOT2 (r = .46) was significant (p 2 0.5). On the contrary, no significance was found correlating the variable "abnormal midpieces" to MOT. Considering that the tested males had shown normal fertility, the missing significance of the high rates of abnormal midpieces, mitocondrial sheets and proximal protoplasmic droplets suggests that they are of minor importance for fertility

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FERTILIDAD EN YEGUAS CUARTO DE MILLA TRATADAS CON GONADOTROPINA CORIONICA HUMANA (hCG) UTILIZANDO SEMEN CONGELADO/ FERTILITY IN MARES CUARTO de MILLA TREATED WITH HUMAN CHORIONIC GONADOTROPIN (hCG) USING FROZEN SEMEN

Fernández Reyes, F; Hernández Pichardo, J.E; Rodríguez Méndez, S; Velásquez Osorio, H.D
2008-12-01

Resumen en español Se evaluó el efecto de la Gonadotropina Coriónica humana (hCG) sobre el porcentaje de concepción en yeguas, utilizando semen congelado en la inseminación artificial, para esto se seleccionaron 20 yeguas ciclando de manera natural, de la raza Cuarto de Milla en edad reproductiva (6 a 12 años de edad), en un criadero ubicado en México Distrito Federal. Se conformaron 2 grupos: Grupo 1 tratadas con 2,000 UI de hCG cuando presentaron folículo de Graff igual o mayor a 3 (mas) 5 mm inseminadas 30 horas después de la aplicación del tratamiento y el Grupo 2 control, la inseminación se realizó a 30 horas después de que las yeguas presentaron un folículo mayor o igual a 35 mm mediante la observación por ultrasonido. Para la inseminación artificial se utilizó semen congelado con una concentración total de 1,000 millones de espermatozoides. El diagnóstico de gestación se realizó mediante la observación de la vesícula embrionaria en el día 16 después de la inseminación artificial, con un ultrasonido transrectal de 5 MHz. Los resultados muestran que las yeguas tratadas con hCG, tienen un porcentaje de fertilidad de 80% (8/10), mientras que el grupo 2 (grupo control), presentó una fertilidad de 20% (2/10). Se concluye que la hCG ayudó a mejorar el porcentaje de preñez en las yeguas tratadas. Resumen en inglés The human Chorionic Gonadotropin (hCG) by its effect similar to the one of LH, was used to improve the percentage of conception in mares, using frozen semen in the artificial insemination. For this, 20 mares cycling of natural way, belonging to the breed Cuato de Milla (Quarter Horse), in their reproductive age (6 to 12 years of age), were selected in a farm located in Mexico D.F. The animals were divided into 2 groups: Group 1; mares treated with 2000 UI hCG when present (mas) ed Graff follicle equal or higher than 35 mm and inseminated 30 hours after the application of this hormone. Group 2; considered the control group in which insemination was made 30 hours after the mares presented follicle equal o higher than 35 mm by means of the ultrasound observation. For the artificial insemination, frozen semen in straw of 5 mL containing a total concentration of 1000 million spermatozoa was used. The gestation diagnosis was made by means of the observation of the embryonic vesicle in day 16 after the artificial insemination, with a transrectal ultrasound of 5 MHz. The results show that group 1 (mares treatment with hCG) have an 80% fertility percentage (8/10), whereas group 2 (control group), presented a 20% fertility (2/10). It is concluded that hCG helped to improve the pregnancy percentage in treated mares.

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Control de calidad externo en el estudio del semen/ External quality control sperm analysis

Curi, Susana Mercedes; Ariagno, Julia Irene; Chenlo, Patricia; Pugliese, Mercedes Norma; Sardi Segovia, Melba Lydia; Repetto, Herberto Ernesto H.; Mazziotta, Daniel; Blanco, Ana María
2008-06-01

Resumen en español En diciembre de 2005 se inició el Programa de Evaluación Externa de la Calidad (PEEC) para Laboratorios Andrológicos, organizado por la Facultad de Farmacia y Bioquimica, UBA y la Fundación Bioquímica Argentina. El objetivo del presente trabajo es informar la respuesta obtenida a la convocatoria de participar en el PEEC, dar a conocer los resultados de las primeras encuestas y compararlos con los relatados por otros programas extranjeros. Los parámetros evaluados fu (mas) eron movilidad (video), morfología (fotografías digitales en CD) y recuento espermático (RE) (suspensiones de espermatozoides). Se solicitó utilizar la estandarización OMS 1999. Participaron 60 laboratorios. Los valores de Error de Medida Permitidos (EMP) fueron de 60%, 50%, 15% y 30% para morfología, movilidad progresiva rápida (MPR), movilidad progresiva (MP) y RE, respectivamente. Los resultados hallados fueron similares a los publicados por el Programa de Control de Calidad Externo del ASEBIR-España para el "nivel óptimo" de las especificaciones de calidad del "estado del arte". Cuando el requerimiento de calidad fue "variabilidad biológica", los EMP disminuyeron significativamente para morfología y MPR: 28,2% y 29,3% no así para MP y RE. La alta aceptación de la convocatoria pone de manifiesto la necesidad de un PEEC-Andrología. El elevado Error de Medida obtenido para morfología y movilidad progresiva rápida denota la necesidad de estandarizar los procedimientos y criterios para lograr el requerimiento de calidad de variabilidad biológica. Resumen en inglés In December 2005 began the first External Quality Assessment Scheme (EQAS) for Andrology Laboratories organized by the School of Pharmacy and Biochemistry (University of Buenos Aires) and the Fundación Bioquímica Argentina. The aim of this study was to inform the response obtained after the enrollment to participate in the first Argentine EQAS, to discuss the results obtained in the first surveys and to compare them with the ones reported by other foreign programs. The (mas) evaluated parameters were sperm motility (videotapes), morphology (digital photography) and concentration (SC) (suspensions of spermatozoa). Participants were asked to follow WHO 1999. Nearly 60 laboratories throughout Argentine participated. The Total Allowable Error was 60%, 50%, 15% and 30% for morphology, progressive rapid motility (PRM), progressive motility (PM) and SC, respectively. The results found were similar to those published by the External Quality Program of the ASEBIR-Spain for the "optimum quality specification" on the "State of the art". When the established requirement of quality was "Biological Variability", the Total Allowable Error decreased significantly for morphology and PRM: 28.2% and 29.3% but not for PM and SC. The present data confirms the need for a Scheme. The high Total Error obtained for morphology and progressive rapid motility demamds to standardizing the procedures and establishing analytical goals based on Biological Variability.

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Desarrollo de embriones de bovino obtenidos por fecundación in vitro cultivados con células oviductales o medio condicionado y transferidos a hembras receptoras/ Bovine embryo development produced by in vitro fertilization cultured with oviductal cell or conditioned medium and transfer to recipients

RATTO, M; BERLAND, M.; WOLTER, M.; MATAMOROS, R.
1999-01-01

Resumen en español Se comparó el desarrollo in vitro de ovocitos obtenidos de ovarios de vaca de matadero, madurados, fecundados y cultivados in vitro bajo dos sistemas. Los ovocitos fueron cultivados en un medio de maduración a 39 °C, 5 % de CO2 y humedad relativa de 95 % durante 22 horas. Posteriormente, fueron incubados con espermatozoides seleccionados a través de una gradiente discontinua de Percoll. La tasa de maduración nuclear y fecundación fueron de 93,7 % (74/79) y 76 (mas) ,9 % (50/65) respectivamente. Un total de 252 ovocitos fecundados fueron cultivados in vitro. El porcentaje de desarrollo in vitro a las 2 días post-inseminación (embriones de 4-8 células) fue de 62,7 % (64/102) para los cigotos cultivados con células oviductales y de 67 % (100/150) para los cultivados en medio condicionado (P0,05). El porcentaje de desarrollo de mórulas fue de 17,6 % (18/102) para los cigotos cultivados con células oviductales y de 13,3 % (20/150) para los cultivados con medio condicionado (P0,05). Se obtuvo una tasa de desarrollo del 15,7 % (16/102) de blastocistos para aquellos cigotos cultivados con células oviductales. No se obtuvo blastocistos a partir de cigotos cultivados en medio condicionado. Cuatro blastocistos fueron transferidos a dos hembras receptoras. A los 42 y 57 días se encontró la presencia de un feto en cada hembra Resumen en inglés The in vitro development of matured and fertilized bovine oocytes was compared between two culture systems. Oocytes were collected by aspiration of follicles of 3-8 mm in diameter using an 18g needle. After morphological selection the oocytes were incubated at 39 0C, 5 % C02 y 95 % relative humidity, during 22 hours. Afterwards, oocytes were incubated with spermatozoa selected by Percoll gradient system. The rate of nuclear maturation and fertilization was 93,7 % (74/79) (mas) and 76,9 % (50/65), respectively. A total of 252 zygotes were cultured, 102 with oviductal cells and 150 in conditioned medium. The in vitro development on day 2 of culture (4- or 8-cell embryos) was 62,7 % (64/102) for the zygotes co-cultured with oviductal cells and 66,7 % (100/150) for the zygotes cultured in conditioned medium. The development to the morula stage was 17,6 % (18/102) for the zygotes co-cultured with oviductal cells and 13,3 % (20/150) for the zygotes cultured in conditioned medium. A statiscally significant difference was not found in the development of 4, 8-cell embryos or morula. The development of embryos up to the blastocyst stage was 15,7 % (16/102) for the zygotes co-cultured with oviductal cells. Two blastocysts were transferred to the uterine horn ipsilateral to the CL in two recipients by non-surgical embryo transfer. Pregnancy was confirmed by ultrasonography at 42 and 57 days detecting the presence of one conceptus in each animal. This work has shown that in vitro inseminated of bovine oocytes with espermatozoa prepared with modified BO and co-cultured with oviductal cells, can develop to the blastocysts stage, unlike those that were cultured with conditioned medium. Finally, it is important to mention that this is the first communication in Chile of pregnancy after in vitro fertilization of bovine oocytes

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Descripción anatómica e histológica de las gónadas en Sabaleta (Brycon henni, Eigenmann 1913)/ Anatomical and histological description of the gonads in Sabaleta (Brycon henni, Eigenmann 1913)

Montoya-López, Andrés F; Tabares, Carlos J; Echeverri, Amparo; Arboleda, Lucy; Olivera-Ángel, Martha
2006-06-01

Resumen en español Brycon henni es un Charácido endémico de Colombia. Con el objetivo de realizar la descripción anatómica e histológica de las gónadas, en un año, se capturaron 51 individuos en muestreos mensuales, se sacrificaron, se les realizó disección, se calculó el índice gonadosomático y hepatosomático, las gónadas se fijaron en formol al 10% y se procesaron con técnicas histológicas de rutina, se realizaron cortes de 7mm de espesor y se colorearon con hematoxilina-e (mas) osina. Los ovarios de B. henni son órganos en forma de sacos alargados, pares, simétricos, que se localizan ventralmente a la vejiga natatoria de la hembra; en los primeros estadios de desarrollo los ovarios presentan color rosa claro, a medida que avanza la madurez, se tornan de color más intenso hasta anaranjado, dado por los oocitos observados a simple vista. Dependiendo del tamaño, forma, coloración y visualización de oocitos a simple vista se clasificaron los ovarios en estadio I, II o III. Los Testículos de B. henni son órganos pares de forma sacular, presentan color blanco y se localizan ventralmente a la vejiga natatoria del pez. Los testículos inmaduros son simétricos. A medida que avanza el desarrollo se observa asimetría entre ellos, formándose secciones que no son iguales tanto en número como en forma para ambos testículos. Histológicamente en el ovario se describen las oogonias y las fases del complejo folicular: cromatina nucléolo, perinucleolar, alvéolo cortical y vitelogénesis. Para el testículo se describe la organización de los lóbulos y las células de la línea espermática: espermatogonias, espermatocitos, espermátides, espermatozoides. El desarrollo gonadal en B. henni muestra una relación inversa con la pluviosidad. Resumen en inglés Brycon henni is a colombian endemic characid. The purpose of this research was to describe in anatomical and histological level the gonads of this fish. Monthly for one year, Brycon henni specimen were caught, fishes were sacrificed, then a dissection was performed; the gondosomatic and hepatosomatic index were calculated, the gonads were fixed in formol 10% and processed with routine histological techniques, 7ìm thickness cuts were made, the cuts were coloreated with he (mas) matoxilin-eosin. Ovaries of B. henni are paired, lengthened, and symmetrical organs, they are located ventrally to the swimming bladder of the female. In the first stadiums of development, the ovary present a pink color, as it advances in maturity, it appears of orange color, given for oocites observed. Depending on size, form, coloration and visualization of oocites, we qualified ovaries in stadium I, II or III. Testicles of B. henni are paired and lengthened organs, they present white color, and they are located ventrally to the swimming bladder of the male. The immature testicles are symmetrical organs, as testicles advance in the development, asymmetry is observed between them. Histologically we described oogonium and the phases of the follicular complex: chromatin nucleolus, perinucleolar, cortical alveolus and vitellogenesis. For the testicle, we described the organization of the lobes and the cells of the spermatic line: spermatogonium, spermatocytes, spermatides and spermatozoa. The gonadal development in B. henni showed inverse relation with rainfall.

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Simplificación de la fertilización de ovocitos durante la producción in vitro de embriones bovinos/ Simplification of oocytes fertilization during in vitro production of bovine embryos/ Simplificação da fecundação de oócitos durante produção in vitro de embriões de bovinos

Urrego, Rodrigo; Tarazona, Ariel; Olivera Ángel, Martha; Camargo, Omar
2008-09-01

Resumen en portugués O objetivo deste estudo foi avaliar um novo procedimento de fertilização in vitro (FIV) de oócitos bovinos, que foi omitida na centrífuga esperma lavar os processos de seleção e de esperma. Dentro de cada um dos poços pratos convencionais quatro poços (poços externa) um novo bem menor (poços internos) cerca de 50 μl fato em vidro (0,3 mm de altura por 0,8 mm de diâmetro) foram introduziu. O procedimento foi de encher poços interna e externamente com 700 & (mas) #956; l meio de fertilizaηγo, até que a fossa foi coberto por meios internos e, em seguida, depositadas 10 CCOs em poços internos; então 30 μl previamente descongelados sêmen foi depositado no fundo da cova fora. Depois de uma hora é retirada a todo o conteúdo da cova, e foi deixada fora da doméstica no conteúdo do bem com o ambiente e células germinativas por um período de incubação de 16 h. A alegada zygotes foram cultivados em meio CR1aa por um período de 7 dias com uma mudança no meio-72h. Como um controle, utilizado uma gradiente de Percoll 45-90% de selecção de espermatozóides. A taxa de oócitos foi dividida (70.8 vs 73.1) e da proporção de oócitos que atingiu o estádio e foi Mórula blastocisto (18.8 vs 20.3), respectivamente. Os resultados obtidos com a nova metodologia proposta são semelhantes aos obtidos com a metodologia convencional (p Resumen en español El objetivo de este estudio fue evaluar un nuevo procedimiento de fertilización in vitro (FIV) de ovocitos bovinos, en el cual se omitió la centrifugación de los espermatozoides para los procesos de lavado y selección espermática. Dentro de cada uno de los pozos de los platos convencionales de cuatro pozos (pozos externos) se introdujo un nuevo pozo más pequeño (pozos internos) de aproximadamente 50 μl hecho en material de vidrio (0.3 mm de alto por 0.8 mm de (mas) diámetro). El procedimiento consistió en llenar los pozos interno y externo con 700 μl de medio de fertilización, hasta que el pozo interno quedara cubierto de medio, luego se depositaron 10 CCOs por pozo interno; luego 30 μl de semen previamente descongelado se depositaron en el fondo del pozo externo. Despuιs de una hora se removiσ todo el contenido del pozo externo y se dejσ el contenido del pozo interno con el medio y las células germinales por un periodo de incubación de 16 h. Los presuntos cigotos fueron cultivados en medio CR1aa por un periodo de siete días con un cambio de medio a las 72h. Como control, se utilizó un gradiente de Percoll 45-90% para la selección espermática. La tasa de de ovocitos divididos fue de (70.8 vs. 73.1) y la proporción de ovocitos que llegaron al estadio de morúla y blastocisto fue de (18.8 vs. 20.3), respectivamente. Los resultados obtenidos con la nueva propuesta metodológica son similares a los obtenidos con la metodología convencional (p Resumen en inglés This study was conducted to evaluate an in vitro fertilization (IVF) procedure that avoids the washing-selection-centrifugation of spermatozoa prior to coincubation with oocytes. A special dish was constructed as follows: in the middle of each of the 4-wells of a conventional plastic dish (larger wells), another little (≈50 μl) glass dish (inner well) was placed (0.3 mm-tall x 0.8 mm in diameter), in such a way that when the larger plate was filled with 700 (mas) 56;l of IVF media (Fert-TALP), the inner well was also filled up to overflowing. Ten in vitro matured oocytes were set into the inner well, and 30 μl of thawed semen were placed on the bottom of the outer well. After one hour of incubation, the media from the outer well was removed, and the well with the remaining media and the germ cells, were incubated for 16 hours. Presumptive zygotes were cultured in a CR1aa media for seven days with a culture media replace at 72 h. As a control, a conventional IVF, using the classical 45%-90% Percoll gradient selection, was carried out. The cleavage rates (70.8 vs. 73.1) and the proportion of oocytes reaching morula and blastocyst stages (18.8 vs. 20.3) by the "easy-IVF" were similar to the results obtained by the classical method (p

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Efectos de la leptina en el inicio de la pubertad en animales machos/ Effects of the leptin in the onset of puberty in animal males/ Efeitos da leptina no inicio da puberdade em animais machos

Quintero V, Juan C; Ruíz Cortez, Zulma T
2008-03-01

Resumen en portugués A leptina é um hormônio de 16 KDa produzida principalmente pelo tecido adiposo, codificada pelo gene ob e composta por 146 aminoácidos. Cumpre suas funções na periferia do organismo no eixo hipotálamo - hipófise - gônadas. Em varias espécies tem-se estudado o efeito deste hormônio na reprodução; as mudanças na concentração e em sua expressão poderiam estar associadas com o inicio da puberdade em diferentes espécies animais e em humanos. O papel da leptina (mas) na reprodução em machos tem sido estudado especialmente em ratas e ratos, porém também tem sido realizadas pesquisas em humanos e outras espécies animais. Nas células de Leydig, nos túbulos seminíferos, as espermatogônias e os espermatozóides, entre outros tipos de células, existe expressão dos receptores e o RNAm de receptores de leptina, o que indica que pode existir uma função importante da leptina nos testículos. Em geral, tem sido encontrado um efeito inibitório da testosterona com a secreção da leptina e vice versa, o qual indica que a leptina pode regular a esteroidogénese no testículo. A leptina também pode atuar nas células não diferenciadas do testículo para permitir sua diferenciação em espermatócitos e pode ajudar à célula a través de toda sua diferenciação e maturação até espermátides. A análise de todos estes resultados obtidos, permite considerar a leptina como um importante hormônio que pode estar envolvido em funções vitais do eixo neuroendócrino e reprodutivo do macho. Resumen en español La leptina es una hormona de 16 KDa producida principalmente por el tejido adiposo, codificada por el gen ob y compuesta por 146 aminoácidos. Cumple sus funciones en la periferia del organismo en el eje hipotálamo - hipófisis - gónadas. En varias especies se ha estudiado el efecto de esta hormona en la reproducción; los cambios en su concentración y en su expresión podrían estar asociados con el inicio de la pubertad en diferentes especies animales y en los humano (mas) s. El rol de la leptina en la reproducción del macho ha sido estudiado especialmente en ratas y ratones, pero también se han realizado investigaciones en humanos y otras especies animales. En las células de Leydig, en los túbulos seminíferos, las espermatogonias y los espermatozoides, entre otros tipos de células, hay expresión de los receptores y el RNAm de receptores de leptina, lo que indica que puede haber una función importante de la leptina en los testículos. En general, se ha hallado un efecto inhibitorio de la testosterona con la secreción de leptina y viceversa, lo cual indica que la leptina puede regular la esteroidogénesis en el testículo. La leptina también puede actuar en células no diferenciadas del testículo para permitir su diferenciación en espermatocitos y puede asistir a la célula a través de toda su diferenciación y maduración hacia espermátides. A través de todos estos resultados obtenidos, se observa a la leptina como una importante hormona que puede estar involucrada en funciones vitales del eje neuroendocrino y reproductivo del macho. Resumen en inglés The leptin is a 16 KDa hormone principally produced by the adipose tissue, codified by the ob gene and composed by 146 amino acids. This hormone carries out its functions at peripheral levels and in the hypothalamic- hypophysis - gonadal axis. In several species the effect of this hormone on reproduction and their concentration and expression changes might be associated with the onset of puberty in different animal species and in human beings. The role of leptin in male r (mas) eproduction has been studied especially in rats, mice, human beings, and other animal species. Leptin receptor and mRNA expression has been found in Leydig cells, seminiferous tubules, spermatogonies, spermatozoa, among other cells, indicating that leptin could have an important role in testicular function. An inhibitory effect of testosterone on leptin secretion has been found and vice versa, which indicates that leptin can regulate testicular steroidogenesis. Leptin can also act in non differentiated cells of the testis, promoting spermiogenesis. Then, leptin appears to be an important hormone probably involved in vital functions of the male neuroendocrine and reproductive axis.

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Peroxidación lipídica y antioxidantes en la preservación de semen: Una revisión

Membrillo Ortega, Agustín; Córdova Izquierdo, Alejandro; Hicks Gómez, Juan José; Olivares-Corichi, Ivonne María; Martínez Torres, Víctor Manuel; Valencia Méndez, Javier de Jesús
2003-12-01

Resumen en portugués Nos organismos aeróbicos o oxigênio é essencial para a vida, mas pode ser tóxico quando se apresentam situações favoráveis nas que se há uma produção exagerada de espécies de oxigênio reativa (ROS): anion super óxido (O2-) e hidróxilo (-OH), e pela geração do peróxido de hidrogeno (H2O2) que é uma espécie reativa do O2 e pode ser precursora dos radicais livres. As ROS contribuem ao dano molecular e estrutural que se apresenta em uma série de padeciment (mas) os em donde a capacidade antioxidante do organismo é repassada e, portanto incapaz de inativar as ROS, dando lugar ao processo chamado estresse oxidante. O dano provocado na membrana celular é induzido pelos radicais livres que levam a lipoperoxidação. O processo de congelamento e descongelamento do sêmen reduz a porcentagem de espermatozóides vivos, afetando com a mobilidade e a viabilidade, e, portanto a fertilidade do gameta, fenômeno atribuído a diversos fatores, incluindo as mudanças de temperatura e ao efeito das ROS. Durante o metabolismo as mitocôndrias do espermatozóide geram ROS que são inativadas pelos mecanismos antioxidantes. Para amenizar os efeitos das ROS gerados por mecanismos não fisiológicos ou em excesso se tem empregado uma variedade de antioxidantes, pretendendo anular ou minimizar seus efeitos. O objetivo desta revisão é identificar as causas que danificam as células espermáticas na preservação de sêmen e os sistemas de defesa antioxidante, enzimáticos e não enzimáticos. Resumen en español En los organismos aeróbicos el oxígeno es esencial para la vida, pero puede ser tóxico cuando se presentan situaciones favorables en las que sí hay una producción exagerada de especies de oxígeno reactivas (ROS): anión superóxido (O2-) e hidroxilo (-OH), y por la generación del peróxido de hidrógeno (H2O2) que es una especie reactiva del O2 y puede ser precursora de los radicales libres. Las ROS contribuyen al daño molecular y estructural que se presenta en un (mas) a serie de padecimientos en donde la capacidad antioxidante del organismo es rebasada y por lo tanto incapaz de inactivar las ROS, dando lugar al proceso llamado estrés oxidante. El daño provocado en la membrana celular es inducido por los radicales libres que llevan a la lipoperoxidación. El proceso de congelación y descongelación del semen reduce el porcentaje de espermatozoides vivos, afectando con la movilidad y la viabilidad, y por lo tanto la fertilidad del gameto, fenómeno atribuido a diversos factores, incluyendo los cambios de temperatura y al efecto de las ROS. Durante el metabolismo las mitocondrias del espermatozoide generan ROS que son inactivadas por los mecanismos antioxidantes. Para contrarrestar los efectos de las ROS generados por mecanismos no fisiológicos o en exceso se ha empleado una variedad de antioxidantes, pretendiendo anular o minimizar sus efectos. El objetivo de esta revisión es identificar las causas que dañan a las células espermáticas en la preservación de semen y los sistemas de defensa antioxidante, enzimáticos y no enzimáticos. Resumen en inglés In aerobic organisms oxygen is essential for life, but it can be toxic when favorable situations are presented in which an exaggerated production of reactive oxygen species (ROS): superoxide anion (O2-) and hydroxyl (-OH), and due to the generation of hydrogen peroxide (H2O2), a ROS that can be a precursor of free radicals. ROS contribute to the molecular and structural damage that is present in a series of ailments where the antioxidant capacity (antioxidants and enzymes (mas) ) of the organism is surpassed and is therefore unable to inactivate them, giving rise to the process called oxidative stress. The oxidative damage in the cell membrane is induced by the free radicals that lead to lipoperoxidation. The freezing and unfreezing process of the semen reduces the percentage of live sperm cells, thus affecting their mobility and viability, and therefore the gamete’s fertility, a phenomenon that is attributed to diverse factors, including temperature changes and ROS effects. During the metabolism of the spermatozoa, the mitochondria generate, unavoidably, ROS that are inactivated by the antioxidative mechanisms. To counteract the ROS effects generated by non-physiologic mechanisms or their excess, a variety of antioxidants has been used, seeking to annul or to minimize the effects. The object of this review is to identify the causes of damage to the spermatic cells during semen preservation and the antioxidative defense systems, both enzymatic and non-enzymatic.

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Muerte embrionaria temprana: ¿Tiene influencia el factor masculino?/ Early embryo death: Does the male factor play a role?

Gil Villa, Aura María; Cardona-Maya, Wálter Darío; Cadavid Jaramillo, Ángela Patricia
2007-11-01

Resumen en español Objetivo: Discutir el efecto que puede tener el factor masculino sobre la muerte embrionaria temprana. Método: Se hace una revisión de literatura de diferentes componentes del espermatozoide que pueden tener algún papel en la muerte embrionaria temprana. Resultados: Antes que ocurra la fusión entre la membrana plasmática del espermatozoide y la del oocito, ambos gametos deben sufrir un proceso de maduración que permita la fecundación y el desarrollo embrionario exi (mas) tosos. El estudio de las parejas con muerte embrionaria temprana, usualmente se aborda desde el factor femenino por la obvia relación de la mujer con su producto en desarrollo, pero no es ilógico suponer que una alteración genética o epigenética en el espermatozoide, tenga un papel importante en estas pérdidas por su importancia en el desarrollo placentario y embrionario. El espermatozoide posee algunas características como el empaquetamiento del ADN, la apoptosis y los antioxidantes en el plasma seminal, que protegen la integridad estructural y funcional de la célula germinal, permitiendo que el espermatozoide fecunde al oocito y contribuya al desarrollo embrionario. Sin embargo, alteraciones epigenéticas como el remodelamiento de la cromatina y la consecuente perturbación de los eventos relacionados con la impronta genómica podrían ser causas de origen paterno que pueden tener alguna representación en las muertes embrionarias tempranas como también lo son la ausencia o alteración del centrosoma, el acortamiento telomérico y la ausencia de RNA espermático. Conclusiones: El conocimiento de la intervención espermática en el desarrollo embrionario proporcionará bases para el entendimiento y el posible diagnóstico y tratamiento de diversas alteraciones reproductivas masculinas que puedan estar ocasionando fallas en el desarrollo posterior del embrión. Resumen en inglés Objective: To discuss the possible role of the male factor in early embryo death. Method: A detailed bibliographic review has been put together to establish which alterations in spermatozoa can be associated with early embryo death. Results: Before the fusion between plasma membranes of the sperm and the oocyte occurs, both germ cells must undergo a maturation process that allows successful fertilization and embryo development. The study of couples with early embryo loss (mas) is usually approached from the side of the woman due to the obvious relationship that exists between the female and the developing embryo. However, it is not illogical to suppose that a genetic or epigenetic alteration of the sperm could have important consequences on these losses due to the necessary contribution of the male gamete not only to embryonic but also to placental development. On the other hand, spermatozoa have certain characteristics such as a highly compact DNA, they undergo apoptosis and the seminal plasma contains antioxidants that protect the structural and functional integrity of the germ cell. These factors assure fertilization and embryo development. Nevertheless, epigenetic alterations of the sperm such as altered chromatin packing, mistakes in imprinting, absence or alteration of the centrosome, telomeric shortening and absence of sperm RNA, could affect functions leading to early embryo loss. Conclusions: Knowledge concerning sperm intervention previous to embryo development will provide the basis for better understanding and for possible diagnosis and treatment of diverse reproductive alterations in men that could impede embryo development.

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Alteraciones en la integridad del acrosoma y de la teca perinuclear en semen criopreservado de verraco/ Alterations in the integrity of the acrosome and perinuclear theca in cryopreserved boar spermatozoa

Barrientos Morales, Manuel; Juárez Mosqueda, María De L; Trujillo Ortega, María E; Montiel Palacios, Felipe
2009-01-01

Resumen en español El objetivo del estudio fue investigar el efecto de la criopreservación sobre la integridad del acrosoma y de la subestructura de la teca perinuclear (PTS) del espermatozoide de verraco. Se utilizó semen proveniente de seis verracos. El semen se colectó, se diluyó y se determinó la motilidad y concentración espermática, incluyendo en el estudio sólo los eyaculados con motilidad ≥70%. El semen diluido se dividió en dos muestras: una para evaluarse en fresco (mas) y otra para evaluarse después de la congelación-descongelación. Ambos tipos de muestras se utilizaron para evaluar la viabilidad espermática y la integridad del acrosoma mediante microscopía de luz usando la técnica de triple tinción y para evaluar la integridad de la PTS mediante microscopía electrónica. El semen congelado-descongelado tuvo mayor proporción (P Resumen en inglés The objective of this study was to investigate the effect of cryopreservation on the integrity of the acrosome and the perinuclear theca substructure (PTS) of boar spermatozoa. Semen from six boars was used. The semen was collected, diluted, and sperm motility and concentration determined. Only ejaculates showing ≥70% motility were used in this study. Diluted semen was divided in two samples: one to be evaluated fresh, and other to be evaluated after freezing-thawin (mas) g. Fresh and frozen-thawed semen samples were used to assess sperm viability and acrosome integrity by light microscopy using the triple staining technique and to evaluate the PTS integrity by electron microscopy. The frozen-thawed semen had a greater proportion (P

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Influencia de la impronta genómica masculina en la reproducción/ Influence of the male genomic imprinting on the reproduction

Vasco, G.C.; Gil Villa, A.M.; Piedrahita Ochoa, C.; Cardona Maya, W.; Cadavid Jaramillo, A.
2008-12-01

Resumen en español Objetivo: La impronta genómica es la modificación epigenética que ocurre de manera diferencial tanto en genes específicos del oocito como del espermatozoide de acuerdo con su origen paterno o materno, permitiendo así una expresión monoalélica. En esta revisión se realiza un análisis crítico de la información relacionada con el papel que tiene la impronta masculina sobre el éxito reproductivo. Metodología: Se hizo una búsqueda bibliográfica sobre algunos de (mas) los componentes que regulan la impronta geonómica masculina y el posible papel sobre los eventos reproductivos como la espermatogénesis y el desarrollo placentario y embrionario. Resultados: Este análisis de la literatura permitió valorar que los cambios estructurales, genéticos y epigenéticos que ocurren durante la formación del gameto masculino, pueden tener repercusiones en el desarrollo embrionario, principalmente en la formación de tejidos extraembrionarios como la placenta. Conclusión: Las alteraciones en los mecanismos moleculares implicados en el proceso de metilación del ADN durante la espermatogénesis, pueden generar errores en el patrón normal de expresión requerido para el adecuado desarrollo de los componentes feto-placentarios. Resumen en inglés Objective: Genomic imprinting is the epigenetic change that occurred differentially in the specific genes in spermatozoa and oocyte according to their paternal or maternal origin, thus allowing a monoallelic expression. This review is a critical analysis of the published information relating to the role of the male imprinting on the successful reproduction. Methods: We performed a literature search on some of the components that regulate the male genomic imprinting and th (mas) e possible role on reproductive events such as spermatogenesis, and placental and embryo development. Results: The literature analysis allowed us to appreciate structural, genetic and epigenetic changes occurring during the formation of the male gamete that could have an impact on embryo development, mainly in the formation of extra-embryonic tissues as the placenta. Conclusion: Alterations in the molecular mechanisms involved in the sperm DNA methylation during the spermatogenesis, could induce alterations in the normal pattern of expression required in the fetal-placental components development.

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Uso de midodrín y congelación de semen en el tratamiento de las alteraciones del transporte espermático.: Caso clínico/ Use of Midodrine and frozen/thawed semen to treat semen transport disturbances.: Report of two cases

Sánchez G, Raúl; Peña S, Patricio; Villagrán V, Eduardo
2000-01-01

Resumen en inglés Retrograde ejaculation severely compromises male fertility. The use of sympathicomimetics for the treatment of this condition has poor results, except in patients with partial retrograde ejaculation, whose semen has a higher spermatozoa concentration. The semen of two patients with partial retrograde ejaculation was collected and frozen after the injection of a sympathicomimetic (Midodrine). The frozen/thawed samples were mixed with fresh semen recently ejaculated to obta (mas) in a minimal number of motile spermatozoa, and used for intrauterine insemination (> de 1 x 106 motile spermatozoa/ml). In both cases, pregnancies that developed satisfactorily, were obtained. (Rev Méd Chile 2000; 128: 93-97)

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Transfection of Gametes: A Method to Generate Transgenic Animals | Transfección de Gametos: Un Método para Generar Animales Transgénicos

Esponda, Pedro

Conferencia dictada durante la IV Reunión Anual de la Sociedad de Andrología y Gametología de Chile, Temuco, Chile, Enero, 2005. | The production of transgenic animals (TA) using transfected spermatozoa or eggs is commented. Different methods have been employed to introduce transgenes into the gamet...

DRIVER (Spanish)

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Sperm design and sperm function

Malo, Aurelio F.; Gomendio, Montserrat; Garde, Julian; Lang-Lenton, Barbara; Soler, Ana J.; Roldán, Eduardo

4 pages.-- PMCID: PMC1618917.-- Printed version published on June 22, 2006. | Spermatozoa vary enormously in their form and dimensions, both between and within species, yet how this variation translates into fertilizing efficiency is not known. Sperm swimming velocity is a key determinant of male fe...

DRIVER (Spanish)

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Sperm design and sperm function

Malo, Aurelio F.; Gomendio, Montserrat; Garde, José Julián; Lang-Lenton, Barbara; Soler, Ana J.; Roldán, Eduardo
2006-02-23

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Selection against spermatozoa with fragmented DNA after postovulatory mating depends on the type of damage

Hourcade, Juan D.; Pérez-Crespo, Miriam; Fernández González, Raúl; Pintado, Belén; Gutiérrez-Adán, Alfonso
2010-01-31

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Perfil seminal en trabajadores expuestos a plaguicidas inhibidores de la colinesterasa.

Mármol-Maneiro, Lenys; Fernández-D’Pool, Janice; Sánchez, Betty J.; Sirit, Yadira
2003-06-01

Resumen en español El objetivo del presente estudio fue determinar y comparar las características físico-químicas y citomorfológicas del semen, en trabajadores expuestos a plaguicidas inhibidores de la colinesterasa, y relacionar estos hallazgos con los niveles de colinesterasa total en sangre. Se estudiaron 30 individuos no expuestos y 29 expuestos, del sexo masculino, entre 20 y 54 años de edad, con una exposición promedio de 4 horas diarias a plaguicidas inhibidores de la colineste (mas) rasa, durante un período variable de tiempo (con un año mínimo de exposición). A todos los sujetos estudiados se les realizó una evaluación médica, mediante historia médico ocupacional y examen físico completo. De cada uno de ellos se obtuvo muestra sanguínea para determinar niveles de colinesterasa total, mediante el método del Hidroxamato de Hestrin modificado. Se practicaron espermatogramas en muestras de semen obtenidas por masturbación reciente, luego de un período de abstinencia sexual de 3 días. Los datos obtenidos se procesaron y analizaron con el programa estadístico computarizado SAS. Los resultados mostraron diferencias significativas (p Resumen en inglés The objective of this study was to determine the physical, chemical and cytomorphologic characteristics of semen obtained from workers exposed to cholinesterase inhibitor insecticides and compare them with samples of the same nature obtained from unexposed subjects, and in addition, to correlate those findings with blood levels of cholinesterase. The study group consisted of 29 adult males, age range 20-54, that were exposed to cholinesterase inhibitor insecticides during (mas) 4 hours per day for a variable lapse (one year minimum), whereas the control group consisted of 30 unexposed individuals of the same gender, and similar age range. A thorough medical examination was performed in every individual. It consisted of an occupational medical history and complete physical exam. A blood sample was obtained in all the subjects in order to determine total cholinesterase levels by the modified S. Hestrin Hydroxamate method. Semen analysis was done in specimens collected after recent masturbation following a 3-day abstinence period. The data was processed and analyzed by the SAS computerized statistics program. The results revealed significant differences between both groups (p

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Molecular cloning of Senegalese sole (Solea senegalensis) follicle-stimulating hormone and luteinizing hormone subunits and expression pattern during spermatogenesis

Cerdà, Joan; Chauvigné, François; Agulleiro, María J.; Marin, Elena; Halm, Silke; Martínez-Rodríguez, Gonzalo; Prat, Francesc
2008-05-01

Digital.CSIC (Spain)

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Molecular and functional characterization of voltage-gated sodium channels in human sperm

Pinto Pérez, Francisco M.; Ravina, Cristina G.; Fernández-Sánchez, Manuel; Gallardo-Castro, Manuel; Cejudo-Román, Antonio; Candenas de Luján, M. Luz
2009-07-16

Digital.CSIC (Spain)

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Male Fertility and Sex Ratio at Birth in Red Deer

Gomendio, Montserrat; Malo, Aurelio F.; Soler, Ana J.; Fernández-Santos, M. Rocío; Esteso, Milagros C.; García, Andrés J.; Roldán, Eduardo; Garde, José Julián
2006-12-01

Digital.CSIC (Spain)

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Implantes anticonceptivos/ Contraceptives implants

Montenegro-Pereira, Erick; Lara-Ricalde, Roger; Velásquez-Ramírez, Norma
2005-03-01

Resumen en español El objetivo del presente trabajo es actualizar la información disponible sobre implantes subdérmicos como métodos anticonceptivos. Existen en uso clínico tres tipos de implantes: Norplant, desde 1985, consistente en seis cápsulas de dimetilpolisiloxano con levonorgestrel; Jadelle, desde 1995, utiliza dos barras de una mezcla del mismo polímero y misma progestina que Norplant; e Implanon, 1999, una sola varilla de acetato de etilenvinilo mezclado con etonogestrel. Se (mas) insertan bajo la piel del brazo con anestesia local; liberan la progestina a tasas constantes después del primer año y se usan por cinco y tres años, respectivamente. El principal mecanismo de acción de los dos primeros es la inhibición de la penetración espermática y del Implanon, la inhibición de la ovulación. Finalmente, se concluye que los implantes subdérmicos forman parte de los anticonceptivos más eficaces, ya que se producen 0.1 embarazos por 100 mujeres el 1er. año de uso. Alteran la menstruación en 70% de las mujeres. Como eventos más frecuentes provocan aumento de peso, cefalea y mastalgia, no obstante, las tasas de continuidad son cercanas a 90% en el primer año de uso. Resumen en inglés The objective of this work it is to up date the information about implantable contraceptives. Description: There are three contraceptive implants in clinical practices: Norplant, since 1985, that consists of 6 capsules of polidimethylsiloxane containing levonorgestrel; Jadelle, since 1995, two rods of a mixture of the same polymer and progestin thet Norplant uses, and Implanon, since 1999, a single rod of ethylenevinyl acetate mixed with etonorgestrel; they are inserted s (mas) ubdermaly in the arm, under local anesthesia; they release the progestin at constant rates after the first year and have a life-span of 5 and 3 years, respectively. Both, Norplant and Jadelle make the cervical mucus impenetrable by spermatozoa. Implanon inhibits ovulation. Other implantable contraceptives under research-contain. Nomegestrol (Uniplant) and nestorone (Elcometrin) Conclusions: Implantable contraceptives are some of the most effective methods, only 0.1 pregnancies per 100 women in the first year of use. All of them produce vaginal bleeding disturbances in about 70% of users. Other events observed are weight increase, headache and breast tenderness. The continuation rates are about 90% in the first year of use

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Histologia del sistema reproductor masculino de Helobdella hyalina (Hirudinea, Glossiphoniidae) en Argentina/ Histology of the male reproductive system of Helobdella hyalina (Hirudinea, Glossiphoniidae) in Argentina

Gullo, Betina Sandra
2004-03-01

Resumen en inglés A detailed preliminary histological analysis of Helobdella hyalina Ringuelet, 1942 male system from Los Talas, Buenos Aires, Argentina is described. Six pairs of testisacs, located between the crop caeca, form the male reproductive system. Each testisac is clothed by the mesotelium. Inside it, the germinal cells are connected to the citophore and develop functional unit called poliplast. The spermatozoa are released into testisacs after the reabsortion of the citophore. F (mas) ive stages of spermatogenesis are described taking into account the successive maturation stages of germinal cells and the changes in the citophore size. Lining cells and gland cells were found in the seminal vesicle. Five different types of gland cells are placed inside the ejaculatory ducts, as well as two kinds of cells are found in its distal portion: type 1, which produces eosinophilic granular secretion, type 2, with amorphous and slightly eosinophilic. Three distinct gland cells are located in the proximal portion of the duct: type 3, which produces a strongly eosinophilic granular secretion; type 4, with a negative eosinophilic amorphous secretion and type 5, with a basophilic granular secretion. Type 5 gland cells are described for the ducts of this species only.

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Fertilidad en ovejas de pelo inseminadas con semen congelado rediluido con plasma seminal/ Fertility in hair sheep inseminated with freeze spermatozoa rediluited with seminal plasma

Domínguez Rebolledo, Alvaro; Navarrete Sierra, Luis; Cruz Tamayo, Alvar; Aguiar Loria, Alfonso; Erosa Denis, Sergio; Bolio Oses, Raúl; González Parra, Eugenia; Paredes Monsreal, Lorenzo; Ramón Ugalde, Julio
2007-02-01

Resumen en español El objetivo del presente estudio fue determinar la viabilidad espermática del semen congelado rediluido con plasma seminal a través de la fertilidad de 146 ovejas de pelo, inseminadas vía cervical e intrauterina. La fertilidad se midió en dos tiempos; retorno a celo a los 17 días postinseminación y diagnóstico de gestación por ultrasonografia a los 45 días postinseminación. Los datos de fertilidad se analizaron mediante el test de Ji-cuadrado. Los resultados obt (mas) enidos muestran que la adición del plasma seminal en el semen fresco no mejora la fertilidad (P>0,05) obtenida vía cervical e intrauterina, por el contrario, el semen congelado rediluido con plasma seminal, tanto en su aplicación cervical como intrauterina, mejora (P Resumen en inglés The objective of this study was to determine the spermatozoa viability of the frozen semen rediluted with seminal plasma through the fertility of 146 hair sheep inseminated cervical and intrauterine way. The fertility was measured in two times; return to estrus to the 17 days postinsemination and pregnancy diagnostic by ultrasound scanning to the 45 days postinsemination. The data of fertility were analyzed by means of the Chi-Square test. The obtained results showed that (mas) the addition of the seminal plasma in the semen fresh does not improve the fertility (P>0.05) obtained cervical and intrauterine way, on the contrary, the semen frozen rediluted with seminal plasma, so much in its cervical application as intrauterine, improvement (P

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Evidence for the Involvement of Aquaporins in Sperm Motility Activation of the Teleost Gilthead Sea Bream (Sparus aurata)

Zilli, Loredana; Schiavone, Roberta; Chauvigné, François; Cerdà, Joan; Storelli, Carlo; Vilella, Sebastiano
2009-05-01

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Evaluación de la posible incidencia de la varicocelectomía sobre el estrés oxidativo asociado con varicocele

Acevedo, Cyntia; Hidalgo, María E; Venegas, Andrés; Lissi, Eduardo
2000-12-01

Resumen en español En este trabajo se compararon sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico (TBARS) de espermios, actividad de catalasa seminal y sanguínea, luminiscencia urinaria, en pacientes infértiles antes y después de someterse a varicocelectomía. Se encontró una disminución en los niveles de lipoperoxidación espermática (expresado como nanomoles de malonildialdehído), de los pacientes en estado posoperatorio en relación con los mismos pacientes antes de la operación. A (mas) simismo se aprecia disminución en la luminiscencia urinaria y en la actividad de catalasa tanto seminal como sanguínea en el mismo grupo de pacientes. Los resultados permiten concluir que la corrección quirúrgica mejora el estrés oxidativo sistémico, evaluado a través de la actividad enzimática y la luminiscencia urinaria, que ha sido propuesta como índice del estrés oxidativo sistémico. Los espermiogramas muestran un aumento en el número y la motilidad de los espermios. También el estrés oxidativo local disminuye, lo que se demuestra con el ensayo de TBARS Resumen en inglés In this paper, TBARS of spermatozoa, the activity of seminal and blood catalase and the urinary luminiscence were compared in infertile patients before and after undergoing varicocelectomy. It was found a decrease in the levels of spermatic lipoperoxidation (expressed as nanomols of MDA) of the patients in postoperative stage compared with the same patientes before the operation. It was also observed a reduction in the urinary luminiscence and in the seminal and blood cat (mas) alase activity in the same group of patients. The results allowed to conclude that the surgical correction improves the systemic oxidative stress evaluated through the enzimatic activity and the urinary luminiscence that has been proposed as an index of systemic oxidative stress. The spermiograms showed an increase in the number and motility of the spermatozoa. The local oxidative stress decreases, too, which is proved by the TBARS assay

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Efficient Generation of Transgenic Mice with Intact Yeast Artificial Chromosomes by Intracytoplasmic Sperm Injection

Moreira, Pedro N.; Giraldo, Patricia; Cozar, Patricia; Pozueta, Julio; Jiménez, Adela; Montoliu, Lluís; Gutiérrez-Adán, Alfonso
2004-07-30

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Effect of Transgene Concentration, Flanking Matrix Attachment Regions, and RecA-Coating on the Efficiency of Mouse Transgenesis Mediated by Intracytoplasmic Sperm Injection

Moreira, Pedro N.; Pérez-Crespo, Miriam; Ramírez Ortiz, Miguel Ángel; Pozueta, Julio; Montoliu, Lluís; Gutiérrez-Adán, Alfonso
2006-10-11

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Determinación de la variabilidad en la condensación de la cromatina espermática y alfa-glucosidasa seminal con relación al espermiograma/ Chromatin condensation and seminal alpha glucosidase variability and their relationship to spermiogram

Sánchez G, Raúl; Peña S, Patricio; Miska, Werner; Henkel, Ralf
2000-05-01

Resumen en inglés Background: Sperm functional tests as an addition to semen analysis have been used to study the fertilization ability of spermatozoa. Besides the usual variability of the seminal analysis an individual variability in the results of functional tests has been recently found. Aim: to evaluate in a three months period, the individual variability of sperm parameters and sperm maturation using the chromatin condensation test and epidydime alpha-glucosidase (that allows to discr (mas) iminate obstructive processes). Material and method: The evaluation was carried out in two donors (12 samples) apparently in good health. One of them presented evident semen analysis alterations (donor 1) and the other was considered normal under the WHO standards (donor 2). Results: The averages for donor 1 were: Sperm count 24x106 sperm/ml (range 10-58x106 sperm/ml), morphology 31.8% (range 30-35%), total motility 33% (range 20-42%), sperm maturation 38% (range 28-78%), a-glucosidase 8.65 (U/ml (range 5-10 (U/ml). The averages for donor 2 were: Sperm count 96x106 sperm/ml (range 50-140x106 sperm/ml), morphology 32.2% (range 30-35%), total motility 69% (range 58-78%), sperm maturation 17% (range 7-30%), a-glucosidase 36.9 (U/ml (range 20-82 (U/ml). Conclusions: These results show that significant variations can be found in the sperm parameters and in seminal plasma a-glucosidase; however these variations are generally maintained at the normal or abnormal ranges for each individual, except the sperm morphology that was constant and with low variation in both donors. The determination of the chromatin condensation in the semen analysis gives an additional information about the grade of sperm maturation and would be of great value for differentiating between sperm samples that show similar morphology values. (Rev Méd Chile 2000; 128: 483-9)

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Características espacio-temporales del desarrollo embrionario preimplantacional de Myocastor coypus (coipo)/ Spatio-temporal characteristics of the preimplantational embryonic development in Mycastor coypus (coypu)

Felipe, Antonio E.
2006-11-01

Resumen en español El objetivo de este trabajo fue caracterizar el desarrollo preimplantacional del coipo (Myocastor coypus). Se realizó el seguimiento colpocitológico y apareamiento dirigido de 33 hembras. La división en estadíos se efectuó considerando atributos morfológicos. El número medio de embriones por hembra fue de 6.3 ± 2.03 (rango de 1 a 11). En el día 1 poscoito (p.c.), predominaron ovocitos y en el día 2 p.c. las cigotas. El período de segmentación abarcó desde el (mas) día 3 al día 6 p.c. Las mórulas se recolectaron desde el día 6 al día 9 p.c., en tanto que los estadíos de blastocisto se recolectaron en los días 8 y 9 p.c. Por el lavaje de oviductos, se recolectaron embriones en los estadíos de cigota hasta mórulas con menos de 30 células y por lavaje de hemiúteros se obtuvieron desde mórulas hasta blastocistos en crecimiento. El desarrollo preimplantacional abarcó 10 días. Resumen en inglés Myocastor coypus (coypu) is a rodent world-wide used as a skin species. The purpose of the present study was to determine the morphology of the preimplantation embryonic development in Myocastor coypus (coypu). Thirty-three virgin and sexually mature females allotted in 6 family nuclei and 1 male were utilised. The mating program implied the daily colpocytological examination by using standardised routine techniques. Samples for the colpocytological followup were collecte (mas) d from all the animals between 11 and 11:30 hours a.m. The observation of vaginal smears was done directly within 5 minutes of sampling. The controlled mating methodology was used. After the oestrus was established by colpocytology, the female was immediately moved to the male's pen. The embryonic age was determined in days post-coitus (d.p.c.), establishing as day 0 the day when spermatozoa were identified in the vaginal smear. Oocytes and embryos were obtained by flushing from day 0 to 10 post-coitus (p.c.). On day 1 p.c., oocytes predominated whereas on day 2 p.c. zygote were predominant. The cleavage period was from day 3 to day 6 p.c. Morulae were collected from day 6 to 9 p.c., whereas blastocysts were collected in days 8 and 9. From oviduct flushing, embryos in zygote and up to morula with less than 30 cells stage were recovered. Embryos in morula with 30 or more cells and up to blastocyst in growth stage were collected from the flushing of hemiuteri.

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Autocrine regulation of human sperm motility by tachykinins

Pinto Pérez, Francisco M.; Ravina, Cristina G.; Subiran, Nerea; Cejudo-Román, Antonio; Fernández-Sánchez, Manuel; Irazusta, Jon; Garrido, Nicolás; Candenas de Luján, M. Luz
2010-08-26

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An improved and simplified terminology for reproductive classification in fishes

Brown-Peterson, Nancy; Lowerre-Barbieri, Sue K.; Macewicz, Beverly J.; Saborido-Rey, Fran; Tomkiewicz, Jonna; Wyanski, David
2007-07-11

Digital.CSIC (Spain)