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Descripción de genotipos de Echinococcus granulosus obtenidos de especímenes de hidatidosis humana/ Echinococcus granulosus genotypes in samples of human hydatidosis

MANTEROLA, CARLOS; MELO, ANGÉLICA; VIAL, MANUEL; ROA, JUAN CARLOS; MORA, JAVIER
2006-12-01

Resumen en español Introducción: Se ha descrito variabilidad ambiental de Echinococcus granulosus (Eg). Se han reportado 10 genotipos y cierta heterogenicidad intergenotipo en estudios con material proveniente de animales. El objetivo de este estudio es describir los resultados de un protocolo de genotipificación de Eg en muestras de hidatidosis humana. Material y método: Estudio de corte transversal. Se recolectó el líquido hidatídico de una muestra consecutiva de pacientes interveni (mas) dos quirúrgicamente por hidatidosis hepática y pulmonar en hospitales de Temuco entre julio de 2004 y septiembre de 2005. Se diseñó un protocolo de extracción de ADN para Eg en muestras homogeneizadas de aspirado de quistes hidatídicos. Se emplearon 2 sistemas de reacción de polimerasa en cadena (PCR): PCREg9 y PCREg16; ambos en concentraciones de MgCl2 al 2mM. Para PCREg9, se utilizaron los primers Eg9F y Eg9R a concentraciones de 0.5 mM, empleándose 35 ciclos con temperatura de hibridación a 60°C. Para PCREg16 se utilizaron los primers Eg16F y Eg16R a concentraciones de 0,5 mM, empleándose 35 ciclos con temperatura de hibridación a 65°C. Los productos de las PCR fueron digeridos con una enzima de restricción (Rsa1) para la discriminación de los genotipos. Resultados: Se analizaron 25 muestras, 4 provenientes de quistes pulmonares y 21 de quistes hepáticos. Se logró amplificación de Eg en 22 de 25 muestras (88%). La digestión enzimática reveló la presencia de 3 genotipos posibles: en 21 de 22 muestras (95,45%) se observó un patrón de restricción correspondiente a los genotipos G1 ó G7 y en la muestra restante a los genotipos G4 ó G7. Conclusión: Con los sistemas de PCR empleados se detectó ADN de Eg Resumen en inglés Introduction: Environmental variability of Echinococcus granulosus (Eg) has been described. 10 genotypes have been reported as well as a certain intergenotype heterogenicity in studies with material of animal origin. The aim of this study is to describe the results of an Eg genotypification protocol in samples of human hydatidosis. Materials and methods: Cross-sectional study. The hydatid fluid was collected from a consecutive sample of patients operated on for hepatic an (mas) d pulmonary hydatidosis at hospitals in Temuco between July, 2004 and September, 2005. A DNA extraction protocol was designed for Eg in homogenized samples of hydatid cyst aspirate. 2 polymerase chain reaction (PCR) systems were used: PCREg9 and PCREg16; both in concentrations of 2mM MgCl2. For PCREg9, Eg9F and Eg9R primers were used at concentrations of 0.5 mM, using 35 cycles with a hybridization temperature of 60°C. For PCREg16 Eg16F and Eg16R primers were used at concentrations of 0.5 mM, using 35 cycles with a hybridization temperature of 65°C. The PCR products were absorbed with a restriction enzyme (Rsa1) in order to distinguish the genotypes. Results: 25 samples were analyzed, 4 from pulmonary cysts and 21 from hepatic cysts. Eg amplification was achieved in 22 of the 25 samples (88%). The enzymatic digestion revealed the presence of 3 possible genotypes: in 21 of 22 samples (95.45%) a restriction pattern was observed corresponding to the G1 or G7 genotypes, and the remaining samples to the G4 or G7 genotypes. Conclusion: With the PCR systems used, Eg DNA was detected

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Presencia del virus de Epstein-Barr en casos colombianos de linfoma de Hodgkin y su relación con la respuesta al tratamiento/ Epstein-Barr virus presence in Colombian Hodgkin lymphoma cases and its relation to treatment response

Quijano, Sandra; Saavedra, Carlos; Fiorentino, Susana; Orozco, Oscar; Bravo, María Mercedes
2004-06-01

Resumen en español En el desarrollo y patogénesis del linfoma de Hodgkin se ha propuesto al virus de Epstein-Barr como posible factor etiológico debido a la detección de ADN viral en las células de Reed-Sternberg en un subgrupo de tumores y a los altos niveles de expresión de la proteína latente de membrana 1 (LMP-1). El objetivo de este estudio fue determinar la presencia de virus de Epstein-Barr en 67 ganglios linfáticos de pacientes con diagnóstico confirmado de linfoma de Hodgki (mas) n mediante hibridación in situ para la detección de transcritos de ARN del virus de Epstein-Barr e inmunohistoquímica para la detección de la proteína oncogénica LMP-1. La presencia del virus se relacionó con el subtipo histológico, la respuesta al tratamiento de los pacientes y el fenotipo del infiltrado linfocitario. En el 67% de los casos se detectaron transcritos de virus de Epstein-Barr, la proteína LMP-1 se detectó en 56,7% de los casos en la célula tumoral de Reed-Sternberg. La presencia del virus en cada tipo histológico fue de 69,81% en esclerosis nodular, 85,71% en celularidad mixta y 40% en clásico. El virus de Epstein-Barr se detectó con mayor frecuencia en niños (84,2%) en comparación con los adultos (60,4%) y los pacientes positivos para el virus mostraron mejor respuesta al tratamiento, reflejada en una menor tendencia a presentar recaídas. El análisis del infiltrado mostró un predominio de linfocitos T CD4 y presencia de linfocitos T CD8, con mayor expresión de ambas subpoblaciones en casos positivos para virus de Epstein-Barr. Los resultados muestran un alto porcentaje de infección por virus de Epstein-Barr con una probable implicación significativa en la respuesta al tratamiento, lo que sugiere que la detección de virus de Epstein-Barr se podría usar como marcador de pronóstico en este tipo de linfoma. Resumen en inglés The role of Epstein-Barr virus as etiologic agent in Hodgkin lymphoma (HL) development has been supported by the detection of viral DNA in the Reed-Sternberg cell in a subset of HL, and the high levels of latent membrane protein 1 expression in these tumors. To gain further evidence of this relationship, lymph nodes from 67 patients with HL were analyzed for the presence of Epstein-Barr virus using EBERs in situ hybridization and LMP-1 immunohistochemistry. Virus presence (mas) was related to histological subtype, patients´ treatment response and tumor infiltrating lymphocytes phenotype. EBERs transcripts were found in 67% of the cases and LMP-1 in the Reed-Sternberg tumor cells at a 56.7% rate. The prevalence, as determined by histological subtype, was 69.81% for nodular sclerosing, 85.71% for mixed cellularity and 40% for lymphocyte-rich. Epstein-Barr virus presence was more frequent in children (84.2%) in comparison with adults (60.4%). Positive patients presented higher failure-free survival rates than Epstein-Barr virus negative patients. CD4 positive infiltrating T cells were present in a higher proportion in relation to CD8 positive T infiltrating cells, the mean percentages for both subsets were higher in Epstein-Barr virus positive cases. A high percentage of Epstein-Barr virus was present in HL with a probable association with treatment response. This suggests an application of Epstein-Barr virus detection to use as a prognosis marker in treatment response for HL cases.

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EVALUACIÓN DE DIFERENTES MÉTODOS DE EXTRACCIÓN DE ADN DE MICOPLASMAS PARA SU EMPLEO EN EL DIAGNÓSTICO POR PCR/ EVALUATION OF DIFFERENT DNA EXTRACTION METHODS FROM MYCOPLASMA TO BE EMPLOYEES IN THE DIAGNOSTIC BY PCR

Hernández, Yenney; Lobo, Evelyn; Martínez, Siomara; Zamora, Loidy
2009-08-01

Resumen en español El objetivo del presente trabajo fue evaluar diferentes métodos de extracción de ADN de micoplasmas, para su empleo en el diagnóstico por PCR. La caracterización de la cepa de Mycoplasma arginini utilizada como control positivo, se realizó con el empleo de los estudios morfológicos y las pruebas bioquímicas y enzimáticas. A continuación se procedió a la obtención de un cultivo homogéneo de la cepa de Mycoplasma arginini, que permitiera evaluar tres métodos de (mas) extracción de ADN de micoplasmas para su utilización en el ensayo de PCR. Se probaron los métodos de extracción fenol _cloroformo, centrifugación y centrifugación con choque térmico en muestras clínicas de cultivos celulares, sueros y productos biofarmacéuticos, que habían sido testadas por el método de cultivo y la Hibridación de Ácidos Nucleicos (HAN). Como resultado se obtuvo la cepa de Mycoplasma arginini caracterizada y evaluada. Tanto el método de fenol-cloroformo, como la centrifugación y centrifugación con choque térmico, más sencillos, brindaron similares resultados cuando se realizó la PCR utilizando la cepa tipo de Mycoplasma arginini. Se demostró que los métodos de choque térmico y centrifugación son eficientes para la obtención de ADN de micoplasmas a partir de muestras clínicas con el empleo de la PCR, comparándose estos resultados con los obtenidos por cultivo y la HAN. Resumen en inglés The aim of this work was to evaluate different DNA extraction methods of mycoplasma with the use of PCR. The characterization of Mycoplasma arginini strain use as positive control in this test was carried out, by means of morphological studies and biochemical and enzymatic tests, in order to obtain a homogenous culture, which allowed evaluating three mycoplasma DNA extraction methods for their use in the PCR test. Methods based on centrifuge and thermal shock with centrif (mas) uge were proven for the DNA extraction in cell culture clinical samples, sera and biopharmaceutical products, which had been tested by culture method and Nucleic Acid Hybridization (NAH). Mycoplasma arginini, strain was characterized and evaluated. Either phenol-chloroform extraction as well as two more simple methods describe above, brought the same results when the PCR assay was carried out using M. arginini strain. It has been demonstrated that the methods based on centrifuge and thermal shock with centrifuge are efficient to obtain Mycoplasma DNA from clinical samples with the use of PCR, comparing these results with those obtained by culture method and NAH.

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Detección de Mycoplasma pneumoniae mediante PCR-hibridación in vitro en niños con infección respiratoria/ Mycoplasma pneumoniae detection using PCR-in vitro hybridization in children with respiratory infection

Escobar, María Fernanda; Delgado, María del Pilar; Jaramillo, Carlos
2005-12-01

Resumen en español Antecedentes: Las infecciones respiratorias agudas (IRA) son una de las causas más frecuentes de enfermedades en el mundo y pueden asociarse a complicaciones graves, entre las que la neumonía ocupa un lugar prioritario; diversos agentes virales y bacterianos se implican en su desarrollo. Recientemente Mycoplasma pneumoniae ha adquirido gran importancia ya que estudios epidemiológicos sugieren un aumento en la incidencia de enfermedades respiratorias causadas por este p (mas) atógeno. Sin embargo, los laboratorios clínicos enfrentan varias dificultades para su detección haciendo necesario el estudio de nuevas técnicas moleculares. Objetivo: Detección de M. pneumoniae mediante PCR-hibridación in vitro en niños con infección respiratoria. Métodos: Utilizando la técnica de PCR-hibridación in vitro se analizaron 36 hisopados orofaríngeos de niños entre los 0 y 9 años de edad con infección respiratoria; 36% presentaron neumonía y el 30% bronconeumonía. Resultados: La implementacion y utilización de la técnica de PCR-hibridación in vitro para la detección de M. pneumoniae permitió detectar su ADN en el 67% de los pacientes estudiados. De éstos, el 33% tenía diagnóstico de neumonía. Conclusión: La técnica de PCR-hibridación in vitro demostró ser útil en la detección de M. pneumoniae en las muestras analizadas. Los resultados de este estudio evidencian que la presencia de ácidos nucleicos de este patógeno es frecuente en las muestras respiratorias analizadas y sugiere que el microorganismo puede ser un agente etiológico frecuente de neumonías atípicas y de otras patologías respiratorias Resumen en inglés Background: Acute respiratory infection is considered one of the main causes of morbidity worldwide; it can be associated to serious complications. A great number of viral and bacterial agents have been implicated in the development of the disease. Recently, importance has been given to Mycoplasma pneumoniae as a respiratory pathogen, since epidemiologic studies suggest a raise in the incidence of diseases due to this microorganism. Nevertheless, nowadays clinical laborat (mas) ories deal with a variety of difficulties in the diagnosis of this agent, raising the need for other molecular methods for its detection. Objective: The detection of M. pneumoniae in children with respiratory infection by a PCR-in vitro hybridization technique. Methods: 36 oropharyngeal swabs from children between 0 and 9 years of age with respiratory infection were analyzed by PCR-in vitro hybridization; 36% had pneumonia and 30% bronchopneumonia. Results: The implementation of the PCR-in vitro hybridization for the detection of M. pneumoniae in patients with respiratory infection allowed the detection of the pathogen's DNA in 67% of the patients studied. Of these, 33% had pneumonia. Conclusion: PCR-in vitro hybridization is useful for the detection of M. pneumoniae. Our results show the frequent presence of nucleic acids of M. pneumoniae in the samples studied and suggest this microorganism can be a frequent causal agent of respiratory infection

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Estudio de correlación entre cepas Escherichia coli sorbosa negativa y su capacidad de producir enterotoxinas/ Study of correlation between negative sorbose E. coli strains and their enterotoxin-producing capacity

Águila, Adalberto; Valdés-Dapena, Margarita; Ramírez, Margarita; Fernández, Carlos; Bravo, Laura
2006-04-01

Resumen en español Se estudiaron 50 cepas de Escherichia coli sorbosa negativas, aisladas de niños con diarreas líquidas de aparición espontánea. La identificación hasta especie se realizó por métodos convencionales, incluidos los marcadores fenotípicos sorbosa y sorbitol. Las técnicas de reacción en cadena de la polimerasa e hibridación de ADN, fueron realizadas para confirmar la capacidad de producción de enterotoxinas. Se obtuvo muy buena correlación entre las cepas de Esche (mas) richia coli sorbosa negativas y su capacidad de elaborar enterotoxinas termolábil y termoestable. El estudio demostró un alto porcentaje de estas cepas con fragmentos de genes codificadores, 94 y 44 % respectivamente, predominando la enterotoxina termoestable. Se obtuvieron los principales biotipos primarios de importancia taxonómica y epidemiológica. Se demostró que el método de la sorbosa posee cualidades que lo distinguen como marcador fenotípico, con 100 % de sensibilidad y 88 % de especificidad, revelándose como método de diagnóstico presuntivo práctico y de gran utilidad para los Laboratorios de Microbiología Clínica. Resumen en inglés Fifty negative sorbose Escherichia coli strains isolated from children who suffered spontaneously occurring fluid diarrheas were studied. Identification up to the level of species was performed by conventional methods including phenotypical markers known as sorbose and sorbitol. The PCR and DNA gene hybridization were applied to confirm the enterotoxin-producing capacity. A good correlation between negative sorbose Escherichia coli and their capacity of producing heat-lab (mas) ile and heat -stable enterotoxin was observed. The study showed a high percentage of these strains with encoding gene fragments, 94 and 44% respectively, being heat-stable enterotoxin the predominant. The main primary biotypes of taxonomic and epidemiological importance were obtained. It was demonstrated that the sorbose method has certain qualities that make it stand out as a phenotypical marker, with 100% sensitivity and 88% specificity, and as a practical presumptive diagnostic method that is very useful for Clinical Microbiology Laboratories.

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Detección de Chlamydia pneumoniae en tejido aórtico humano: amplificación del gen kdtA e hibridación in vitro/ Detection of Chlamydia pneumoniae in human aortic tissue: kdtA gene amplification and in vitro hybridization

Guzmán, Natalia; Espitia, Claudia; Delgado, Pilar; Echeverri, Darío; Buitrago, Lorena; Jaramillo, Carlos
2005-12-01

Resumen en español Introducción. La ateroesclerosis es la principal causa de enfermedad coronaria y cerebrovascular, las cuales, a su vez, son las causas más comunes de mortalidad y morbilidad en el mundo occidental. Publicaciones recientes sugieren que ciertos microorganismos infecciosos podrían jugar un papel importante en la génesis y progresión de la aterosclerosis. De acuerdo con reportes seroepidemiológicos y de detección directa, Chlamydia pneumoniae podría ser el candidato m (mas) ás plausible. No obstante, no se ha determinado su papel específico en el proceso aterogénico, por lo cual en los últimos años ha surgido la necesidad de explorar diversas técnicas de detección de C. pneumoniae en arterias. Objetivo. El propósito de este estudio fue investigar la presencia de C. pneumoniae en muestras de tejido aórtico de catorce pacientes sometidos a cirugía de reemplazo aórtico, utilizando la amplificación del gen kdtA por PCR acoplada a un ensayo de hibridación in vitro. Materiales y métodos. De cada uno de catorce segmentos de aorta se obtuvo una muestra al azar para la extracción de ADN y la detección de C. pneumoniae por PCR-hibridación in vitro. Resultados. Doce (85,7%) de catorce muestras de tejido de aorta resultaron positivas para C. pneumoniae. Conclusión. Los resultados encontrados en este estudio sugieren que la presencia de C. pneumoniae es frecuente en el tipo de muestras analizado. En estudios posteriores resultaría importante examinar si esta proporción se mantiene en una muestra poblacional mayor Resumen en inglés Introduction. Atherosclerosis is the main cause of coronary and cerebrovascular disease which, in turn, are the most common causes of mortality and morbidity in the western world. Recent publications suggest that infective microorganisms may play an important role in the genesis and progression of atherosclerosis. According to seroepidemiological and direct detection reports, Chlamydia pneumoniae is the most plausible candidate. Nevertheless, the mechanisms by which the m (mas) icroorganism induces its pathological effect have not yet been conclusively determined; hence, the need exists to explore different detection techniques of C. pneumoniae on arteries. Objective. The purpose of the current study was to detect the presence of C. pneumoniae in aortic tissue samples from 14 patients submitted to aortic replacement surgery. Detection method involved kdtA gene amplification coupled with an in vitro hybridization assay. Materials and methods. Samples of aortic tissue for DNA extraction and C. pneumoniae detection by PCR- in vitro hybridization were randomly obtained from each of 14 aorta specimens. Results. C. pneumoniae was detected in 12 (85.7%) of the 14 aortic tissue samples. Conclusions. This result indicates a frequent association of C. pneumoniae with aortic tissue disease. Further studies are required to determine if this proportion of positive samples persists within larger samples.

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Detección del virus de la Necrosis Infecciosa Hipodérmica y Hematopoyética (IHHNV) en camarones blancos cultivados asintomáticos, Litopenaeus vannamei (BOONE), en Venezuela./ Detection of the Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus (IHHNV) in Asymtomatic Cultured White Shrimp, Litopenaeus vannamei (Boone), in Venezuela.

Boada, Mélida; De Donato, Marcos; Rodulfo, Hectorina
2008-02-01

Resumen en español El Virus de la Necrosis Infecciosa Hipodérmica y Hematopoyética (IHHNV) es un virus que causa altas mortalidades en Litopenaeus stylirostris y el síndrome de la deformidad del rostro (RDS) en L. vannamei. Con el fin de determinar la presencia del IHHNV en camarones cultivados asintomáticos, se analizaron muestras de camarones cultivados L. vannamei de cinco granjas camaroneras localizadas en el oriente y occidente de Venezuela. Se analizaron un total de 90 muestras po (mas) r granja, de tres tallas: PL8-PL15, juveniles de 5-6 g y de 12 a 15 g de peso. El ADN total fue extraído de muestras homogeneizadas de pleópodos, mediante el uso de kit comerciales. La detección del IHHNV fue realizado, tanto por hibridación mediante “Dot Blot” como por PCR utilizando los kits de Diagxotics ShrimpProbe y ShrimPCaRe Simplex, respectivamente. Se detectó un total de siete muestras positivas, provenientes de cuatro (B, C, D y E) de las cinco granjas camaroneras estudiadas, variando las prevalencias entre 1,1 y 3,3% por granja. Todas las muestras positivas correspondieron a individuos de 5 a 6 g de peso. La técnica diagnóstica por PCR fue más sensible para la detección del IHHNV que la hibridación por “Dot Blot”. La presencia del IHHNV en camarones asintomáticos y a bajos niveles de prevalencia puede implicar que las poblaciones de camarones utilizadas para cultivo en Venezuela son resistentes o en todo caso tolerantes a este virus. Resumen en inglés The Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus (IHHNV) is a pathogen that may cause high mortalities in Litopenaeus stylirostris and the Runt Deformity Syndrome (RDS) in L. vannamei. In order to detect the presence of IHHNV in asymptomatic, cultivated shrimp, it were analyzed shrimp samples of cultivated L. vannamei from 5 farms located in the east and west costs of Venezuela. A total of 90 samples per farm were analyzed, using three sizes: PL8-PL15, juveniles (mas) of 5-6 g and of 12-15 g of weight. The DNA was extracted from homogenized samples of pleopods, using commercial kits. The detection of IHHNV was carried out by both dot blot hybridization and PCR using the Diagxotics kits ShrimpProbe and ShrimPCaRe Simplex, respectively. A total of 7 positive samples from 4 (B, C, D and E) of the 5 shrimp farms studied were detected. The prevalence in the farms ranged from 1.1 to 3.3%. All positive samples corresponded to individuals of 5 to 6 g of weight. PCR was a more sensitive technique than the dot blot hybridization. The presence of IHHNV in asymptomatic shrimp at low values of prevalence could imply that the shrimp populations used for culture in Venezuela are resistant or at least tolerant to this viral pathogen.

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Análisis de la expresión transcripcional inducida bajo condiciones de estrés biótico y abiótico en Capsicum chinense BG-3821/ Analysis of transcriptional expression induced in Capsicum chinense BG-3821 under conditions of biotic and abiotic stress

Barrera-Pacheco, Alberto; Joaquín-Ramos, Ahuizolt de J.; Torres-Pacheco, Irineo; González-Chavira, Mario M.; Pérez-Pérez, Ma. Cristina I.; Guevara-Olvera, Lorenzo; Guevara-González, Ramón G.
2008-02-01

Resumen en español El objetivo del presente trabajo fue analizar la expresión transcripcional inducida bajo diferentes tipos de estrés biótico y abiótico en plantas de chile habanero (Capsicum chinense BG-3821). Los estudios de expresión de genes de plantas bajo diferentes condiciones de estrés biótico y abiótico son importantes porgue son una estrategia para entender, a nivel molecular, cómo las plantas actúan en fenómenos de resistencia a patógenos y condiciones abióticas de (mas) crecimiento, lo que puede ampliar el conocimiento sobre los mecanismos moleculares de defensa a estos tipos de estrés en las plantas. Para el análisis transeripcional se emplearon sondas moleculares de los EST R50 y R100. Ambos son fragmentos diferenciales y posiblemente implicados en la respuesta de resistencia de C. chinense BG-3821 a infecciones por el virus huasteco vena amarilla del chile (PHYVV). Se comprobó la especificidad de la expresión de los genes correspondientes a R50 y R100 en plantas de C. chinense infectadas con PHYVV, así como por la bacteria Xanthomonas campestris pv. vesicatoria y el hongo Fusarium solani. Plantas infectadas con el oomiceto Phytophthora capsici no indujeron la expresión de estos genes. Asimismo, se evaluó si la expresión de estos genes es inducida mediante la aplicación de ácido salicílico (AS), metil Jasmonato, etileno o estrés abiótico (hídrieo y térmico) a plantas de C. chinense BG-3821, Adicionalmente, se realizó análisis de hibridación de ADN complementario (ADNc), para lo cual se seleccionaron varias clonas de bancos sustraetivos que contienen fragmentos de genes de C. chinense BG-3821 cuya expresión fue inducida en infecciones de PHYVV. Se demostró que la expresión de los genes correspondientes a los fragmentos R50 y R100 no son sólo inducidos específicamente por la infección de PHYVV, sino además por X. campestris pv. vesicatoria y F. solani, así como por la aplicación de ácido salicílico, metil jasmonato y etileno. En el análisis de arreglos se observaron diferencias en el nivel de expresión de varios EST para cada condición de estrés evaluada. Resumen en inglés The objective of the present work was to analyze the transeriptional expression induced under different types of biotic and abiotic stress in Havana chili pepper (Capsicum chinense BG-3821). The studies of expression of plant genes under different conditions of biotic and abiotic stress are important because they are a strategy for understanding at molecular level, how plants act in phenomena of resistance to pathogen and abiotic growth conditions, which may expand the kn (mas) owledge about molecular defense mechanisms to this type of stress in plants. For transeriptional analysis, molecular probes of R50 and R100 EST's were employed. Both are differential fragments and possibly implied in the resistance response of C.chineme BG-3S21 to infections by the pepper Huasteco yellow vein virus (PHYVV). Specificity of gene expressions corresponding to R50 and RKH) was confirmed in C. chinense plants infected by PHYVV, as well as by the Xantkomonas campestris pv, vesicatoria bacterium, and Fusarium solani fungus. Plants infected with the Phytophthora capsici nomycete did not induce the expression of these genes. Likewise, it was assessed if the expression of these genes is induced to C. chinense BG-3821 plants by application of salicylic acid (AS), jazmonate methyl, ethylene, or abiotic stress (hydric and thermal). Additionally, analysis of complementary DNA hybridization (cDNA) was conducted, for which various clones from subtractive hanks were selected, containing C. chinense BG-3821 fragments, whose expression was induced in infections of PHYVV. It was demonstrated that the gene expressions corresponding to R50 and R100 fragments are not only induced specifically by PHYVV infection, but also by X. campestris pv. vesicatoria, and F.solani, as well as by application of salicylic acid, jasmonate methyl, and ethyleue. In the analysis of arrangements, differences in the expression level of several EST's were observed for each evaluated stress condition.

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La baja utilidad de la determinación del ADN del VPH en la región distal de la uretra masculina/ Low usefulness of HPV DNA determination in the distal region of the male urethra

Leyva-López, Ahideé G; Aranda-Flores, Carlos E; Conde-González, Carlos; Lazcano-Ponce, Eduardo C
2003-01-01

Resumen en español OBJETIVO: Determinar la prevalencia uretral del ácido desoxirribonucleico del virus de papiloma humano, condilomatosis clínica y subclínica, en hombres cuyas parejas sexuales tuvieron el antecedente de neoplasia intraepitelial cervical. MATERIAL Y MÉTODOS: De octubre de 1997 a agosto de 1998 se hizo un estudio transversal; se incluyeron 200 hombres de entre 17 a 64 años de edad, referidos a la Coordinación de Oncología del Instituto Nacional de Perinatología, de l (mas) a Ciudad de México, porque sus parejas regulares sexuales tuvieron el antecedente de neoplasia intraepitelial cervical. Se llevó a cabo un examen físico del pene (penoscopía) con la aplicación de ácido acético a 3-5%, y con el uso de un colposcopio se localizaron y evaluaron zonas acetoblancas y cambios vasculares, interpretados como anormales, asociados con la infección por el virus del papiloma humano. La determinación del ADN de VPH se verificó por PCR e hibridación en línea reversa. El análisis estadístico exploratorio y univariante se realizó con el paquete Stata V6.0. RESULTADOS: En las 200 muestras recolectadas de células exfoliadas de la uretra el gen de beta-globina estuvo presente en 93.5% (187/200), y el ácido desoxirribonucleico del virus del papiloma humano fue detectable solamente en 2% (4/187) de los sujetos. Por medio de la penoscopía se observó la presencia de zonas acetoblancas en 43% (81/187) de los sujetos. CONCLUSIONES: En este estudio se observa que la presencia del ácido desoxirribonucleico del virus del papiloma humano en la uretra masculina es poco común, como lo reportan estudios internacionales. Es necesario realizar investigaciones que evalúen esta presencia en glande y surco balano prepucial, en comparación con la región distal de la uretra. Resumen en inglés OBJECTIVE: To assess the prevalence of Human Papillomavirus (HPV) Deoxyribonucleic acid (DNA), and of clinical and subclinical condilomatosis in men whose sex partners had been diagnosed with cervical intraepithelial neoplasia. MATERIAL AND METHODS: A cross-sectional study was conducted from October 1997 to August 1998, among 200 men aged 17 to 64 years referred to the Oncology Department of the National Institute of Perinatology in Mexico City. A physical examination of (mas) the penis (penoscopy) was performed after applying 3-5% acetic acid. A colposcope was used to identify acetowhite areas and vascular abnormalities associated with HPV infection. HPV DNA was detected by PCR and reverse line hybridization. The exploratory and univariant statistical analysis was made with the package Stata V6.0. RESULTS: The beta-globin gene was present in 93.5% (n=187) of the 200 urethral exfoliated cell samples collected. HPV DNA was detected in only 2% (4/187) of the study subjects. Penoscopy data showed the presence of acetowhite areas in 43% (81/187) of subjects. CONCLUSIONS: Study findings show that the presence of HPV DNA in urethra is uncommon, as has been reported in several previous studies. Research is needed to evaluate the presence of HPV DNA in the coronal sulcus, as compared with the distal urethral region.

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La baja utilidad de la determinación del ADN del VPH en la región distal de la uretra masculina/ Low usefulness of HPV DNA determination in the distal region of the male urethra

Leyva-López, Ahideé G; Aranda-Flores, Carlos E; Conde-González, Carlos; Lazcano-Ponce, Eduardo C
2003-01-01

Resumen en español OBJETIVO: Determinar la prevalencia uretral del ácido desoxirribonucleico del virus de papiloma humano, condilomatosis clínica y subclínica, en hombres cuyas parejas sexuales tuvieron el antecedente de neoplasia intraepitelial cervical. MATERIAL Y MÉTODOS: De octubre de 1997 a agosto de 1998 se hizo un estudio transversal; se incluyeron 200 hombres de entre 17 a 64 años de edad, referidos a la Coordinación de Oncología del Instituto Nacional de Perinatología, de l (mas) a Ciudad de México, porque sus parejas regulares sexuales tuvieron el antecedente de neoplasia intraepitelial cervical. Se llevó a cabo un examen físico del pene (penoscopía) con la aplicación de ácido acético a 3-5%, y con el uso de un colposcopio se localizaron y evaluaron zonas acetoblancas y cambios vasculares, interpretados como anormales, asociados con la infección por el virus del papiloma humano. La determinación del ADN de VPH se verificó por PCR e hibridación en línea reversa. El análisis estadístico exploratorio y univariante se realizó con el paquete Stata V6.0. RESULTADOS: En las 200 muestras recolectadas de células exfoliadas de la uretra el gen de beta-globina estuvo presente en 93.5% (187/200), y el ácido desoxirribonucleico del virus del papiloma humano fue detectable solamente en 2% (4/187) de los sujetos. Por medio de la penoscopía se observó la presencia de zonas acetoblancas en 43% (81/187) de los sujetos. CONCLUSIONES: En este estudio se observa que la presencia del ácido desoxirribonucleico del virus del papiloma humano en la uretra masculina es poco común, como lo reportan estudios internacionales. Es necesario realizar investigaciones que evalúen esta presencia en glande y surco balano prepucial, en comparación con la región distal de la uretra. Resumen en inglés OBJECTIVE: To assess the prevalence of Human Papillomavirus (HPV) Deoxyribonucleic acid (DNA), and of clinical and subclinical condilomatosis in men whose sex partners had been diagnosed with cervical intraepithelial neoplasia. MATERIAL AND METHODS: A cross-sectional study was conducted from October 1997 to August 1998, among 200 men aged 17 to 64 years referred to the Oncology Department of the National Institute of Perinatology in Mexico City. A physical examination of (mas) the penis (penoscopy) was performed after applying 3-5% acetic acid. A colposcope was used to identify acetowhite areas and vascular abnormalities associated with HPV infection. HPV DNA was detected by PCR and reverse line hybridization. The exploratory and univariant statistical analysis was made with the package Stata V6.0. RESULTS: The beta-globin gene was present in 93.5% (n=187) of the 200 urethral exfoliated cell samples collected. HPV DNA was detected in only 2% (4/187) of the study subjects. Penoscopy data showed the presence of acetowhite areas in 43% (81/187) of subjects. CONCLUSIONS: Study findings show that the presence of HPV DNA in urethra is uncommon, as has been reported in several previous studies. Research is needed to evaluate the presence of HPV DNA in the coronal sulcus, as compared with the distal urethral region.

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USING A RIBOSOMAL PROBE FOR THE DETECTION OF THE PHYTOPLASMA ASSOCIATED WITH ´BUNCHY TOP SYMPTOM OF PAPAYA´ (BTS) IN PLANT AND INSECT HOST/ USO DE UNA SONDA RIBOSOMAL PARA LA DETECCIÓN DE FITOPLASMA ASOCIADO CON LA ENFERMEDAD DEL SÍNTOMA DEL COGOLLO ARREPOLLADO (BTS) EN PLANTAS E INSECTOS HOSPEDANTES

Arocha, Y; Almeida, R; Jones, P
2008-04-01

Resumen en español Recientemente, el grupo fitoplásmico 16SrII, Candidatus Phytoplasma aurantifolia fue asociado con la enfermedad similar al cogollo arrepollado, Bunchy Top disease (BTD) en el Este de Cuba. El ADN total de más de 200 muestras de plantas e insectos se muestreó durante el 2005, y las que resultaron infectadas por el fitoplasma BTD, fueron evaluadas mediante un ensayo de hibridación de ácidos nucleicos no radioactiva (nrNAH). Los productos de PCR correspondientes al ARN (mas) ribosomal 16S de muestras seleccionadas se purificaron, marcaron con fosfatasa alcalina y se utilizaron como sonda para la detección de este fitoplasma mediante el sistema de marcaje directo con fosfatasa alcalina y detección quimioluminiscente (AlkPhos, Amersham Life Science, UK). El ensayo nrNAH detectó el fitoplasma BTD tanto en plantas de fruta bomba como en Empoasca papayae Oman. La sonda arrojó señales de hibridación al reaccionar con los controles de referencia y las muestras infectadas con el fitoplasma BTD. El ensayo nrNAH se considera una valiosa herramienta diagnóstica para los programas de vigilancia fitosanitaria, certificación de semilla y mejoramiento genético, y una vía para desarrollar futuros ensayos específicos. Resumen en inglés Recently, a phytoplasma of the 16SrII, Candidatus Phytoplasma aurantifolia group was associated with Bunchy Top disease (BTD) in eastern Cuba. Total DNA from more than 200 plant and insect leaf samples surveyed during 2005 and infected by the 16SrII phytoplasma was indexed by a non-radioactive nucleic acid hybridization assay (nrNAH). Phytoplasma 16S rDNA PCR products of selected samples were purified, labeled with alakaline phosphatase and used as a probe for the detecti (mas) on of such phytoplasma by the system of direct alkaline phosphatase labelling and chemiluminiscent detection (AlkPhos, Amersham LIFE SCIENCE, UK). The nrNAH assay detected the BTD phytoplasma in both papaya plants and Empoasca papayae Oman. The probe yielded hybridization signals reacting with reference controls and samples infected with the BTD phytoplasma. The nrNAH is considered a valuable diagnostic tool for the national phytosanitary surveillance, seed certification and breeding programs and a pathway to develop further specific assays.

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Ribosomal and chloroplast DNA evidence for diversification of western American Portulacaceae in the Andean region/ Evidencia de ADN ribosomal y del cloroplasto para la diversificaciOn de las PortulacAceas de AmErica occidental en la regiOn andina

Hershkovitz, Mark A
2006-01-01

Resumen en español Se determinaron las secuencias del espaciador interno (ITS) del ADN ribosomal y del espaciador intergénico de ycf3-trnS del ADN del cloroplasto para 183 muestras de taxas, chilenos y no chilenos, de Portulacaceae de América occidental, y sus grupos externos. Los datos permiten refinar previas inferencias sobre la circunscripción e interrelaciones de los géneros estudiados. En particular estos datos revelan que una circunscripción anteriormente publicada de Cistanthe (mas) Spach es polifilética y también revelan la existencia de un clado norteamericano compuesto por Claytonia L., Lewisia Pursh, Lewisiopsis R. Govaerts, and Montia L. De los datos de los géneros sudamericanos surgieron dos patrones: (1) en algunos casos la divergencia interespecífica es notablemente baja dado los marcadores empleados y el número estimado de especies; y (2) en cuanto la divergencia de uno o de los dos marcadores ofrecen resolución filogenética, existen conflictos entre ellos y/o entre la morfología. Estos patrones pueden ser interpretados en términos de dos fenómenos: diversificación morfológica/ecológica siguiendo más rápida que la divergencia en las secuencias; y (2) frecuente hibridación. Este alto grado de hibridación sugiere que el árbol filogenético molecular puede representar mal el patrón temporal, morfológico y ecológico de diversificación de estas especies. Al presente no es claro si la hibridación es una regla o una excepción entre las Portulacaceae chilenas. No obstante, en Chile las condiciones ecológicas, espaciales y temporales, son en general favorables para la formación y persistencia de híbridos Resumen en inglés Sequences of the ribosomal DNA internal transcribed spacer (ITS) region and the chloroplast DNA ycf3-trnS intergenic spacer were determined for 183 samples representing Chilean and non-Chilean taxa of western American Portulacaceae and their outgroups. The data refine previous inferences of generic circumscriptions and interrelations. In particular, the data reveal that an earlier circumscription of Cistanthe Spach is polyphyletic and also reveal a North American clade co (mas) mprising Claytonia L., Lewisia Pursh, Lewisiopsis R. Govaerts, and Montia L. Within the South American genera, two patterns emerge from the data: (1) in some cases, interspecific divergence is remarkably low given the markers employed and estimated number of species; and (2) where divergence of one or both markers offer phylogenetic resolution, there is conflict between them and/or with morphology. The patterns can be evaluated in terms of two phenomena: (1) morphological/ecological radiation proceeding much faster than sequence divergence; and (2) frequent hybridization. In the latter case, the gene tree patterns may distort the true timing and cladistic pattern of morphological and ecological diversification. At present, the degree to which evidence for hybridization among the Chilean Portulacaceae will prove to be the rule or the exception is unclear. Nonetheless, spatial and temporal ecological patterns in Chile generally favor hybrid formation and persistence

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La citogenética molecular y su aplicación en el estudio de los genomas vegetales/ Molecular cytogenetics in plant genome analysis

Herrera, Juan Carlos
2007-06-01

Resumen en español La citogenética es la disciplina que estudia las implicaciones genéticas de la estructura y el comportamiento de los cromosomas. Durante las últimas dos décadas los estudios citogenéticos avanzaron gracias a la información generada por métodos clásicos, los cuales permitieron establecer los primeros modelos citogenéticos en especies como tomate, trigo y arroz. Al final del siglo pasado los estudios citogenéticos mostraron un avance significativo gracias a la imp (mas) lementación de nuevas técnicas destinadas al análisis de cromosomas, tanto mitóticos como meióticos, entre las cuales se destacan el bandeo de cromosomas y la hibridación in situ sobre cromosomas. Actualmente, la mayoría de las técnicas de citogénetica molecular se basan en la tecnología de la hibridación in situ fluorescente o FISH (fluorescent in situ hybridization). Esta tecnología abrió la posibilidad de estudiar regiones específicas de la cromatina directamente sobre los cromosomas, gracias a la información derivada de la secuencia misma del ADN, y no solamente por simples características morfológicas. Como consecuencia, la citogenética molecular ha adquirido una importancia cada vez mayor en los diferentes proyectos de mapeo genético que se adelantan actualmente. En la presente revisión se hace una descripción breve de la progresión que han tenido las técnicas de citogenética, desde la llamada 'citogenética clásica' hasta las técnicas actuales de alta resolución. Esta descripción histórica es seguida de varios ejemplos concretos que ilustran la utilización de la FISH, no sólo en el mejoramiento genético de los cultivos, sino también en el estudio estructural y funcional de los genomas vegetales. Resumen en inglés Cytogenetics would be defined as a discipline concerned with the genetic implications of chromosome structure and behavior. During past twenty years cytogenetics studies were carried out due to the information derived from classical methods based on chromosome deletions and translocations. As a result of such studies, the first cytogenetic models in such species as tomato, wheat, and rice were created. Significant advances in most plant cytogenetic systems have occurred i (mas) n the last quarter of the 20 century with the introduction of chromosome banding, in situ hybridization, and other techniques for the analysis of somatic and meiotic chromosomes. Most of current cytogenetic protocols are based on the fluorescent in situ hybridization (FISH) technology. This DNA:DNA in situ method had opened a possibility to address chromatin regions of individual chromosomes on the basis of DNA sequence information in addition of mere morphological features. With genome mapping projects underway sequencing chromosomes and genomes, cytogenetic research had become more relevant. In this review, a historical perspective of chromosome research during the last 80 years is presented. It shows the progression of the 'classical cytogenetics' up to current 'molecular cytogenetics' founded on high resolution techniques such as FISH. The diversity of applications is illustrated through some practical examples of valuable current utilization of FISH-based methodologies in plant breeding programs, as well as in structural and functional genomics.

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Variabilidad genética del ADN mitocondrial de poblaciones de abejas Apis mellifera (Hymenoptera: Apidae) en Colombia/ Genetic variability in mitochondrial DNA of honeybee populations of Apis mellifera (Hymenoptera: Apidae) in Colombia

Salamanca Grosso, Guillermo
2009-12-01

Resumen en español El ADN mitocondrial de Apis mellifera fue estudiado en 105 colmenas colectadas de 7 zonas geográficas colombianas asociadas a 14 departamentos. Se amplificó mediante PCR un fragmento de la región intergénica ARNtleu y de la citocromo oxidasa II (COII), usando posteriormente la endonucleasa DraI. Tras la digestión con la enzima DraI, se identificaron 13 haplotipos, 8 asociados al linaje africano A (con 90,5% del total para A1, A2, A4, A5, A6, A8, A9 y A13), 4 al linaj (mas) e europeo M (7,6%, M2, M4, M5 y M7) y 1 al C de Europa del Este (C1 con 1,9%). La presencia de los 8 haplotipos A diferentes para las abejas de Colombia, sugiere que ha habido más de un episodio de hibridación, introgresión y expansión del fenómeno de africanización en el territorio colombiano, aspecto que supone existan otros haplotipos en poblaciones no incluidas en el estudio. El gradiente de distribución del linaje africano, esta representado principalmente por el haplotipo A1, desde la Costa Caribe colombiana al centro del país, donde se distinguen además los haplotipos A4 y A6. Los linajes europeos no se ven representados de manera importante en la población estudiada, por ello se demuestra que la actividad apícola colombiana muestra una marcada dependencia de colonias africanizadas Resumen en inglés The mitochondrial DNA of Apis mellifera, sampled in 105 beehives and 7 geographical zones associate to 14 localities in Colombia have been studied. A fragment of the intergenic region between the RNAtleu and the subunit II of the cytochrome oxidase gene was amplified by PCR and digested with the endonuclease DraI. Thirteen haplotypes were identified: eight belonging to the African lineage A (90,5% for A1, A2, A4, A5, A6, A8, A9 and A13), 4 to European lineage M (7,6% M2, (mas) M4, M5 and M7) and 1 to C (C1, 1,9%), of the east European lineage. The presence of eight different A haplotipes, suggests the occurrence of more than one episode of hybridization, introgression and expansion of the africanized phenoma which suggests the presence of other haplotypes in other populations not included in the study. The gradient of distribution of African lineage is represented by the A1 haplotype, to the center of the country from the Caribbean coast with A4 and A6 haplotypes. The european lineages, are not represented significantly on the population studied. Colombia beekeeping activities depend on the africanized honeybee

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Caracterización molecular de un begomovirus del tomate en el Valle del Cauca, Colombia, y búsqueda de fuentes de resistencia para el mejoramiento de la variedad Unapal Maravilla/ Molecular characterization of a begomovirus affecting tomato in the Cauca Valle - Colombia and identification of sources of resistance to improve the variety Unapal Maravilla

Martínez A, Ana Karine; Morales G, Francisco José; Vallejo Cabrera, Franco Alirio
2008-10-01

Resumen en español Se caracterizó un virus transmitido por la mosca blanca Bemisia tabaci al tomate en el Valle del Cauca como una variante del Virus del mosaico amarillo del tomate (Tomato yellow mosaic virus = ToYMV). Plantas de tomate (FLA 496-11-6-1-0, FLA 478-6-3-1-11, FLA 456-4 y FLA 653-3-1-0) de 20 días de edad se confinaron en jaulas individuales con 10 individuos virulíferos de B. tabaci (biotipo B) por planta, en condiciones de invernadero. La infección por el virus se confir (mas) mó por el desarrollo de los síntomas y las pruebas moleculares de PCR e hibridación dot blot. Las características agromorfológicas se evaluaron en campo en un diseño de bloques completos al azar con tres repeticiones. Las líneas FLA 653-3-1-0, FLA 496-11-6-1-0 y FLA 478-6-3-1-11 desarrollaron síntomas muy leves; el ADN viral fue apenas detectable para algunos individuos y presentaron características del fruto y rendimientos deseables. Resumen en inglés A virus transmitted by the whitefly Bemisia tabaci to tomato was characterized in the Cauca Valley like a variant of Tomato yellow mosaic virus (ToYMV). Artificial whitefly-mediated inoculation in the greenhouse was done with 20 days-old tomato plants (FLA 496-11-6-1-0, FLA 478-6-3-1-11, FLA 456-4 y FLA 653-3-1-0) exposed to 10 viruliferous individuals of B. tabaci (biotype B) per plant in individual insect-proof cages. The presence of the begomovirus was evaluated by sym (mas) ptoms development and was confirmed using dot blot hybridization and PCR. Agronomical characteristics were evaluated in the field in a completely randomized blocks design with 3 replications. The lines FLA 653-3-1-0, FLA 496-11-6-1-0 and FLA 478-6-3-1-11 developed mild symptoms, viral DNA was barely detectable in some individuals, and they showed characteristics of the fruit and desirable yield.

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Uso de la técnica de hibridización checkerboard adn-adn para la identificación de la microbiota periimplantaria: Revisión bibliográfica/ Use of checkerboard dna-dna hybridization technique for periimplantitis microbiota identification

do Nascimento, Cássio; Issa, João Paulo Mardegan; Catirse, Alma Blásida Concepción Elizaur
2008-12-01

Resumen en español El término Periimplantitis hace referencia a la condición de enfermedad en los tejidos de soporte de los implantes bucales. Su etiología es multifactorial, aunque la biopelícula microbiana desempeña un papel esencial en la etiopatogenia de la enfermedad. A través de técnicas de cultivo, se han identificado algunas bacterias implicadas en la etiopatogenia de las periodontopatías, entre estas, especies pertenecientes a los Géneros Fusobacterium, Prevotella y Porphy (mas) romonas. El desarrollo de técnicas de biologia molecular permite la identificación de especies bacterianas que antes no eran referidas como parte de la microbiota responsable de la patogénesis periodontal. La detección de la microbiota presente en los sacos periodontales que se originan alrededor de los implantes es necesaria para el establecimiento de la conducta terapéutica a ser instruida, más aún si se toma den consideración que las alteraciones de las estructuras de soporte están directamente relacionadas con muchos de los microorganismos presentes y constituyen una de las causas más frecuentes de fracaso del tratamiento rehabilitador con implantes. El objetivo de este artículo es presentar una revisión bibliográfica de la técnica de hibridización checkerboard ADN-ADN para la identificación de los microorganismos más frecuentemente asociados a la peri-implantitis. Resumen en inglés The periimplantitis term is characterized as a disease that affects the support implant tissues. It has a multifactorial etiology, with an important role of the biofilm on the periodontal diseases. The culture techniques use possibilited to identify bacterias responsible for periodontal alterations, as Fusobacterium, Prevotella and Porphyromonas ssp. The development of the molecular biology techniques possibilited the identification of some bacterial species, that there w (mas) ere not related in the literature and there were responsible for periodontal pathogenesis. The microbiota present on the periodontal pockets in overdentures may contribute in the orientation of the therapeutic procedures, considering that the structural alterations on the periodontal tissues are straightly related to microorganism presence, and it constitutes one of the causes that affect the oral rehabilitation treatment with implants. This, the aim of this study was to present a literature review of DNA-DNA hybridization technique in the identification of the microorganisms more related to periimplantitis.

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Técnicas microbiológicas novedosas para caracterizar productos fermentados tradicionales

Mayo Pérez, Baltasar; Flórez García, Ana Belén

La OTRI del Centro Tecnológico Nacional de la Conserva y Alimentación junto con la OTT del Consejo Superior de Investigaciones Científicas, colaboran en el Proyecto AGROCSIC, el cual fue aprobado por el Ministerio de Ciencia y Tecnología y financiado por el Ministerio de Educación y Ciencia. El obje...

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Prevalencia y caracterización de Escherichia coli enterohemorrágica aisladas de bovinos y cerdos sanos faenados en Santiago, Chile/ Prevalence and characterization of enterohaemorrhagic Escherichia coli isolated from healthy cattle and pigs slaughtered in Santiago, Chile

BORIE, C.; MONREAL, Z.; GUERRERO, P.; SANCHEZ, M.L.; MARTINEZ, J.; ARELLANO, C.; PRADO, V.
1997-01-01

Resumen en español Con el fin de establecer la posible participación de bovinos y porcinos en la epidemiología del SHU se analizó la presencia de cepas ECEH en contenido intestinal de animales sanos caracterizando marcadores fenotípicos y genotípicos asociados a virulencia. Se aislaron cepas EHEC en el 28.7% de los bovinos y 68.3% de los cerdos. Las cepas EHEC fueron definidas como aquellas capaces de hibridizar, mediante técnica de estampado de colonias, con al menos una sonda para (mas) las citotoxinas (SLTI-SLTII). El perfil toxigénico de las cepas bovinas fue predominantemente SLTI, mientras que en porcinos fue el SLTI-SLTII. Menos del 40% de las cepas aisladas de ambos animales presentaron homología con la sonda asociada a la fimbria de adherencia; un valor similar se encontró en las cepas bovinas en relación al factor eae. Llama la atención que sobre un 90% de cepas aisladas de cerdos hibridaran con la sonda para el factor eae, situación que hace pensar en un mayor riesgo para la salud pública en nuestro país. La serogrupificación demostró la presencia, aunque en baja proporción, de cepas O157, O26 y O111 tanto en bovinos como en porcinos. Alrededor de un 50% del total de las cepas aisladas, tanto de bovinos como porcinos, fueron capaces de fermentar el sorbitol, incluyendo cepas del serogrupo O157. La presencia de cepas EHEC O157, O26 y O111, portadoras de factores de virulencia, hacen sugerir que tanto los bovinos como porcinos constituyen, en nuestro país, reservorios de cepas potencialmente patógenas para el hombre Resumen en inglés As a contribution to the epidemiology of SHU in Chile, this work was focused on cattle and pigs as a possible reservoir of EHEC. This was achieved by analyzing E. coli isolates from faecal samples of healthy animals slaughtered in two abattoirs in Santiago. EHEC strains were identified by DNA hybridization with specific gene probes for Shiga-like toxin I (SLTI) and II (SLTII). Positive strains were hybridized with specific gene probes for fimbrial adhesin and eae factor, (mas) serogrouped and examined for sorbitol fermentability. Among the 136 steers and 120 pigs studied, 39 (28.7%) and 82 (68.3%) were found to carry EHEC strains, respectively. Of the 40 bovine strains that hybridized with two SLT DNA probes, 29 (72.5%) hybridized with only SLTI probe, 6 (15%) hybridized with only SLTII probe and 5 (12.5%) hybridized with both SLTI and SLTII probes. Only 6 (15%) of the 40 EHEC hybridized with fimbrial adhesin probe and 14 (35%) hybridized with eae probe. An important number of strains (14/40) belonged to serogroups O157, O26 and O111; serogroups also commonly isolated from SHU cases in Chile. One steer was found to carry two EHEC strains of different serogroups. 50% of EHEC were sorbitol positive, irrespective of the O serogroup or genotypic profile. Of the 82 pig strains, the predominant cytotoxic profile was SLTI-SLTII (68.3%); only 35 (42.7%) hybridized with fimbrial adhesin probe. An important number of strains (80/82) hybridized with eae probe. The serogroups found were: O157, O26, O111, O114, O119, O126, O127, O128, O142 and O158. Approximately 50% of EHEC strains were sorbitol positive, O157 included. Results obtained in this study strongly suggest that cattle and pigs in Chile are a reservoir of EHEC associated with diseases in humans

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Prevalencia de Escherichia coli enterohemorrágico en una zona ganadera de Argentina: Caracterización genotípica de las cepas de origen animal/ Animal reservoir and genotipic characterization of Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) in Argentina

Notario P, Rodolfo; Fain B, Juan Carlos; Prado J, Valeria; Ríos V, Maritza; Borda O, Noemi; Gambandé G, Telma
2000-12-01

Resumen en inglés Background: There is a high prevalence of infection by Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) and patients with hemolytic uremic syndrome (HUS) in Argentina. Aim: To study cattle and pigs as a possible reservoir of EHEC in Argentina. Material and methods: One hundred two healthy animals (68 cattles and 31 pigs) from a livestock in Argentina, were studied. Stool samples were obtained with a rectal swab. The strains were identified by DNA hybridization with specific gene (mas) probes detecting Shiga-like toxin 1 and 2 (Stx1, Stx2), and hly gen related to fimbrial adhesin-associated plasmid. EHEC strains were serogrouped using comercial antisera. Results: EHEC was isolated from 30 out of 68 bovines cultures (44.1%) and from 25 out of 31 pigs (58.1%). Isolates carrying genes codifying both Stx1 and Sxt2, were observed in 50% of cattle and 63.9% of pigs. The gene which codifies for hemolysin (associated to fimbrial adhesin) was observed in about 41% of EHEC isolates. Strains belonging to serogroups O26, O111, and O157 were isolated from cattle, and O111, and O157 from pigs. Conclusions: The high percentage of EHEC in both cattle and pigs and the presence of human infection-associated serogroups, suggests that these animals are a reservoir of EHEC associated with disease in humans (Rev Méd Chile 2000; 128: 1335-41)

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Obtención de híbridos intergenéricos Helianthus annuus x Tithonia rotundifolia y su análisis morfológico y molecular/ Obtention of intergeneric hybrids Helianthus annuus x Tithonia rotundifolia and their morphological and molecular analysis

Luévanos-Escareño, Miriam Paulina; Reyes-Valdés, M. Humberto; Villarreal-Quintanilla, José Ángel; Rodríguez-Herrera, Raúl
2010-01-01

Resumen en español Se realizó el cruzamiento entre el girasol cultivado Helianthus annuus y la especie silvestre con potencial ornamental Tithonia rotundifolia. De tres materiales cultivados: AN-3, Primavera y HA 89, sólo se tuvo éxito con la línea pública de girasol cultivado HA 89 como progenitor femenino. A su vez el masculino fue una población de T. rotundifolia recolectada en el estado de Guerrero, México. Se produjeron 826 aquenios híbridos bien desarrollados, con una tasa de (mas) éxito de cuatro en 1000 aquenios potenciales. Dentro de una muestra de 49 plantas establecidas en el campo experimental, se observaron dos clases fenotípicas: a) individuos con muchas inflorescencias pequeñas y b) otros con cabezuela solitaria grande y con pocas o ninguna inflorescencia axilar. Ambos tipos fueron caracterizados morfológicamente y presentaron rasgos claramente híbridos. Además, se analizó la huella genética, a través del polimorfismo en la longitud de los fragmentos amplificados (AFLPs), de una muestra de diez tríos familiares de cruzamientos, con un promedio de 28 polimorfismos por trío. El análisis de huella genética de las plantas complementó al estudio morfológico, permitió constatar la naturaleza híbrida de las progenies y descartar el fenómeno del cruzamiento parcial. Todas las plantas experimentales obtenidas resultaron ser estériles. Del presente trabajo se desprende que se requiere de manipulación cromosómica o técnicas de cultivo de tejidos para el desarrollo de híbridos fértiles con potencial ornamental. Resumen en inglés Hybridization between the cultivated sunflower Helianthus annuus and the wild species with ornamental potential Tithonia rotundifolia was performed. From three cultivated materials: AN-3, Primavera and HA 89, the only success was obtained with the public cultivated sunflower line HA 89 as female parent. The male parent was a T. rotundifolia population collected in the state of Guerrero, Mexico. A total of 826 well developed hybrid achenes were produced, with a rate of suc (mas) cess of four in 1000 potential achenes. In a sample of 49 plants established in the experimental field, two phenotypic classes were observed: a) plants with many small inflorescenses, and b) plants with a single big head and a few or none axillary inflorescenses. Both types were morphologically characterized and showed a clearly hybrid morphology. Additionally, the AFLP-based DNA fingerprints were analyzed in a sample of ten familial trios, with an average of 28 polymorphisms per trio. The DNA fingerprinting analysis of the plants complemented the morphological study, allowed confirmation of the hybrid nature of the progenies and ruled out the partial hybridization phenomenon. All the hybrid plants showed sterility. From this work, it becomes clear that chromosomic manipulation or tissue culture techniques are needed to develop fertile hybrids with ornamental potential.

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Infección cervical por virus del papiloma humano: genotipificación por hibridación in situ y análisis ultraestructural por microscopia electrónica de transmisión

BARRÓN, ARTURO; ARANDA, CARLOS; VALENZUELA, SERGIO; PAREDES, YURIDIA; VILLEGAS, HILDA
2004-12-01

Resumen en español INTRODUCCIÓN: El virus del papiloma humano (VPH) es el virus que más frecuentemente se transmite por contacto sexual y está fuertemente asociado con el cáncer cérvicouterino. Los tipos virales que se documentan con mayor frecuencia en el epitelio cervical son 6, 11, 16, 18, 31 y 33, los cuales difieren en su capacidad oncogénica; los dos primeros presentan bajo potencial y los últimos alto potencial oncogénico. Objetivo: Identificar los tipos de VPH presentes en b (mas) iopsias de cervix con evidencia citológica, colposcópica e histopatológica de infección viral, y realizar un análisis ultraestructural de los cambios celulares asociados. Material y métodos: Usamos la hibridación in situ (HIS) con sondas biotiniladas para identificar los tipos virales, y las biopsias positivas se procesaron para análisis ultraestructural por microscopia electrónica. Resultados: Se analizaron por HIS 63 biopsias cervicales, 24 (38%) resultaron positivas para alguno de los tipos virales probados, los más frecuentes fueron los tipos 6/11 (24%), los cuales en el análisis ultraestructural se asociaron a la presencia de varios nucléolos en núcleos con bordes crenados, en tanto que los tipos oncogénicos se asociaron con la presencia de partículas virales en núcleos, que frecuentemente se presentan multilobulados y con inclusiones citoplasmáticas. En ambos casos es evidente la desorganización de los desmosomas. Conclusiones: La prevalencia de VPH encontrada en este estudio concuerda con lo reportado para esta infección viral en otros estudios donde se usa la misma técnica, los tipos virales concuerdan con el diagnóstico inicial, y el estudio ultraestructural arroja evidencias sobre las principales alteraciones celulares asociadas a la infección viral. Resumen en inglés Introduction: Human papillomavirus (HPV) is the most common sexually transmitted virus, is strongly associated with cervical cancer. HPV genital types differs in oncogenic potential, types 6/11 are low-risk and, types 16/18, 31/33 are high-risk. In situ Hybridization (ISH) analysis has advantage of being able to detect both, the specific cellular types infected with viral DNA and the HPV types in cervical biopsies and therefore, cervical cancer patient's risk. Objective: (mas) This work was performed in order to typing HPV in cervical biopsies with cytological, colposcopical and histopathological evidence of HPV infection, and to search ultrastructural changes associates with viral infection. Results: We analyzed, by ISH, 63 cervical biopsies, 24 (38%) positives to some viral type, HPV types 6/11 were more common types (24%) consistent with the more frequent, both colposcopical and histopathological diagnostic; Low-grade intraepithelial lesion. Ultraestructural analysis showed cellular alteration in association with low-risk types, principally irregular nucleus and several nucleolus for nucleus, as long as cells infected with oncogenic types DNA showed multilobulated nucleus, cytoplasmic inclusions and viral particles in nucleus. In both cases is clear an disorganization of cellular junctions desmosomes. Conclusions: The HPV prevalence in this study was consistent with other reported, using ISH analysis, the more common types were low-risk types in agreement with previous diagnostic, and electron microscopy analysis provide evidence on the main cell alterations associated with viral infection.

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Evaluación de técnicas moleculares e inmunoenzimáticas para la detección de E coli enterohemorrágico en brotes de toxi-infecciones alimentarias/ Evaluation of molecular and immunoenzymatic assays for detecting Enterohemorrhagic E coli in food borne outbreaks

Vidal O, Maricel; Carreño C, Mónica; Vidal A, Roberto; Arellano C, Carolina; Solari G, Verónica; Prado J, Valeria
2002-06-01

Resumen en inglés Background: Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC), is an emergent pathogen that causes sporadic infections and outbreaks of gastroenteritis associated with consumption of contaminated food products. Because detection of EHEC in diarrhea patients is not routinely performed, infection is most probably underestimated. Aim: To compare three techniques to detect EHEC: Colony hybridization with DNA probes, polymerase chain reaction (PCR) for the detection of stx1 and stx2 g (mas) enes and immunoenzymatic detection by ELISA (Premier EHEC) of Stx1 and Stx2 toxins. Material and methods: Four outbreaks of food-borne gastroenteritis were studied including 16 patients and 78 strains of E coli. Twenty one (26,9%) strains, hybridized with the stx1 probe, 1 (1,3%) hybridized only with the stx2 probe and 36 (46,1%) with both probes. PCR amplification for cytotoxin genes was observed in 6 strains (7,7%) from the second outbreak studied. The immunoenzimatic assay detected the cytotoxins in 18 (23,0%), of the 78 studied strains. Agreement between probes and ELISA was 44,8%, between PCR and probes 34,7% and 82,4% between ELISA and PCR. Conclusions: These results indicate a variable yield among different EHEC detection techniques. Considering PCR as the gold standard, ELISA technique showed a better sensitivity and specificity than probes (Rev Méd Chile 2002; 130: 603-9)

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Evaluación de las técnicas de detección del VPH en los programas de cribado para cáncer de cuello uterino/ Assessment of hpv detection assays for use in cervical cancer screening programs

Cañadas, M Paz; Lloveras, Belén; Lorincz, Attila; Ejarque, Maijo; Font, Rebeca; Bosch, F. Xavier; Sanjosé, Silvia de
2006-10-01

Resumen en español OBJETIVO: La identificación de la infección por tipos de alto riesgo del virus del papiloma humano (VPH) es una herramienta útil para el cribado de cáncer del cuello uterino. Las distintas técnicas aplicadas para su detección deben contrastarse y validarse para su empleo en la tamización poblacional. MATERIAL Y MÉTODOS: Se evalúan tres técnicas para la detección del VPH en 166 muestras cervicales procedentes de mujeres atendidas en una clínica de dermatología (mas) en Oviedo (España): a) PCR-EIA mediante consensos MY09/MY011; b) PCR con line blot hybridization (PCR-LBH) con consensos PGMY; y c) hybrid capture 2. RESULTADOS: El ADN-VPH se reconoció en 29.5%, 25.3% y 24.7%, de acuerdo con el ensayo. La concordancia global entre PCR-EIA, PCR-LBH y HC2 fue de 73.5% con los valores de kappa superiores a 0.56 entre los ensayos (p Resumen en inglés OBJECTIVE: Detection of high-risk human papillomavirus types (HPV) infection is an important tool in the screening of cervical cancer and triage of cytological abnormalities. The different techniques for detection of this cancer need to be contrasted and validated for use in population screening. MATERIAL AND METHODS: Cervical cell samples were collected from 166 women attending a dermatology clinic in Oviedo (Spain). We evaluated the performance of three different assays (mas) for VPH detection. The methods utilized were 1) In-house PCR-EIA using L1 consensus primers MY09/MY11, 2) A PCR-reverse line blot hybridization (PCR-LBH) that uses L1 consensus PGMY primers. 3) Hybrid Capture 2. All assays were performed blinded. The kappa statistic was used to test for global agreement between assay pairs. RESULTS: HPV DNA was detected in 24,7%, 25,3% and 29,5% of the women, respective to the assay. The overall agreement between the in-house PCR, PCR-LBH and HC2 was (73.5%) with all kappa values between assay pairs exceeding 0.56 (p

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Evaluación de las técnicas de detección del VPH en los programas de cribado para cáncer de cuello uterino/ Assessment of hpv detection assays for use in cervical cancer screening programs

Cañadas, M Paz; Lloveras, Belén; Lorincz, Attila; Ejarque, Maijo; Font, Rebeca; Bosch, F. Xavier; Sanjosé, Silvia de
2006-10-01

Resumen en español OBJETIVO: La identificación de la infección por tipos de alto riesgo del virus del papiloma humano (VPH) es una herramienta útil para el cribado de cáncer del cuello uterino. Las distintas técnicas aplicadas para su detección deben contrastarse y validarse para su empleo en la tamización poblacional. MATERIAL Y MÉTODOS: Se evalúan tres técnicas para la detección del VPH en 166 muestras cervicales procedentes de mujeres atendidas en una clínica de dermatología (mas) en Oviedo (España): a) PCR-EIA mediante consensos MY09/MY011; b) PCR con line blot hybridization (PCR-LBH) con consensos PGMY; y c) hybrid capture 2. RESULTADOS: El ADN-VPH se reconoció en 29.5%, 25.3% y 24.7%, de acuerdo con el ensayo. La concordancia global entre PCR-EIA, PCR-LBH y HC2 fue de 73.5% con los valores de kappa superiores a 0.56 entre los ensayos (p Resumen en inglés OBJECTIVE: Detection of high-risk human papillomavirus types (HPV) infection is an important tool in the screening of cervical cancer and triage of cytological abnormalities. The different techniques for detection of this cancer need to be contrasted and validated for use in population screening. MATERIAL AND METHODS: Cervical cell samples were collected from 166 women attending a dermatology clinic in Oviedo (Spain). We evaluated the performance of three different assays (mas) for VPH detection. The methods utilized were 1) In-house PCR-EIA using L1 consensus primers MY09/MY11, 2) A PCR-reverse line blot hybridization (PCR-LBH) that uses L1 consensus PGMY primers. 3) Hybrid Capture 2. All assays were performed blinded. The kappa statistic was used to test for global agreement between assay pairs. RESULTS: HPV DNA was detected in 24,7%, 25,3% and 29,5% of the women, respective to the assay. The overall agreement between the in-house PCR, PCR-LBH and HC2 was (73.5%) with all kappa values between assay pairs exceeding 0.56 (p

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Enfermedades virales en el cultivo de yuca (Manihot esculenta Crantz) en algunos estados de Venezuela/ Viral diseases in cassava (Manihot esculenta Crantz) plantations in different States in Venezuela

Chaparro-Martínez, E. I.; Trujillo-Pinto, G
2003-10-01

Resumen en español La yuca (Manihot esculenta Crantz) es un cultivo tropical de importancia y con tendencia a alcanzar mayor relevancia, debido a su industrialización y al uso creciente en la alimentación humana y animal. Este cultivo es afectado principalmente por los virus cuero de sapo (FSD), mosaico de las nervaduras (CsVMV), mosaico común (CsCMV) y el X de la yuca (CsVX). El objetivo principal fue identificar las enfermedades virales que afectan a la yuca en algunos estados de Venez (mas) uela. Se recolectaron 87 muestras con síntomas parecidos a los virales, en los estados Amazonas (1), Aragua (7), Barinas (35), Cojedes (8), Monagas (19) y Portuguesa (17), las cuales fueron analizadas para detectar FSD, CsVMV, CsCMV y CsVX. Se identificaron el FSD mediante la transmisión por injerto al clon Secundina y microscopía electrónica y el CsVX mediante DAS-ELISA; con esta misma técnica no fue posible identificar el CsCMV; tampoco, se detectó el CsVMV mediante la hibridación de ácidos nucleicos utilizando sondas de cADN. El CsVX se encontró asociado con FSD en cuatro de las muestras del estado Barinas. El FSD se detectó en infección simple en una muestra del estado Aragua; ésta es la enfermedad más importante en el continente americano, porque puede causar una reducción significativa de la producción, debido a que las plantas afectadas desarrollan raíces delgadas y fibrosas. CsCMV y CsVMV no se detectaron en ninguna de las plantaciones visitadas. En el resto de los estados muestreados (Amazonas, Cojedes, Monagas y Portuguesa) no se detectaron virus. Se señala por primera vez para Venezuela, la presencia del CsVX y del FSD. Resumen en inglés Cassava (Manihot esculenta Crantz) is an important tropical root crop with a tendency to reach great relevancy in the future, due to its industrialization and use in human and animal feeding. This plant is principally affected by the frog skin virus (FSD) nerve mosaic virus(CsVMV) common mosaic virus (CSCMV) and the Cassave X virus(CsVX). The objective of this study was the identification of the viral diseases that affect cassava plants in Venezuela. A total of 87 cassava (mas) plants with virus-like symptoms were collected from different cassava producing states in Venezuela: Amazonas (1 sample), Aragua (7 samples), Barinas (35 samples), Cojedes (8 samples), Monagas (19 samples) and Portuguesa (17 samples), and were analyzed for the presence of: Frog skin disease (FSD) by the graft inoculation test and electronic microscopy; Cassava virus X (CsVX) and Cassava vein mosaic (CsVMV) by the double-antibody sandwich form of ELISA (DAS-ELISA); and Cassava common mosaic (CsCMV) by nucleic acids hybridization using cDNA probes. CsVX and FSD were detected in mixed infection in four plants collected from Barinas State, but CsVX was not found in the rest of the samples examined. FSD was found in simple infections in the samples from Aragua State. It has been considered a serious disease in Latin America, since it significantly reduces root quality and yield. CsCMV and CsVMV were not detected in any of the plants collected in the surveyed areas. None of the samples from the Amazonas, Cojedes, Monagas and Portuguesa states was found to be infected with any of these disease agents. This is the first report of CsVX and FSD presence in Venezuela.

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Eficacia de la solución de hidróxido de calcio a 20% en la reducción de microorganismos asociados a la cárie de dentina/ Efficacy of 20% calcium hydroxide solution for reduction of microorganisms in carious dentin

Pinheiro, IVA; Vieira, LB; Lima, KC
2005-06-01

Resumen en español Objetivo: Evaluar la eficácia da solución de hidróxido de calcio a 20% en la reducción de microorganismos asociados a la carie de dentina. Metodología:Treinta preparos cavitários fueron realizados en molares permanentes de 30 indivíduos entre las edades de 9 a 18 años. Solución salina reductora fue utilizada como líquido de colecta para la recuperación de microorganismos, antes y después del lavado cavitário. Las muestras fueron colocadas en placas de agar sa (mas) ngre de carnero e incubadas en anaerobiosis por 48 horas a 37ºC. Después Del crecimiento bacteriano, se realizo un análisis semi cuantitativo y cualitativo de las bacterias, a través de hibridización DNA-DNA para 23 tipos de bacterias. Resultados: Una reducción significativa de la cantidad de microorganismos en las muestras colectadas después del lavado de la cavidad con solución de hidróxido de calcio fue observada cuando comparado con el momento anterior al lavado. Del total de muestras que presentaron microorganismos en la cavidad recién preparada, 46,15% presentaron eliminación de éstos microorganismos después del lavado con agua de cal y 53,84% presentaron reducción significativa del número de microorganismos. El teste t pareado de Student mostró una diferencia extremamente significativa (p=0,0007) entre el momento anterior y posterior al lavado. Con relación al tipo de bacterias encontradas después Del lavado de la cavidad con solución de hidróxido de calcio, se observó reducción considerable de S. anginosus, S. mitis y S. sobrinus, así como de S. aureus y S. epidermidis, a pesar de no ser significativa (p>0,05). Conclusión: La solución de hidróxido de calcio parece ser un método de limpieza cavitária eficaz en la reducción de la microbiota asociada a la carie de dentina. Resumen en inglés Objective: This study aimed to test the effectiveness of the cavity cleansing solution (calcium hydroxide 20%) in the elimination or reduction of microorganisms associated to dentine caries. Materials and methods: Thirty cavities preparations were made in permanent molars of individuals aging 9-18. A saline solution was used as sampling liquid before and after the cavity washing. The samples were sown in blood agar plates and incubated in anaerobiosis for 48 hours at 37º (mas) C. After the bacterial growth, a quantitative and qualitative analysis of the bacteria was accomplished trough the use of DNA-DNA hybridization for the 23 bacteria. Results: A significant reduction of the amount of microorganisms of the samples collected after laundering was observed when compared with the previous laundering moment (p=0,0007). Of the total of samples that presented microorganisms in the recent prepared cavity, 46,15% had gotten total elimination and 53,84% had presented significant reduction of microorganisms. In relation to the bacteria found after the contaminated tissue removal and washing with calcium hydroxide solution, considerable reduction was observed for S. anginosus, S. mitis and S. sobrinus, as well as for S. aureus and S. epidermidis, although it is not significant ( p>0,05). Conclusion: The calcium hydroxide solution seems to be efficient in the reduction of the microbiota associated to dentine caries and, therefore, recommended for use in the clinical practice to support the cavity preparation aiming recurrent caries reduction.

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Eficacia de la solución de hidroxido de cálcio a 20% en la reducción de microorganismos asociados a la cárie de dentina/ Efficacy of 20% calcium hydroxide solution for reduction of micrrorganisms in carious dentin

Vieira de Assunção Pinheiro¹, Isauremi; Barreto Vieira², Liza; Costa de Lima³, Kenio
2005-01-01

Resumen en español Objetivo: Evaluar la eficacia de la solución de hidróxido de calcio a 20% en la reducción de microorganismos asociados a la carie de dentina. Metodología:Treinta preparaciones cavitarias fueron realizados en molares permanentes de 30 individuos entre las edades de 9 a 18 años. Solución salina fue utilizada como líquido de recolección para la recuperación de microorganismos, antes y después del lavado cavitário. Las muestras fueron colocadas en placas de agar sa (mas) ngre de carnero e incubadas en anaerobiosis por 48 horas a 370C. Después del crecimiento bacteriano, se realizo un análisis semi cuantitativo y cualitativo de las bacterias, a través de hibridización DNA-DNA para 23 tipos de bacterias. Resultados: Una reducción significativa de la cantidad de microorganismos en las muestras recolectadas después del lavado de la cavidad con solución de hidróxido de calcio fue observada cuando comparado con el momento anterior al lavado. Del total de muestras que presentaron microorganismos en la cavidad recién preparada, 46,15% presentaron eliminación de éstos microorganismos después del lavado con agua de cal y 53,84% presentaron reducción significativa del número de microorganismos. El test “t pareado de Student” mostró una diferencia extremamente significativa (p=0,0007) entre el momento anterior y posterior al lavado. Con relación al tipo de bacterias encontradas después del lavado de la cavidad con solución de hidróxido de calcio, se observó reducción considerable de S. anginosus, S. mitis y S. sobrinus, así como de S. aureus y S. epidermidis, a pesar de no ser significativa (p>0,05). Conclusión: La solución de hidróxido de calcio parece ser un método de limpieza cavitária eficaz en la reducción de la microbiota asociada a la carie de dentina Resumen en inglés Objective:This study aimed to test the effectiveness of the cavity cleansing solution (calcium hydroxide 20%) in the elimination or reduction of microorganisms associated to dentine caries. Materials and methods:Thirty cavities preparations were made in permanent molars of individuals aging 9-18. A saline solution was used as sampling liquid before and after the cavity washing. The samples were sown in blood agar plates and incubated in anaerobiosis for 48 hours at 37ºC. (mas) After the bacterial growth, a quantitative and qualitative analysis of the bacteria was accomplished trough the use of DNA-DNA hybridization for the 23 bacteria. Results: A significant reduction of the amount of microorganisms of the samples collected after laundering was observed when compared with the previous laundering moment (p=0,0007). Of the total of samples that presented microorganisms in the recent prepared cavity, 46,15% had gotten total elimination and 53,84% had presented significant reduction of microorganisms. In relation to the bacteria found after the contaminated tissue removal and washing with calcium hydroxide solution, considerable reduction was observed for S. anginosus, S. mitis and S. sobrinus, as well as for S. aureus and S. epidermidis, although it is not significant (p>0,05). Conclusion:The calcium hydroxide solution seems to be efficient in the reduction of the microbiota associated to dentine caries and, therefore, recommended for use in the clinical practice to support the cavity preparation aiming recurrent caries reduction

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Determinación por quimioluminiscencia del contenido de telómero en biopsias de archivo de cáncer de colon/ Chemiluminescent measurement of telomere DNA content in archival biopsies of colon adenocarcinoma

Morán, Yeinmy; Valderrama, Elvis; Camargo, María Eugenia; Rivero, María Belén; Chiurillo, Miguel Angel
2007-12-01

Resumen en español Los telómeros son complejos nucleoproteicos que protegen los extremos de cromosomas eucariotas de fenómenos de degradación y recombinación. En humanos, los telómeros miden 10-12 kpb en células somáticas normales, pero pueden reducirse hasta apenas 1-2 kpb en células tumorales de rápido crecimiento, debido a la replicación incompleta de estas estructuras en cada división mitótica. Los telómeros se acortan con la edad, lo cual puede estar asociado a inestabilid (mas) ad genómica y a un incremento del riesgo de sufrir cáncer. El análisis de fragmentos de restricción teloméricos por Southern blot es en la actualidad el método estándar para la medición de la longitud de los telómeros. Sin embargo, una determinación precisa no es posible cuando el ADN está fragmentado o es escaso, como es el caso de las biopsias incluidas en parafina. En este trabajo se adecuó un ensayo de slot blot para cuantificar el contenido relativo, en lugar de la longitud, del ADN telomérico a partir de muestras de archivo de adenocarcinoma de colon. El contenido de ADN telomérico pudo ser medido de manera reproducible con apenas 75 ng de ADN genómico altamente degradado empleando detección de la hibridización por quimioluminiscencia. Resumen en inglés Telomeres are nucleoprotein complexes that protect the ends of eucaryotic chromosomes from degradation and recombination. In humans, telomeres measure 10-12 kbp in normal somatic cells, but they scarcely reach 1-2 kbp in tumor cells of rapid growth, due to the incomplete replication of these structures in each mitotic division. Telomeres shorten with age, which can be associated to genomic instability and to an increment of the risk of suffering from cancer. The standard (mas) method to measure the telomere length is the analysis of telomeric restriction fragments by Southern blot. However, a precise determination is not possible when the DNA is broken into small fragments or if it is scarce. In this work, a slot blot assay was adapted to quantify the relative content, instead of the length, of telomeric DNA from paraffin-embedded archival specimens of colon adenocarcinoma. The telomeric DNA content could be reproducibly measured with hardly 75 ng of highly degraded genomic DNA by chemiluminescent detection for hybridization.

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Bovine respiratory syncytial virus in-situ hybridization from sheep lungs at different times postinfection/ Hibridación in situ del virus respiratorio syncytial bovino en pulmón de cordero a diferentes tiempos postinfección

REDONDO, E.; GOMEZ, L.; KELLING, C. L.; GAZQUEZ, A.; MASOT, A. J.
2003-01-01

Resumen en español Se estudió, mediante la técnica de hibridación in situ, la distribución del ARN viral del virus respiratorio Sincicial Bovino (VRSB) en pulmón de corderos infectados en forma experimental, a diferentes tiempos postinoculación. La sonda usada para la hibridación in situ se preparó mediante transcripción reversa del ARN del VRSB, seguida de la amplificación mediante PCR de cADN. 25 corderos de raza Merino de ambos sexos y de un peso vivo de 55 (+/- 10) Kg, fueron (mas) inoculados por vía intratraqueal con 40 ml de solución salina que contenía 1.26 x 10(6) DIM50 por ml (cepa viral NMK7). Los corderos se sacrificaron los días 1, 3, 7, 11 y 15 postinoculación. Las células epiteliales bronquiales y bronquiolares resultaron positivas a los ácidos nucleicos de VRSB los días 1, 3, 7 y 11 postinoculación. A su vez, el epitelio alveolar contenía células positivas los días 1, 3, y 7 postinoculación. Se detectaron células que contenían el ARN viral en las luces bronquiales y bronquilares del día 1 al 11 postinoculación, y en el exudadado alveolar en los días 3 y 7 postinoculación. Se identificaron señales positivas de hibridación desde el día 3 al 11 postinoculación, tanto en las células intersticiales mononucleares como en el tejido linfoide asociado a los bronquios. Las señales de hibridación más intensas se detectaron a los días 3 y 7 postinoculación, lo que coincidió con las lesiones histopatológicas de mayor consideración Resumen en inglés We studied the distribution of bovine respiratory syncytial virus (BRSV) RNA in lungs of experimentally infected sheep by in situhybridization at different times postinfection. The probe used for in-situ hybridization was prepared by reverse transcription of BRSV RNA, followed by PCR amplification of the cDNA. Twenty five Merino sheeps of both sexes with a live weight of 55± 10 Kg, received a intratracheal inoculation of 40 ml saline solution containing 1.26 x 10(6) TCID (mas) 50 BRSV (strain NMK7) per ml. Sheep were slaughtered 1,3,7,11 and 15 postinoculation days (PID). Bronchial and bronchiolar epithelial cells were positive for BRSV nucleic acid by ISH at 1, 3, 7 and 11 PID. However, alveolar epithelial cells contained positive hybridization signals cells at 1,3 and 7 PID. Cells containing viral RNA were detected from 1 to 11 PID, in exudate within bronchial and bronchiolar lumina; and from 3 to 7 PID in alveolar exudates. Positive hybridization signals were identified in interstitial mononuclear cells and in bronchi associated lymphoid tissue from 3 to 11 PID. The highest signal intensity of positive cells were observed at 3 and 7 PID, coinciding with high virus antibodies titres and with the most important histopathological findings

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Alteraciones cromosómicas secundarias en pacientes con leucemia mieloide crónica, en un hospital de referencia del noreste de México/ Secondary Chromosomic Changes in Patients with Myeloid Leukemia in a Reference Hospital in Northeastern Mexico

Dávila-Rodríguez, Martha I.; Cerda-Flores, Ricardo M.; Leal-Garza, Carlos H.; Arana-Trejo, Rosa M.; Báez-de la Fuente, Enrique; Cortés-Gutiérrez, Elva I.
2004-12-01

Resumen en español Introducción: la caracterización del perfil citogenético que presenta una determinada fase de la leucemia mieloide crónica (LMC), está ofreciendo nuevas direcciones para la investigación de la etiología a nivel molecular. En México no existen datos de la descripción cromosómica de esta enfermedad, por lo que el objetivo del presente estudio fue determinar las alteraciones cromosómicas de 56 pacientes con LMC. Diseño: estudio transversal (diagnóstico y estadio (mas) ). Material y métodos: las muestras de médula ósea de 56 pacientes con LMC en diferentes etapas, fueron sometidas a estudios citogenéticos mediante técnicas de bandeo G e hibridación in situ fluorescente (FISH), con sonda específica para cromosoma Filadelfia (Ph). Resultados: 19% (6/31) de los pacientes en etapa crónica mostró alteraciones cromosómicas secundarias, en contraste con 60% (15/25) observado en aquellos pacientes en etapa acelerada. Las alteraciones cromosómicas secundarias más frecuentes fueron: las trisomías 8 y 19, cromosoma Ph extra e isocromosoma de brazos largos del cromosoma 17. Conclusión: este es el primer trabajo que determina alteraciones cromosómicas secundarias en pacientes mestizos mexicanos con LMC, cuyas frecuencias están de acuerdo con lo reportado para otras poblaciones a nivel mundial. Resumen en inglés Introduction: Our aim was to characterize the cytogenetic profile that displays a certain phase of chronic myelogenous leukemia (CML), offering new directions for investigation of the etiology to the molecular level. In Mexico, data does not exist in this regard; thus, the objective of the present study was to determine cytogenetic alterations in 56 Mestizo Mexican patients with LMC. Design: Cross-sectional study (diagnosis and stage) was carried out. Materials and Method (mas) s: samples of bone marrow of 56 patients with CML in different phases were analyzed using G banding and fluorescence in situ hybridization (FISH) with DNA probes for Philadelphia chromosome (Ph). Results: 19% of patients in chronic stage showed secondary chromosomal alterations in contrast with an observed 60% in patients in accelerated stage. Most frequent alterations included trisomy 8 and 19, extra Ph chromosome, and isochromosome of thell. Conclusions: We believe this to be the first work that determines secondary chromosomal alterations in Mexican racially mixed patients with LMC. These are in agreement with those reported for other populations at the worldwide level.

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Alcances y limitaciones de los métodos de epidemiología molecular basados en el análisis de ácidos nucleicos/ Scope and limitations of molecular methods applied to epidemiological studies

Vílchez, Glenda; Alonso, Guillermina
2009-06-01

Resumen en español La Epidemiología es la rama de la ciencia que se dedica al estudio del origen, la distribución y el control de las enfermedades que afectan a las poblaciones. La Epidemiología Molecular es una nueva rama de la ciencia en la cual se implementan técnicas moleculares en los estudios epidemiológicos. Diversos métodos de genotipificación molecular pueden ser empleados para clasificar a los microorganismos en grupos estrechamente relacionados o divergentes. Entre los mé (mas) todos de genotipificación más usados están: la electroforesis de campo pulsado, la prueba de PCR, la secuenciación del genoma y la hibridación con sondas de DNA. Cada técnica ha ofrecido una alternativa para la investigación epidemiológica; sin embargo, también tienen aplicabilidades limitadas. El presente trabajo tiene como objetivo la revisión de las fortalezas y debilidades de éstas técnicas moleculares utilizadas para la genotipificación Resumen en inglés Epidemiology is a science dedicated to the study of the origin, distribution and control of diseases that affect populations. Molecular Epidemiology is a new branch of science that uses molecular techniques in epidemiological studies. Several molecular genotyping methods can be used to classify microorganisms in closely related or divergent groups. Pulsed-field gel electrophoresis, the PCR test, genomic sequencing, and DNA probe hybridization are the most used techniques (mas) in genotyping. Each technique offers an alternative for epidemiological investigation; nevertheless, they also have limited applications. The objective of this work was to review the strengths and weaknesses of these molecular techniques used for genotyping

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ANALISIS DEL CARIOTIPO Y DETECCIÓN DE LOS GENES 5S y 18S/25S rDNA EN CHAETANTHERA MICROPHYLLA (CASS.) HOOK. ET ARN. (ASTERACEAE)/ KAYYOTYPE ANALYSIS AND DETECTION OF 5S AND 18S/25S rDNA GENE SEQUENCES IN CHAETANTHERA MICROPHYLLA (CASS.) HOOK. ET ARN. (ASTERACEAE)

Baeza, Carlos M; Schrader, Otto
2005-01-01

Resumen en inglés Double fluorescence in situ hybridization was used to examine the karyotype of Chaetanthera microphylla (Cass.) Hook et Arn. from Chile, including the location of 5S and 18S/25S rDNA gene sequences. The species is 2n = 24, with 8m + 4st chromosomes. Signals of 5S and 18/25S rDNA were seen in two of the 12 chromosome pairs: n° 2 and 6

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