Sample records for CELULAS CHO (cho cells)
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Evaluación de la expresión de la proteína precursora de amiloide en células sanguíneas de pacientes con la mutación E280A en el gen de la presenilina 1/ Expression of amyloid precursor protein in peripheral blood cells of patients with the E280A mutation in the presenilin-1 gene

Villegas Lanau, Carlos Andrés; Bedoya Berrío, Gabriel; Toro Castaño, María Fabiola; Madrigal, Lucía; Lopera Restrepo, Francisco
2005-03-01

Resumen en español La enfermedad de Alzheimer es un problema mundial de salud pública. El estudio de los mecanismos moleculares responsables de su aparición permitirá avances terapéuticos y en las técnicas para la evaluación de las personas afectadas y de las que están en riesgo de desarrollar la enfermedad. La mutación E280A en el gen de la Presenilina 1 (PS1) es responsable de una forma grave de la enfermedad de Alzheimer familiar. Con el fin de conocer su efecto sobre la Proteín (mas) a Precursora de Amiloide (PPA), se cuantificó la producción de esta por células de sangre periférica (mononucleares y linfocitos B) de individuos portadores de dicha mutación. Se analizaron cultivos celulares (HeLa y CHO) como controles positivos, y sangre periférica procedente de portadores sanos de la mutación, de portadores afectados y de un grupo control sano, no portador. Todas las células (HeLa, CHO, mononucleares y linfocitos B) se analizaron por citometría de flujo para detectar la PPA en la membrana citoplasmática y en el espacio intracelular. Se halló un nivel mayor de expresión de esta proteína en el interior de las células que en la membrana celular. En células HeLa y CHO los niveles de expresión intracelular fueron muy variables mientras que en los mononucleares fueron uniformemente bajos. Otros trabajos han detectado niveles mayores de la proteína en los enfermos, pero nuestros resultados indican que no hay diferencia entre los controles sanos, los portadores sanos y los portadores enfermos, lo cual indica que la mutación E280A de la PS1 no ejerce un papel directo en la expresión de la PPA en células mononucleares de sangre periférica. Resumen en inglés Alzheimer's disease is a public health problem both in Colombia and worldwide. Study of the molecular mechanisms involved in this disease may allow the development of methods for evaluation and treatment of Alzheimer's disease patients and people at risk. Mutation E280A in the presenilin-1 gene leads to the development of an aggressive form of familial Alzheimer's disease. In order to define the role of such mutation on the expression of Amyloid Precursor Protein in perip (mas) heral blood mononuclear cells and B lymphocytes we carried out a study in three groups of people, namely: healthy carriers of the mutation, affected carriers and healthy non-carriers as controls. Flow cytometry was used for the detection of Amyloid Presursor Protein in cell membranes and intracellulary; HeLa and CHO cells were used as positive controls. Expression level of Amyloid Precursor Protein was higher in the intracellular compartment than in the cell membrane. The levels of expression in the intracellular compartment of HeLa and CHO cells were variable in contrast with those of peripheral blood mononuclear cells in which they were lower but stable. Contrariwise to the results of other authors, who have detected higher levels of Amyloid Precursor Protein in Alzheimer's disease patients, our results revealed no difference between healthy controls and carriers of the E280A mutation in the presenilin-1 gene, either diseased or healthy. Our results show that this mutation does not directly change the expression of Amyloid Precursor Protein in peripheral blood mononuclear cells.

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Obtención de clones recombinantes que expresan las proteínas prM-E-NS1 del virus dengue serotipo 2/ Obtaining recombinant clones expressing dengue virus serotype 2 prM-E-NS1 proteins

Muné Jiménez, Mayra; Harn, Donald; Soto, Yudira; Ramírez, Rosa; Alfonso, Melkis; D´dara, Akran
2008-04-01

Resumen en español OBJETIVO: obtener clones recombinantes que expresen diferentes proteínas del virus dengue 2 en un vector de expresión en células eucariotas. MÉTODOS: se realizó el clonaje de los genes prM, envoltura (E) y 65 aminoácidos (aa) de la proteína NS1 del virus dengue serotipo 2 (cepa Nueva Guinea C) en un vector de expresión en células eucariotas pcDNA (3.1). La obtención de los genes correspondientes a la zona prM/E/NS1 y prM/E truncada en 100 aa se realizó mediante (mas) reacción en cadena de la polimerasa (RCP). La detección de los posibles clones recombinantes se llevó a cabo mediante las técnicas de RCP, análisis de restricción enzimática y secuenciación nucleotídica. Se realizó la transfección de la línea celular CHO con cada plásmido recombinante. Para determinar la expresión transciente de los genes clonados se empleó la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI) y trascripción reversa-RCP (TR-RCP). RESULTADOS: se obtuvieron bandas de 2 202 y 1 600 pares de bases (pb), respectivamente. Se estudiaron 20 posibles colonias recombinantes, de las cuales, 7 resultaron positivas para prM-E-NS1 y 5 para prM/E truncada. Se obtuvieron células fluorescentes 48 h después de transfectadas, además una RCP positiva a ese mismo tiempo, lo que indicó la presencia de las proteínas en las células transfectadas. CONCLUSIONES: el vector empleado fue eficiente para el clonaje y la expresión de las proteínas seleccionadas, por lo que las construcciones genéticas obtenidas pudieran ser evaluadas en animales como posibles candidatos vacunales para la obtención de una vacuna de ADN contra el dengue. Resumen en inglés OBJECTIVE: To obtain recombinant clones expressing different dengue virus 2 proteins in an expression vector of eukaryote cells. METHODS: Cloning of prM genes, E envelope and 65 amino-acids (aa) of dengue virus serotype 2 NS1 proteins (Nueva Guinea strain) in an expression vector of pcDNA eukaryote cells (3.1). The prM/E/NS1 zone and the truncated prM/E zone at 100 aa genes were obtained by polymerase chain reaction (PCR). Possible recombinant clones were detected using P (mas) CR, enzyme restriction analysis and nucleotide sequencing. Transfection of the CHO cell line with each recombinant plasmid was performed. Indirect immunofluorescence and reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) determined the transient expression of cloned genes. RESULTS: Bands of 2 202 and 1 600 base pairs (bp) respectively were obtained. Twenty possible recombinant colonies were studied, 7 of them were pr-E-NSI-positive and 5 truncated prM/E-positive. Fluorescent cells emerged 48 hours after being transfected in addition to positive PCR, all of which indicated that the studied proteins were present in transfected cells. CONCLUSIONS: The used vector proved to be efficient for cloning and expression of the selected proteins; therefore, the obtained genetic constructions could be evaluated in animals as likely vaccinal candidates for a dengue virus DNA vaccine.

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Capacidad protectora de Cymbopogon citratus (DC.) Stapf: ante el daño genético inducido por estrés oxidativo

Cápiro, Nancy; Sánchez-Lamar, Ángel; Fonseca, Gladys; Baluja, Ligia; Borges, Ernesto
2001-03-01

Resumen en español Se estudió el efecto protector de una decocción de las hojas de la planta Cymbopogon citratus (DC.) Stapf. (caña santa o caña de limón) frente al daño genético inducido por los agentes oxidantes H2O2 y etilnitrosourea (ENU). Se utilizó para ello un modelo esperimental in vitro y otro in vivo: cultivo de células de ovario de Hamster chino (CHO) y el insecto Drosophila melanogaster, respectivamente. La capacidad de formar colonias de la línea celular CHO, fue el i (mas) ndicador de toxicidad utilizado para evaluar 5 concentraciones (0,1; 1; 5; 10; 15 %) de la decocción de caña santa, en tanto que el porcentaje de sobrevivencia de adultos se usó para evaluar el efecto tóxico de 4 concentraciones de esta (5; 25; 50; 100 %) sobre las larvas mwh + / + flr³ de Drosophila melanogaster; en ambos casos los resultados evidenciaron efectos tóxicos dependientes de las concentraciones utilizadas. Los estudios citofluorimétricos con diclorofluoresceína-diacetato en células CHO permitieron demostrar la capacidad antioxidante de la decocción de caña santa. Dosis no tóxicas de 0,1; 1 y 5 % produjeron reducciones significativas del estrés oxidativo causado por el H2O2. La genotoxicidad y antigenotoxicidad de diferentes concentraciones de la decocción fueron evaluadas mediante los ensayos de aberraciones cromosómicas en células CHO y el SMART de alas de Drosophila melanogaster. Los resultados de actividad mutagénica obtenidos fueron negativos, en tanto que los correspondientes a la acción protectora de las concentraciones probadas reafirmaron la capacidad antioxidante mostrada por el extracto vegetal Resumen en inglés The protective effect of a decoction of Cymbopogon citratus (DC) Stapf. against genetic damage induced by oxidizing agents H2O2 and ethylnitrosourea was studied. To this end, was used an experimental model in vitro and another in vivo; Chinese Hamster ovary cell culture and Drosophila melanogarster respectively. The colony-forming capacity of CHO cell line was the toxicity indicator used to evaluate 5 Cymbopogon citratus (DC) Stap. decoction concentrations (0,1; 1; 5; 10; (mas) 15 %) whereas the percentage of surviving adult insects was used to asses the toxic effect of 4 concentrations of this extract (5; 25; 50; 100 %) on mwh + 1 + flr³ larvae of Drosophila melanogaster. In both cases, the results revealed concentration dependent toxic effects. The cytofluourimetric studies performed on CHO cells with dischlorofluorescein-diacetate showed the antioxidant capacity of the decoction. Non-toxic doses of 0,1; 1 and 5 % caused significant reductions of H2O2 induced oxidative stress. Genotoxicity and antigenotoxicity of the different decoction concentrations were evaluated by chromosomal aberration detection tests in CHO cell and the SMART of Drosophila melanogastes' wings. The results of the mutagenic activity were negative whereas those of the protective capacity of the tested concentrations confirmed the antioxidant capacity of this vegetal extract

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Evaluación de la producción de beta -amiloide por la mutación E280A en el gen de la presenilina 1/ Evaluation of amyloid-b by the E280A mutation in presenilin gene

Villegas, Andrés; Castañeda, Mónica M; Arias, Luis Fernando; Vieco, Beatriz; Lopera, Francisco; Bedoya, Gabriel
2007-09-01

Resumen en español Introducción. La mutación E280A en el gen de presenilina 1 se encuentra asociada al grupo familiar más grande del mundo con enfermedad de Alzheimer. La presenilina 1 es un componente esencial del complejo g-secretasa, responsable de la producción del péptido beta -amiloide, considerado clave en la fisiopatogenia de la enfermedad. Objetivo. Determinar si la mutación E280A en presenilina 1 incrementa la producción de b-amiloide, como reflejo de la ganancia de funció (mas) n gamma -secretasa. Materiales y métodos. Se evaluaron, por la tinción con rojo congo e inmunohistoquímica, depósitos sistémicos de b-amiloide en tejidos de cadáveres afectados, portadores de la mutación E280A en la presenilina 1 y cadáveres de no afectados. Se cuantificó por la técnica de ELISA el beta -amiloide de 40 y 42 aminoácidos en cultivos de células CHO que expresan la proteína precursora de amiloide, transfectadas con los cADN de presenilina 1 portando las mutaciones M146L, E280A, D E9 y L392V. Resultados. Se encontraron depósitos proteicos en todos los tejidos estudiados y escasos depósitos de beta -amiloide. No se encontró diferencia en la cantidad de depósitos, ni en su localización. No se observó incremento en la producción de beta -amiloide en las células transfectadas con los cADN de presenilina 1 con las mutaciones comparadas con los controles. Conclusiones. La mutación E280A en presenilina 1 no aumentó la producción de beta -amiloide en tejidos periféricos no neuronales o en el modelo in vitro, contrario a lo que sucede en una ganancia de función de gamma -secretasa. Resumen en inglés Introduction. The E280A mutation of the presenilin 1 gene has been found to be the most common associate in Alzheimer’s patients with a family history of this disease. Presenilin 1 is a critical component of the g-secretase complex and plays an essential role in the production of amyloid-beta peptide. This peptide has been strongly associated with the physiopathology of the disease. Objective. The E280A mutation in the presenilin 1 was investigated for increased producti (mas) on of amyloid-beta , as a response to gain in gamma-secretase function. Materials and methods. Levels of systemic amyloid-beta were measured with congo red staining and immuno-histochemistry of the tissues of affected cadavers, compared with non-affected cadavers. The 40 and 42 amino acid amyloid-beta levels were quantified by ELISA assay in CHO cell cultures. The amyloid precursor protein expressed by the cultures was detected by transfection with the cDNAs of presenilin 1 carrying the M146L, E280A, DE9 y L392V mutations. Results. Protein deposits were found in all tissues investigatged, but only a few with beta -amyloid deposition. No differences were observed in the amount or location of amyloid-beta between affected and unaffected cadavers. Not increase was noted in the production of amyloid-beta from the CHO cells transfected with cDNA from any of the mutations of presenilin 1. Conclusions. The E280A mutation in the presenilin 1 gene was not associated with the increased production of amyloid-beta in non-neuronal peripheral tissues, or in the in vitro model. This is in contrast to the expectation in a gamma-secretase gain of function.

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Estudio in vitro de la citotoxicidad y genotoxicidad de los productos liberados del acero inoxidable 316L con recubrimientos cerámicos bioactivos/ Cytotoxic and genotoxic study of in vitro released productos of stainless steel 316L with bioactive ceramic coatings

PAREJA LÓPEZ, ANDRÉS; GARCÍA GARCÍA, CLAUDIA PATRICIA; ABAD MEJÍA, PABLO JESÚS; MÁRQUEZ FERNÁNDEZ, MARÍA ELENA
2007-03-01

Resumen en español El acero inoxidable AISI 316L es el biomaterial mas utilizado para la fabricación de implantes temporales, pero presenta limitaciones para implantes permanentes debido a la liberación de iones metálicos hacia los tejidos circundantes, produciendo especies reactivas de oxígeno (ERO) y daño en ADN, factores que aumentan el riesgo de aparición de tumores locales y fallas mecánicas del implante. Una estrategia utilizada para disminuir la liberación de iones es la modi (mas) ficación superficial de los implantes metálicos por medio de recubrimientos inorgánicos, cerámicos o vítreos, aplicados por el método sol-gel, el cual presenta una serie de ventajas comparativas con otras técnicas de deposición, como buena adherencia, aplicación sencilla, mínimos problemas de secado, bajas temperaturas de densificación y posibilidad de agregar partículas y/o grupos orgánicos que mejoran la adherencia celular al implante aumentando su biocompatibilidad. En el presente trabajo se evaluaron los efectos citotóxico por medio de la técnica MTT, y genotóxico por electroforesis en gel de células individuales (Ensayo Cometa), sobre células de la línea celular CHO, de los productos liberados en medio MEM por el acero inoxidable 316L sin recubrir, recubierto con una monocapa de vidrio de sílice (MC), o con doble capa que contiene partículas bioactivas de hidroxiapatita (HA), vidrio (V) o vitrocerámico (VC), después de un periodo de 30 días. Los resultados muestran que a los 30 días de envejecimiento en medio MEM no se encuentra ningún efecto citotóxico, pero se encontró efecto genotóxico en las probetas de A y MC que no representa un peligro inminente a sistemas celulares. Resumen en inglés The stainless steel AISI 316L is the must used biomaterial for the making of temporal prosthesis, but it presents severe limitations for permanent implants due to the generation and migration of metallic ions to the surrounding peripheral tissues, which produces oxygen reactive species (ERO) and damages of the ADN, increasing the possibility of local tumors and mechanical failure of the implant. A strategy used to minimize the generation of ions is the superficial modific (mas) ation of the implants by means of inorganic coatings, ceramic or vitreous, applied by the sol-gel process; this method has a series of comparative advantages, compared to other deposition methods, as good adherence, easy application, minimum drying problems, low densification temperatures and the possibility of adding particles and/or organic groups that improve the adhesion of the cell to the implant, increasing the biocompatibility. In the present work, the citotoxic effects were valuated by means of the MTT technique, and the genotoxic ones by electrophoresis of individual cell gels (Cometa test), on CHO cells, of the released products in a MEM media, after a period of 30 days, of the stainless steel 316L with no coat, coated with a coat of silica glass (MC), or with two coats of the same glass, containing bioactive particles of hydroxyapatite (HA), glass (V) or glassceramic powder (VC). The results show that there is not citotoxic effects in a test with an aging of 30 days in MEM media; a genotoxic effect was found in the A and MC samples, but without real risk for cell systems.

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El cemento portland y su potencial uso en ingeniería de tejido óseo. Fase I: estudios de biocompatibilidad-efectos del hidróxido de calcio/ Potential applications of portland cement on bone tissue engineering. Phase I: biocompatibility studies-calcium hydroxide effects

Gallego, Daniel; López, Luis Ernesto; Hansford, Derek; Klemas, Jonas
2006-07-01

Resumen en español Actualmente existe una creciente e insatisfecha demanda de substitutos óseos con buen desempeño, tanto desde el punto de vista biológico como mecánico. Basados en las excelentes propiedades mecánico-estructurales del cemento pórtland, se plantea un estudio exploratorio de biocompatibilidad de este material. Se prepararon substratos de cemento pórtland gris tipo I bajo diferentes tratamientos (neutralizado-SN, carbonatado-SC, y no neutralizado-SnN), los cuales fuero (mas) n luego sometidos a un ensayo de contacto directo con células CHO y HOS durante 24 h. Los substratos se caracterizaron por SEM, y tinciones con fnolftaleía para determinar su pH; mientras que la evaluación del estado del cultivo fue realizada por microscopía de contraste de fase. Los resultados indican que el pH fue mayor para SnN (> 12,0), seguido de SN, y finalmente de los SC (≈ 7,4); de igual manera se observó que la citotoxicidad de los substratos disminuyó en proporción al valor del pH. Se postula que el Ca(OH)2 formado durante la hidratación del cemento es el causante del efecto tóxico de éste, y que al agotar las fuentes de Ca(OH)2, ya sea por carbonatación o neutralización, se afecta de manera positiva la biocompatibilidad del cemento pórtland. Resumen en inglés There is an increasing and unfulfilled demand of bone substitutes with optimal mechanical and biological properties. Based on the excellent mechanical and structural properties of Portland Cement, a biocompatibility exploratory study of this material was proposed. Plain substrates were fabricated with Gray Type I Portland Cement under different conditions (Neutralized-SN, Carbonated-SC, not neutralized-SnN), which were then used to conduct a Direct Contact Assay with CHO (mas) and HOS cells for 24h. The substrates were characterized by SEM, and phenolphthalein assays to determine the pH value, while the cell culture assays were evaluated by Phase Contrast Microscopy. The results show that SnN had the highest pH value (> 12,0), followed by SN, and finally by SC (≈ 7,4); it was also observed that the cytotoxicity of the substrates diminished in proportion to the pH value. It is proposed that the cytotoxicity of Portland Cement is caused by the Ca(OH)2 formed during the hydration of this material. Thus, by lowering the amount of Ca(OH)2, either by carbonation or neutralization, the biocompatibility of the material is positively affected.

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Structural diversity and defensive properties of norditerpenoid alkaloids

González-Coloma, Azucena; Reina, Matías; Medinaveitia, Alberto; Guadaño, Ana; Santana, Omar; Martínez Díaz, Rafael; Ruiz-Mesía, Lastenia; Alva, Allenger; Grandez, Maritza; Díaz, Rafael; Gavín, José A.; Fuente, Gabriel de la
2004-07-01

Digital.CSIC (Spain)

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Rapid selection in modified BHK-21 cells of a foot-and-mouth disease virus variant showing alterations in cell tropism

Escarmis Homs, Cristina; Carrillo, Elisa C.; Ferrer, Marcela; García, Juan F.; López, Nora; Tami, Cecilia; Verdaguer, Nuria; Domingo, Esteban; Franze-Fernández, Maria T.
1998-01-01

Digital.CSIC (Spain)

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Pyrrolizidine alkaloids from Canarian endemic plants and their biological effects

Domínguez-Díaz, Dulce; Reina, Matías; Santos-Guerra, Arnoldo; Santana, Omar; Agulló-Ortuño, Teresa; López-Barboa, Carmen; González-Coloma, Azucena
2008-03-01

Digital.CSIC (Spain)

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Podocalyxin enhances the adherence of cells to platelets

Larrucea, Susana; Butta, Nora; Rodríguez Martínez, Ramón B.; Alonso, S.; Arias-Salgado, Elena G.; Ayuso, Matilde S.; Parrilla, Roberto
2007-10-08

Digital.CSIC (Spain)

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Multiple virulence determinants of foot-and-mouth disease virus in cell culture

Baranowski, Eric; Sevilla, Noemí; Verdaguer, Nuria; Ruiz-Jarabo, Carmen M.; Beck, Ewald; Domingo, Esteban
1998-01-01

Digital.CSIC (Spain)

12

Interaction of liver methionine adenosyltransferase with hydroxyl radical

Sánchez-Góngora, Estrella; Ruiz, F.; Mingorance, Jesús; An, W.; Corrales, Fernando J.; Mato, José M.
1997-10-01

Digital.CSIC (Spain)

13

In vitro cytotoxicity of norditerpenoid alkaloids

Inés, Concepción de; Reina, Matías; Gavín, José A.; González-Coloma, Azucena
2006-02-01

Digital.CSIC (Spain)

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Growth hormone protects against radiotherapy-induced cell death

Madrid, Olga; Varea, Silvia; Sánchez Pérez, Isabel; Gómez-García, Lourdes; Miguel, Enrique de; Gómez de Segura, Ignacio A.; Perona Abellán, Rosario
2000-10-01

Digital.CSIC (Spain)

15

Efficient virus extinction by combinations of a mutagen and antiviral inhibitors

Pariente, Nonia; Sierra, Saleta; Lowenstein, Pedro R.; Domingo, Esteban
2001-01-01

Digital.CSIC (Spain)

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Bioactive triterpene derivatives from latex of two Euphorbia species

Mazoir, Noureddine; Benharref, Ahmed; Bailén, María; Reina, Matías; González-Coloma, Azucena
2008-03-04

Digital.CSIC (Spain)

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Bioactive cinchona alkaloids from Remijia peruviana

Ruiz-Mesía, Lastenia; Ruiz-Mesía, Wilfredo; Reina, Matías; Martínez Díaz, Rafael; Inés, Concepción de; Guadaño, Ana; González-Coloma, Azucena
2005-02-23

Digital.CSIC (Spain)

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Antifeedant C20 diterpene alkaloids

González-Coloma, Azucena; Reina, Matías; Guadaño, Ana; Martínez Díaz, Rafael; Díaz, Jesús G.; García Rodriguez, Juan; Alva, Allenger; Grandez, Maritza
2004-09-23

Digital.CSIC (Spain)

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Antifeedant Activity of Some Polygodial Derivatives

Moreno-Osorio, Luis; Cortés, Manuel; Armstrong, Verónica; Bailén, María; González-Coloma, Azucena
2008-01-01

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